α-硫辛酸對(duì)H9c2心肌細(xì)胞低氧及低氧／復(fù)氧損傷的保護(hù)作用及其機(jī)制探討

操全霞，丁旵東

α-硫辛酸對(duì)H9c2心肌細(xì)胞低氧及低氧／復(fù)氧損傷的保護(hù)作用及其機(jī)制探討

操全霞，丁旵東

目的探討α-硫辛酸（α-LA）對(duì)H9c2心肌細(xì)胞低氧及低氧／復(fù)氧損傷的保護(hù)作用及其作用機(jī)制。方法研究包括H9c2心肌細(xì)胞低氧實(shí)驗(yàn)和低氧／復(fù)氧實(shí)驗(yàn)兩部分，分成常氧組、低氧組或低氧／復(fù)氧組、LA組、乙醛脫氫酶抑制劑異黃酮苷（Daidzin）組（Daidzin組）、二甲亞砜（DMSO）溶劑對(duì)照組（DMSO組）。采用噻唑藍(lán)（MTT）比色法檢測(cè)心肌細(xì)胞存活率；微量酶標(biāo)法測(cè)定乳酸脫氫酶（LDH）活性；ELISA法檢測(cè)心肌細(xì)胞乙醛脫氫酶2（ALDH2）活性；硫代苯巴比妥酸法檢測(cè)丙二醛（MDA）水平。結(jié)果與常氧組比較，低氧組及低氧／復(fù)氧組細(xì)胞存活率均下降（P＜0.01），LDH活性及MDA含量均升高（P＜0.01）；與低氧組或低氧／復(fù)氧組比較，LA組細(xì)胞存活率上升（P＜0.01）、ALDH2活性增加（P＜0.05）、LDH活性及MDA含量降低（P＜0.01）；LA組、Daidzin組、DMSO組3組比較，LA組與DMSO組間存活率、ALDH2、LDH、MDA比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；Daidzin組與LA組、DMSO組比較，細(xì)胞存活率及ALDH2活性降低（P＜0.05），LDH活性及MDA含量升高（P＜0.05），差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。結(jié)論α-LA可通過(guò)上調(diào)ALDH2活性并減少過(guò)氧化終產(chǎn)物形成，最終減輕心肌細(xì)胞低氧及低氧／復(fù)氧過(guò)程中的氧化損傷。

α-硫辛酸；異黃酮苷；乙醛脫氫酶；心肌細(xì)胞；低氧；低氧／復(fù)氧

隨著生活水平的提高，冠心病日漸成為威脅人類生命健康的主要疾病。冠狀動(dòng)脈粥樣硬化引起血管管腔狹窄或阻塞是冠心病發(fā)生發(fā)展的主要機(jī)制，經(jīng)皮冠狀動(dòng)脈介入治療（percutaneous coronary intervention，PCI）或冠狀動(dòng)脈旁路移植術(shù)（coronary artery bypass graft，CABG）開(kāi)通嚴(yán)重病變的冠狀動(dòng)脈，進(jìn)行血運(yùn)重建，極大地緩解了冠心病心肌缺血癥狀及預(yù)后。但不適用于PCI或CABG手術(shù)的冠狀動(dòng)脈分支病變所致的心肌缺血，以及“罪犯”血管開(kāi)通后導(dǎo)致的缺血再灌注損傷（ischemia reperfusion injury，IRI）［1］，仍然是困擾臨床工作者的現(xiàn)實(shí)問(wèn)題，如何進(jìn)一步減少心肌缺血或IRI是目前臨床研究關(guān)注的熱點(diǎn)。研究［2－5］表明，自由基損傷在缺血及IRI的發(fā)病機(jī)制中起著關(guān)鍵性作用。Trevisan et al［6］研究心血管病危險(xiǎn)因素時(shí)發(fā)現(xiàn)，心血管危險(xiǎn)因子數(shù)量與氧化應(yīng)激狀態(tài)及抗氧化能力降低呈顯著相關(guān)性。研究［7－8］顯示，乙醛脫氫酶2（aldehyde dehydrogenase 2，ALDH2）能降低大鼠心肌低氧損傷引起的細(xì)胞凋亡及心肌IRI時(shí)氧化應(yīng)激水平，改善其心臟功能，而且對(duì)氧化應(yīng)激導(dǎo)致的神經(jīng)細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞損傷有拮抗作用。α-硫辛酸（alpha-lipoic acid，α-LA）作為ALDH2的激活劑及較強(qiáng)的抗氧化劑，是否對(duì)心肌缺血或IRI起到保護(hù)作用尚不清楚。該實(shí)驗(yàn)通過(guò)H9c2心肌細(xì)胞低氧和低氧／復(fù)氧模型，研究α-LA是否對(duì)H9c2心肌細(xì)胞低氧或低氧／復(fù)氧損傷起到保護(hù)作用并探討其可能作用機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)細(xì)胞株H9c2大鼠心肌細(xì)胞株購(gòu)自上海生命科學(xué)研究院細(xì)胞庫(kù)。

1.2 主要試劑和儀器α-LA（山西亞寶藥業(yè)集團(tuán)股份有限公司）；異黃酮苷（Daidzin）（上海源葉生物科技有限公司）；胎牛血清（杭州四季青公司）；DMEM合成培養(yǎng)基（美國(guó)Hyclone公司）；噻唑藍(lán)（MTT）（美國(guó)Sigma公司）；乳酸脫氫酶（lactate dehydrogenase，LDH）試劑盒及丙二醛（malondialdehyde，MDA）試劑盒（南京建成生物工程研究所）；ALDH2試劑盒（武漢華美生物工程有限公司）；BCA蛋白定量試劑盒（杭州碧云天生物技術(shù)有限公司）；其余試劑為國(guó)產(chǎn)分析純級(jí)；CO2培養(yǎng)箱（美國(guó)Thermo公司）；低氧小室（美國(guó)billups rothenberg inc公司）；倒置相差顯微鏡（日本Olympus公司）。Daidzin溶于二甲亞砜（dimethyl sulfoxide，DMSO）。

1.3 低氧及低氧／復(fù)氧損傷模型的建立［9］低氧模型建立：H9c2心肌細(xì)胞正常培養(yǎng)24 h達(dá)60%～70%融合后，換成不含血清的高糖DMEM培養(yǎng)基培養(yǎng)并置于充滿95%N2、5%CO2的低氧小室內(nèi)37℃培養(yǎng)24 h。低氧／復(fù)氧模型建立：H9c2心肌細(xì)胞正常培養(yǎng)24 h達(dá)60%～70%后，換成不含血清的高糖DMEM培養(yǎng)基培養(yǎng)并置于充滿95%N2、5%CO2的低氧小室內(nèi)37℃培養(yǎng)24 h后，置于37℃、5% CO2的普通培養(yǎng)箱復(fù)氧12 h。

1.4 實(shí)驗(yàn)步驟

1.4.1 H9c2心肌細(xì)胞的培養(yǎng) H9c2細(xì)胞株在含10%胎牛血清高糖DMEM完全培養(yǎng)基中培養(yǎng)（條件為37℃、5%CO2），2～3 d傳代1次，實(shí)驗(yàn)時(shí)取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞。

1.4.2 實(shí)驗(yàn)分組及設(shè)計(jì) 低氧模型分組：常氧組（正常培養(yǎng)24 h后換液，不做任何處理繼續(xù)培養(yǎng)24 h）；低氧組（正常培養(yǎng)24 h后換成不含血清的高糖DMEM培養(yǎng)基培養(yǎng)并置于充滿95%N2、5%CO2的低氧小室內(nèi)培養(yǎng)24 h）；LA組（正常培養(yǎng)24 h后換成不含血清的高糖DMEM培養(yǎng)基培養(yǎng)及1×10－4mol／L［9］的α-LA，置于充滿95%N2、5%CO2的低氧小室內(nèi)培養(yǎng)24 h）；Daidzin組（正常培養(yǎng)24 h后換成不含血清的高糖DMEM培養(yǎng)基培養(yǎng)、1×10－4mol／L的α-LA及60 μmol／L Daidzin［10］，置于充滿95%N2、5%CO2的低氧小室內(nèi)培養(yǎng)24 h）；DMSO組（正常培養(yǎng)24 h后換成不含血清的高糖DMEM培養(yǎng)基培養(yǎng)、1×10－4mol／L的α-LA及DMSO，置于充滿95%N2、5%CO2的低氧小室內(nèi)培養(yǎng)24 h）。

低氧／復(fù)氧模型分組：常氧組（正常培養(yǎng)24 h后換液，繼續(xù)培養(yǎng)36 h，不做任何處理）；低氧／復(fù)氧組（正常培養(yǎng)24 h后，換成不含血清的高糖DMEM培養(yǎng)基培養(yǎng)并置于充滿95%N2、5%CO2的低氧小室內(nèi)培養(yǎng)24 h，置于37℃、5%CO2的普通培養(yǎng)箱復(fù)氧12 h）；LA組（正常培養(yǎng)24 h后，換成不含血清的高糖DMEM培養(yǎng)基培養(yǎng)及1×10－4mol／L的α-LA，置于充滿95%N2、5%CO2的低氧小室內(nèi)培養(yǎng)24 h后，置于37℃、5%CO2的普通培養(yǎng)箱復(fù)氧12 h）；Daidzin組（正常培養(yǎng)24 h后，換成不含血清的高糖DMEM培養(yǎng)基培養(yǎng)、1×10－4mol／L的α-LA及60 μmol／L Daidzin，置于充滿95%N2、5%CO2的低氧小室內(nèi)培養(yǎng)24 h后，置于37℃、5%CO2的普通培養(yǎng)箱復(fù)氧12 h）；DMSO組（正常培養(yǎng)24 h后，換成不含血清的高糖DMEM培養(yǎng)基培養(yǎng)、1×10－4mol／L 的α-LA及DMSO，置于充滿95%N2、5%CO2的低氧小室內(nèi)培養(yǎng)24 h后，置于37℃、5%CO2的普通培養(yǎng)箱復(fù)氧12 h）。

1.5 H9c2心肌細(xì)胞存活率測(cè)定采用MTT［11］比色法檢測(cè)（設(shè)不加細(xì)胞只加孵育液為空白組）。培養(yǎng)96孔板中的H9c2心肌細(xì)胞，接種密度為8 500個(gè)／孔，各組進(jìn)行相應(yīng)處理后，每孔加入MTT溶液（5 mg／ml）10 μl，37℃孵育4 h后移棄培養(yǎng)液，每孔加入150 μl DMSO，振蕩10 min，使結(jié)晶物充分溶解。選擇490 nm波長(zhǎng)，在酶標(biāo)儀上測(cè)定各孔吸光度（absorbance，A）值，計(jì)算細(xì)胞存活率。細(xì)胞存活率（%）＝（A試驗(yàn)組／A對(duì)照組）×100%。

1.6 LDH活性檢測(cè)各組進(jìn)行相應(yīng)處理后，吸取細(xì)胞培養(yǎng)上清液，按照試劑盒說(shuō)明書進(jìn)行檢測(cè)。

1.7 MDA含量檢測(cè)各組進(jìn)行相應(yīng)處理后，吸取細(xì)胞裂解上清液，采用硫代巴比妥酸法測(cè)定MDA，按照試劑盒說(shuō)明進(jìn)行檢測(cè)。

1.8 ALDH2活性檢測(cè)各組進(jìn)行相應(yīng)處理后，吸取細(xì)胞裂解上清液，采用ELISA法測(cè)定ALDH2活性，按照試劑盒說(shuō)明書進(jìn)行檢測(cè)。

1.9 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用SPSS 16.0軟件進(jìn)行分析，所有資料呈正態(tài)分布，所有實(shí)驗(yàn)重復(fù)6次，數(shù)據(jù)以ˉx ±s表示。兩組間比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，多組間比較采用單因素方差分析，組間比較采用SNK-q檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

2.1 α-LA對(duì)心肌細(xì)胞存活率的影響

2.1.1 低氧模型 低氧組與常氧組比較心肌細(xì)胞存活率顯著下降（P＜0.01），LA組與低氧組比較心肌細(xì)胞存活率顯著上升（P＜0.01），表明α-LA能顯著改善心肌細(xì)胞活力。LA組、Daidzin組、DMSO組3組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F＝14.514，P＜0.01）；兩兩比較顯示，Daidzin組與LA組、Daidzin組與DMSO組比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），LA組與DMSO組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P ＞0.05），表明Daidzin具有抑制α-LA改善細(xì)胞活力的作用，DMSO對(duì)α-LA的作用無(wú)影響，見(jiàn)表1。

2.1.2 低氧／復(fù)氧模型 低氧／復(fù)氧組與常氧組比較心肌細(xì)胞存活率顯著下降（P＜0.01），LA組與低氧／復(fù)氧組比較心肌細(xì)胞存活率顯著上升（P＜0.01），表明α-LA能顯著改善心肌細(xì)胞活力。LA組、Daidzin組、DMSO組3組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F＝5.271，P＜0.05）；兩兩比較顯示，Daidzin組與LA組、Daidzin組與DMSO組比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），LA組與DMSO組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），表明Daidzin具有抑制α-LA改善細(xì)胞活力的作用，DMSO對(duì)α-LA的作用無(wú)影響，見(jiàn)表2。

2.2 α-LA對(duì)心肌細(xì)胞LDH的影響

2.2.1 低氧模型 低氧組與常氧組比較心肌細(xì)胞培養(yǎng)上清的LDH活力升高（P＜0.01），LA組與低氧組比較心肌細(xì)胞培養(yǎng)上清的LDH活力顯著降低（P＜0.01），表明α-LA能顯著降低低氧組的LDH釋放率。LA組、Daidzin組、DMSO組3組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F＝18.674，P＜0.01）；兩兩比較顯示Daidzin組與LA組、Daidzin組與DMSO組比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），LA組與DMSO組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），表明Daidzin具有抑制α-LA減少LDH釋放的作用，DMSO對(duì)α-LA的作用無(wú)影響，見(jiàn)表1。

2.2.2 低氧／復(fù)氧模型 低氧／復(fù)氧組與常氧組比較心肌細(xì)胞培養(yǎng)上清的LDH活力升高（P＜0.01），LA組與低氧／復(fù)氧組比較心肌細(xì)胞培養(yǎng)上清的LDH活力顯著降低（P＜0.01），表明α-LA能顯著降低低氧／復(fù)氧組的LDH釋放率。LA組、Daidzin組、DMSO組3組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F＝17.684，P＜0.01）；兩兩比較顯示，Daidzin組與LA組、Daidzin組與DMSO組比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），LA組與DMSO組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），表明Daidzin具有抑制α-LA減少LDH釋放的作用，DMSO對(duì)α-LA的作用無(wú)影響，見(jiàn)表2。

2.3 α-LA對(duì)心肌細(xì)胞MDA的影響

2.3.1 低氧模型 低氧組與常氧組比較心肌細(xì)胞的MDA含量升高（P＜0.01），LA組與低氧組比較心肌細(xì)胞的MDA含量顯著降低（P＜0.01），表明α-LA能顯著降低低氧組的MDA含量。LA組、Daidzin組、DMSO組3組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F＝7.757，P＜0.05）；兩兩比較顯示，Daidzin組與LA組、Daidzin組與DMSO組比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），LA組與DMSO組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），表明Daidzin具有抑制α-LA減少M(fèi)DA含量的作用，DMSO對(duì)α-LA的作用無(wú)影響，見(jiàn)表1。

2.3.2 低氧／復(fù)氧模型 低氧／復(fù)氧組與常氧組比較MDA含量升高（P＜0.01），LA組與低氧／復(fù)氧組比較心肌細(xì)胞的MDA含量顯著降低（P＜0.01），表明α-LA能顯著降低低氧／復(fù)氧組的MDA含量。LA組、Daidzin組、DMSO組3組比較比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F＝23.124，P＜0.01）；兩兩比較顯示，Daidzin組與LA組、Daidzin組與DMSO組比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），LA組與DMSO組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），表明Daidzin具有抑制α-LA減少M(fèi)DA含量的作用，DMSO對(duì)α-LA的作用無(wú)影響，見(jiàn)表2。

2.4 α-LA對(duì)心肌細(xì)胞ALDH2的影響

2.4.1 低氧模型 低氧組與常氧組比較ALDH2含量無(wú)顯著差異（P＞0.05），LA組與低氧組比較ALDH2含量上升（P＜0.05），表明α-LA能顯著增加心肌細(xì)胞ALDH2的含量。LA組、Daidzin組、DMSO組3組比較比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F＝16.376，P ＜0.01）；兩兩比較顯示，Daidzin組與LA組、Daidzin組與DMSO組比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），LA組與DMSO組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P ＞0.05），表明Daidzin具有抑制α-LA增加ALDH2含量的作用，DMSO對(duì)α-LA的作用無(wú)影響，見(jiàn)表1。

2.4.2 低氧／復(fù)氧模型 常氧組與低氧／復(fù)氧組比較心肌細(xì)胞的ALDH2含量無(wú)顯著差異（P＞0.05），LA組與低氧／復(fù)氧組比較ALDH2含量上升（P＜0.05），表明α-LA能顯著增加心肌細(xì)胞ALDH2的含量。LA組、Daidzin組、DMSO組3組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F＝9.231，P＜0.05）；兩兩比較顯示，Daidzin組與LA組、Daidzin組與DMSO組比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），LA組與DMSO組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），表明Daidzin具有抑制α-LA增加ALDH2含量的作用，DMSO對(duì)α-LA的作用無(wú)影響，見(jiàn)表2。

表1 α-LA對(duì)低氧損傷后H9c2心肌細(xì)胞的影響（n＝6，±s）

表1 α-LA對(duì)低氧損傷后H9c2心肌細(xì)胞的影響（n＝6，±s）

與低氧組比較：*P＜0.05；與LA組比較：＃P＜0.05

項(xiàng)目常氧組低氧組LA組Daidzin組DMSO組心肌細(xì)胞存活率（%）100.00±00.00*66.73±2.0683.75±2.48*74.53±3.64＃79.01±5.89 LDH活性（U／L）101.12±21.62*221.78±29.67148.04±29.35*230.78±29.41＃154.04±18.38心肌細(xì)胞MDA含量（nmol／ml）0.555±0.054*1.265±0.0760.766±0.097*1.121±0.146＃0.824±0.107心肌細(xì)胞ALDH2含量（ng／ml）0.300±0.0670.229±0.0540.394±0.014*0.305±0.043＃0.390±0.125

表2 α-LA對(duì)低氧／復(fù)氧損傷后H9c2心肌細(xì)胞的影響（n＝6，±s）

表2 α-LA對(duì)低氧／復(fù)氧損傷后H9c2心肌細(xì)胞的影響（n＝6，±s）

與低氧／復(fù)氧組比較：*P＜0.05；與LA組比較：＃P＜0.05

項(xiàng)目常氧組低氧／復(fù)氧組LA組Daidzin組DMSO組心肌細(xì)胞存活率（%）100.00±00.00*51.75±6.7966.59±5.75*54.91±8.61＃65.04±4.82 LDH活性（U／L）131.14±21.40*261.66±30.11199.28±21.49*274.52±25.72＃206.57±24.7心肌細(xì)胞MDA含量（nmol／ml）0.637±0.058*1.629±0.0621.046±0.069*1.477±0.106＃1.141±0.063心肌細(xì)胞ALDH2含量（ng／ml）0.317±0.1240.303±0.0380.400±0.039*0.283±0.047＃0.383±0.011

3 討論

冠心病的發(fā)生與冠狀動(dòng)脈粥樣硬化的程度有密切關(guān)系，藥物治療可延緩或阻止冠狀動(dòng)脈粥樣硬化病變的發(fā)展，改善心肌供血，減少心絞痛的發(fā)作及心肌梗死的發(fā)生，但對(duì)于冠狀動(dòng)脈嚴(yán)重狹窄甚至閉塞病變，PCI或CABG在血運(yùn)重建方面則起著更為重要的作用，當(dāng)然可能由此導(dǎo)致的心肌IRI仍然備受關(guān)注。心肌IRI是指心肌血供中斷一段時(shí)間后又突然恢復(fù)了血供，原缺血心肌發(fā)生了較血供恢復(fù)前更嚴(yán)重的損傷［12］，心肌再灌注時(shí)產(chǎn)生的大量氧自由基是導(dǎo)致心肌再灌注損傷的主要因素［13］。MDA作為脂質(zhì)過(guò)氧化的代謝產(chǎn)物其含量可以反映細(xì)胞受氧自由基攻擊的嚴(yán)重程度，LDH的活性也是評(píng)價(jià)心肌細(xì)胞低氧及低氧復(fù)氧損傷程度的重要指標(biāo)，MTT是一種可以進(jìn)入活細(xì)胞的染料，吸光度值反映出心肌細(xì)胞內(nèi)線粒體脫氫酶的活性，同時(shí)還間接反映心肌細(xì)胞的存活情況。本實(shí)驗(yàn)低氧組及低氧／復(fù)氧組與常氧組比較，心肌細(xì)胞存活率降低，培養(yǎng)液中LDH活性升高，心肌細(xì)胞MDA含量升高，表明本實(shí)驗(yàn)中心肌細(xì)胞低氧損傷模型和低氧／復(fù)氧模型建立是成功的，為分析ALDH2激活劑α-LA的保護(hù)作用和ALDH2特異性抑制劑Daidzin的干預(yù)作用提供了可靠的基礎(chǔ)。

α-LA作為ALDH2的激活劑，同時(shí)也是一種較強(qiáng)的抗氧化劑，能否在抗低氧或低氧／復(fù)氧損傷方面發(fā)揮重要作用值得進(jìn)一步探討。本研究顯示，與低氧組或低氧／復(fù)氧組比較，α-LA能使低氧或低氧／復(fù)氧心肌細(xì)胞的ALDH2活性顯著增加，LDH、MDA含量顯著下降，從而顯著提高了低氧或低氧／復(fù)氧條件下的細(xì)胞存活率，加入ALDH2特異性抑制劑Daidzin后可顯著抑制α-LA的這一作用，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。為排除Daidzin的溶媒DMSO對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響，增設(shè)DMSO組對(duì)照，顯示DMSO組數(shù)據(jù)與LA組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，說(shuō)明加入Daidzin后對(duì)α-LA保護(hù)作用的抑制系Daidzin對(duì)ALDH2特異性抑制所致。

綜上所述，α-LA可以通過(guò)上調(diào)ALDH2的活性、減少過(guò)氧化終產(chǎn)物的形成，實(shí)現(xiàn)減輕心肌細(xì)胞低氧損傷和低氧／復(fù)氧損傷的目的，為臨床應(yīng)用α-LA治療冠心病缺血損傷和再灌注損傷提供理論依據(jù)。

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The protective effects of alpha-lipoic on H9c2 cardiomyocytes undergoing hypoxia or hypoxia／reoxygenation（H／R）injury and its possible mechanism

Cao Quanxia，Ding Chandong
（Dept of Internal Medicine，The Second Affiliated Hospital of Anhui Medical University，Hefei 230601）

ObjectiveTo investigate the protective effects of alpha-lipoic（α-LA）on H9c2 cardiomyocytes undergoing hypoxia or hypoxia／reoxygenation（H／R）injury and explore its possible mechanisms.MethodsH9c2 cardiomyocytes in hypoxia or H／R injury researches were respectively divided into normal control group，hypoxia or H／R group，hypoxia or H／R＋α-LA group（LA group），hypoxia or H／R＋α-LA＋Daidzin group（Daidzin group）and hypoxia or H／R＋α-LA＋DMSO group（DMSO group）.The myocardial cell survival was detected by MTT，the activity of LDH and ALDH2 were respectively analyzed by microtitration and ELISA，the MDA level was measured by TBA.ResultsCompared to the normal control group，the cell survival rates of hypoxia and H／R group were decreased（P＜0.01），the levels of MDA and LDH were significantly increased（P＜0.01）.Compared to the hypoxia or H／R group，the cell survival rates and ALDH2 activities of LA group were improved（P＜0.05），the levels of MDA and LDH were decreased（P＜0.01）.Compared to the LA group and DMSO group，the cell survival rates and ALDH2 activities of Daidzin group were decreased（P＜0.05），the levels of MDA and LDH were increased（P＜0.05），and no significant differences of all the above measures were found between LA group and DMSO group（P＞0.05）.Conclusionα-LA can protect H9c2 cardiomyocytes from hypoxia or H／R injury by means of upregulating activities of ALDH2 and decreasing hypoxia or H／R induced lipid peroxidation.

alpha-lipoic acid；Daidzin；ALDH2；cardiomyocyte；hypoxia；hypoxia／reoxygenation

R 541.4

A

1000－1492（2015）07－1024－05

2015－03－17接收

安徽省衛(wèi)生廳醫(yī)學(xué)科研課題計(jì)劃（編號(hào)：2010C058）

安徽醫(yī)科大學(xué)第二附屬醫(yī)院綜合內(nèi)科，合肥 230601

操全霞，女，碩士研究生；丁旵東，男，主任醫(yī)師，碩士生導(dǎo)師，責(zé)任作者，E-mail：dcdsunshine＠sina.com