榆莧方對潰瘍性結(jié)腸炎Pim—1、STAT3表達(dá)水平的影響

邱偉　方曉華　楊振斌　殷鴻

[摘要] 目的 探討Pim-1、STAT3蛋白在UC中的表達(dá)情況，并觀察榆莧方對其表達(dá)的影響。 方法 通過免疫組織化學(xué)的方法檢測60例UC患者和50例正常人腸黏膜中Pim-1、STAT3的表達(dá)，并觀察榆莧方灌腸后同一UC患者黏膜中Pim-1、STAT3的表達(dá)。 結(jié)果 UC患者腸黏膜中Pim-1、STAT3陽性表達(dá)率明顯高于正常人，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），且在 UC患者腸黏膜中Pim-1的表達(dá)與STAT3呈正相關(guān)（r=0.512，P<0.05）；UC患者通過榆莧方灌腸后Pim-1、STAT3蛋白的陽性表達(dá)明顯下降，與治療前相比差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。 結(jié)論 Pim-1、STAT3所介導(dǎo)的免疫網(wǎng)絡(luò)與UC的發(fā)生、發(fā)展有關(guān)，榆莧方可干擾Pim-1、STAT3所介導(dǎo)的免疫反應(yīng)，達(dá)到治療的效果。

[關(guān)鍵詞] 榆莧方；潰瘍性結(jié)腸炎；Pim-1；STAT3

[中圖分類號] R574.62 [文獻(xiàn)標(biāo)識碼] B [文章編號] 1673-9701（2015）17-0121-03

潰瘍性結(jié)腸炎（ulcerative colitis，UC）是一種機(jī)制尚不完全明確的非特異性炎癥性疾病，遺傳、免疫、感染等因素在潰瘍性結(jié)腸炎的發(fā)生和發(fā)展中起著重要作用，尤其免疫介導(dǎo)UC越來越得到重視。近年來Pim-1、STAT3因子在免疫系統(tǒng)的作用逐漸受到重視，且與UC炎癥程度密切相關(guān)，可作為評估病情及預(yù)后的重要依據(jù)[1]。UC的治療目前以激素、免疫抑制劑、氨基水楊酸類為主，因副作用多、耐藥性、反跳性，依從性、遠(yuǎn)期療效欠佳，因此尋找安全、高效、價廉的治療方法刻不容緩。我科通過榆莧方灌腸治療，臨床上取得確切療效，可干擾Pim-1、STAT3所介導(dǎo)的免疫網(wǎng)絡(luò)系統(tǒng)，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2010年3月～2013年3月間我院消化科門診與病房患者，均在我院行腸鏡檢查，共60例，病變均位于降結(jié)腸，病情均為活動期，其中位于直腸16例，直乙結(jié)腸12例，左半結(jié)腸32例；初發(fā)型36例，慢性復(fù)發(fā)型12例，慢性持續(xù)型12例；輕度15例，中度18例，重度27例；男32例，平均年齡（34±2）歲；女28例，平均年齡（36±3）歲。60例患者病理標(biāo)本均來自于我院病理科。西醫(yī)診斷：所有患者均符合炎癥性腸病診療治療規(guī)范共識意見關(guān)于 UC 診斷標(biāo)準(zhǔn)。中醫(yī)診斷：符合《潰瘍性結(jié)腸炎中醫(yī)診療共識（2009）》。所有患者需要排除結(jié)腸癌、腸結(jié)核、阿米巴膿腫、克羅恩病、腸易激綜合征、孕婦、嚴(yán)重精神病及嚴(yán)重心、肺功能疾病者。

1.2 方法

選取60例UC患者病理標(biāo)本作為實驗組，另選取正常人病理標(biāo)本50例作為空白對照組，采取免疫組織化學(xué)的方法檢測，步驟按試劑盒進(jìn)行操作。鼠抗人Pim-1蛋白購自上?；脤嶒炗邢薰尽TAT3購自武漢博士德生物有限公司作為一抗，二抗免疫組織化學(xué)試劑盒購自北京生物金橋有效公司，一抗以PBS作為陰性對照。所有實驗組患者給予榆莧方保留灌腸（生地榆50 g、馬齒莧50 g、生苡仁30 g、白頭翁30 g、秦皮30 g、黃柏30 g、仙鶴草30 g、白芨粉5 g，濃煎至100 mL），活動期每日一次灌腸2周，以后隔日一次10周，共12周。同一患者再次檢測治療后Pim-1、STAT3表達(dá)情況，并檢測患者血常規(guī)、肝腎功能指標(biāo)。

1.3 結(jié)果判斷[2]

Pim-1、STAT3蛋白主要在細(xì)胞漿內(nèi)表達(dá)，呈棕色或黃色顆粒狀。每張切片選擇染色良好區(qū)域，隨機(jī)連續(xù)觀察5個高倍視野（×400）， 陽細(xì)胞數(shù)<25%陰性，25%～50%為（+），50%～75%為（++），>75%（+++）。根據(jù)表達(dá)率情況，陰性（-）、弱陽性（+）、陽性（++）、強(qiáng)陽性（+++）分別計分為0、1、2、3分。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法

應(yīng)用SPSS13.0統(tǒng)計學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，計量資料、計數(shù)資料分別采用t檢驗、χ2檢驗，對UC患者腸黏膜中Pim-1、STAT3的表達(dá)進(jìn)行相關(guān)性分析。

2 結(jié)果

2.1 Pim-l、STAT3在UC、正常腸黏膜組織中表達(dá)情況

由表1可以得出，與對照組相比，實驗組中Pim-1、STAT3表達(dá)明顯增高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。

表1 Pim-1、STAT3在UC、正常腸黏膜組織中表達(dá)情況[n（%）]

注：與對照組比較，Δχ2=34.623，ΔP=0.021，*χ2=41.990，*P=0.018

2.2 UC中Pim-1、STAT3的表達(dá)關(guān)系

由表2可以看出，Pim-1蛋白的表達(dá)與STAT3表達(dá)呈正相關(guān)（r=0.512，P=0.036）。

表2 UC中Pim-1、STAT3的表達(dá)關(guān)系

2.3 UC治療前后黏膜組織中Pim-1、STAT3表達(dá)情況

由表3可以看出，與治療前相比，治療后患者Pim-1蛋白、STAT3蛋白表達(dá)明顯下降，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。

表3 UC治療前后黏膜組織中Pim-1、STAT3表達(dá)情況（x±s）

注：與治療前比較，Δt=3.510，ΔP=0.041；*t=3.310，*P=0.028

2.4安全性

所有患者治療后均檢測血常規(guī)、肝腎功能未見明顯異常。

3討論

UC又稱慢性非特異性潰瘍性結(jié)腸炎，病變主要侵及黏膜層，多累及直腸和左半結(jié)腸，也可遍及整個結(jié)腸，且病程較長、復(fù)發(fā)性高、有癌變傾向。UC的發(fā)病原因尚不完全明確，目前認(rèn)為與免疫系統(tǒng)紊亂有關(guān)。Pim-1、STAT3蛋白近年來研究表明在免疫系統(tǒng)中的作用越來越得到重視，Chevaux JB[3]研究表明，Pim-1、STAT3所介導(dǎo)的免疫網(wǎng)絡(luò)在UC的發(fā)生、發(fā)展中起著極重要的作用。被激活的STAT3因子能直接參與Pim-1基因啟動子表達(dá)而使Pim-1基因表達(dá)上調(diào)，通過阻斷Pim-1信號通路對UC急性期有明顯治療作用[4，5]，抑制Th0向Th1、Th17分化。CD4+Th受到外在刺激后分化為Th0細(xì)胞，然后分化為不同的亞群，如Th1、Th2、Th3等。研究表明UC與Th1、Th2型因子上調(diào)有關(guān)[6，7]。早期UC的發(fā)生可能與Thl應(yīng)答有關(guān)，后期則以Th2為主。阻斷Pim-1因子表達(dá)可抑制巨噬細(xì)胞的激活，抑制TLR-2、TLR-4、NF-κB相關(guān)通路所調(diào)控的炎癥因子IL-4、IL-10、IL-12等表達(dá)。研究發(fā)現(xiàn)UC患者TLR-2、TLR-4和NF-κB表達(dá)明顯增加，TLR2通過識別PAMPs從而激活NF-κB活化途徑，在UC的病理生理過程中起到樞紐性作用。隨著UC病理分級程度越高，腸黏膜中NF-κB的表達(dá)越明顯[8-11]。本研究顯示，與正常腸黏膜相比，在UC中Pim-1、STAT3蛋白表達(dá)明顯增高（P<0.05），且Pim-1、STAT3之間的表達(dá)呈正相關(guān)。

祖國醫(yī)學(xué)文獻(xiàn)中并無此病的專門記載，屬腸風(fēng)、痢疾、滯下、大癖瀉、休息痢等范疇，活動期的病機(jī)要點是濕熱蘊腸、氣滯絡(luò)瘀、脂膜血絡(luò)受損而成瘍，肉腐膜瘍?yōu)槠浠静±肀憩F(xiàn)，故以涼血止痢、斂瘡生肌為治療大法。元劉河間對于痢疾曾提出“調(diào)氣則后重自除，行血則便膿血自愈”的治療大法。我科通過多年的研究和臨床實踐，在白頭翁合芍藥湯基礎(chǔ)上進(jìn)行加減，自創(chuàng)中藥復(fù)方?jīng)鲅沽刊彿ㄖ芮{方灌腸，其基本組成為地榆、馬齒莧、白頭翁、秦皮、黃柏、仙鶴草、白芨，諸藥合用，共奏涼血止痢、斂瘡生肌之功，臨床使用中療效顯著。本實驗研究通過分子生物學(xué)的研究從微觀上探究榆莧方的作用，從實驗中可以看出通過榆莧方灌腸治療后UC患者腸黏膜中Pim-1、STAT3表達(dá)明顯下降（P<0.05），且無明顯毒副作用，說明該方具有多靶點修復(fù)潰瘍、調(diào)節(jié)機(jī)體免疫反應(yīng)等多種效應(yīng)。

綜上，潰瘍性結(jié)腸炎的治療難度大，安全、有效、價廉的中醫(yī)中藥成為一種重要的途徑，榆莧方作為我科已多年使用的藥方已在臨床上取得極好的療效，現(xiàn)通過分子水平進(jìn)一步證實其療效的確切性，為今后的臨床應(yīng)用提供新的理論依據(jù)，當(dāng)然，我們?nèi)孕枰M(jìn)一步探索UC免疫網(wǎng)絡(luò)機(jī)制，為更好地指導(dǎo)我們應(yīng)用中藥治療UC提供更多的依據(jù)。

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（收稿日期：2015-03-19）