清胰湯Ⅱ號沖劑對急性胰腺炎小鼠的保護作用及機制*

李　敏，林思思，沈　利，張瑞琴，兌丹華，李永渝△(同濟大學(xué)醫(yī)學(xué)院病理生理教研室，消化系統(tǒng)疾病研究所，上海0009;遵義醫(yī)藥高等?？茖W(xué)校生理教研室，遵義56000;同濟大學(xué)醫(yī)學(xué)院病原生物教研室，上海0009;遵義醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院肝膽胰外科，遵義5600)

清胰湯Ⅱ號沖劑對急性胰腺炎小鼠的保護作用及機制*

李敏1，2，林思思1，沈利3，張瑞琴1，兌丹華4，李永渝1△
(1同濟大學(xué)醫(yī)學(xué)院病理生理教研室，消化系統(tǒng)疾病研究所，上海200092;2遵義醫(yī)藥高等?？茖W(xué)校生理教研室，遵義563000;3同濟大學(xué)醫(yī)學(xué)院病原生物教研室，上海200092;4遵義醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院肝膽胰外科，遵義563003)

［摘要］目的:探討清胰湯Ⅱ號沖劑( QYT)對急性胰腺炎( acute pancreatitis，AP)小鼠的保護作用及機制。方法:成年C57BL/6小鼠24只，雌雄各半，隨機均分為3組。AP組和AP + QYT組首先經(jīng)腹腔注射雨蛙肽( 50 μg/kg)及脂多糖( 10 mg/kg)復(fù)制重癥AP模型，AP組小鼠給予飲用水灌胃，AP + QYT組給予QYT灌胃;正常對照組小鼠給予等量生理鹽水注射及飲用水灌胃。于末次注藥后3 h麻醉處死動物。檢測和分析胰腺組織的病理改變、腸道細菌總數(shù)和分類、Peyer’s結(jié)T淋巴細胞亞群的變化、血漿淀粉酶、白細胞介素6( IL-6)、單核細胞趨化蛋白1( MCP-1)水平以及胰腺和肺臟組織髓過氧化物酶( MPO)活性等。結(jié)果:與對照組相比，AP小鼠的胰腺組織病理學(xué)評分、腸道細菌數(shù)量、血漿淀粉酶活性、IL-6及MCP-1水平、胰和肺組織的MPO活性都有明顯升高( P＜0. 05) ; QYT可在一定程度上逆轉(zhuǎn)AP時相關(guān)指標(biāo)的變化( P＜0. 05)。小腸Peyer’s結(jié)數(shù)量在各組無明顯差異，但AP組的CD3+T淋巴細胞百分比較對照組明顯降低( P＜0. 05)，而且，AP組和AP + QYT組，尤其是后者CD4+T淋巴細胞百分比和CD4+/ CD8+比值較對照組明顯升高( P＜0. 05)。結(jié)論:清胰湯II號沖劑對雨蛙肽和脂多糖誘導(dǎo)的小鼠急性胰腺炎具有明顯的拮抗作用，其機制可能與其抑制炎癥反應(yīng)、促進腸內(nèi)細菌的清除和調(diào)節(jié)腸道T淋巴細胞功能有關(guān)。

［關(guān)鍵詞］清胰湯Ⅱ號沖劑;急性胰腺炎;炎癥介質(zhì);腸道菌群; Peyer’s集合淋巴結(jié)

急性胰腺炎( acute pancreatitis，AP)是各種病因作用下發(fā)生在胰腺組織的急性炎癥性疾病，常常繼發(fā)胰外器官的損傷，是臨床上危急重癥中較難治療的疾病之一［1］。目前對AP的診斷和治療水平已有了很大的提高，然而對部分患者，尤其是重癥急性胰腺炎( severe acute pancreatitis，SAP)患者，治療效果尚不甚滿意，死亡率仍高達30%～50%左右［2］。而急性肺損傷及多器官功能不全綜合征( multiple organ dysfunction syndrome，MODS)是SAP早期死亡的主要原因。研究表明，SAP及其伴發(fā)的急性呼吸窘迫綜合征( acute respiratory distress syndrome，ARDS)和MODS與白細胞介素6( interlukin 6，IL-6)及單核細胞趨化蛋白1 ( monocyte chemoattractant protein 1，MCP-1)等多種炎癥介質(zhì)的作用、T細胞免疫功能和腸道菌群紊亂有關(guān)［3］。因此，揭示AP的發(fā)病機制，積極有效地阻斷AP的發(fā)生發(fā)展一直是相關(guān)領(lǐng)域研究的熱點課題。

清胰湯( Qing Yi Tang，QYT)是我國治療胰腺炎的常用藥方，經(jīng)全國大范圍幾十年的臨床應(yīng)用，已經(jīng)證實清胰湯對各種原因引起的急性胰腺炎具有良好的效果，對重癥胰腺炎的效果也已被肯定［2］。傳統(tǒng)用的清胰湯是以大黃、丹皮、厚樸等8位中藥組方的水煎劑，為了使其更標(biāo)準(zhǔn)化，同時利于患者攜帶和服用，我們經(jīng)過多次實驗，將傳統(tǒng)的清胰湯Ⅱ號湯劑改型為沖劑。前期實驗看到，該沖劑可明顯逆轉(zhuǎn)AP大鼠胰腺組織的損傷，同時可調(diào)整AP引發(fā)的胃腸運動紊亂，包括對胃腸平滑肌電活動及小腸排推運動的改善［4-5］，效果與湯劑的作用相當(dāng)。為了進一步證實該沖劑的療效，闡明其作用的機制，本項目在前期工作的基礎(chǔ)上，復(fù)制重型急性胰腺炎小鼠模型，應(yīng)用清胰湯Ⅱ號沖劑干預(yù)，通過對組織學(xué)損傷評分、胰酶活性、炎癥介質(zhì)水平、腸道細菌數(shù)量以及小腸Peyer’s集合淋巴結(jié)中T淋巴細胞及其亞群水平的變化進行檢測和分析，探討清胰湯Ⅱ號顆粒沖劑治療急性胰腺炎的作用和機制，以為臨床應(yīng)用提供有力的實驗依據(jù)。

材料和方法

1材料

1.1動物成年C57BL/6小鼠24只，體重為20～26 g，雌雄不限，購自南京大學(xué)實驗動物中心。動物在溫度為( 25±2)℃、濕度( 55±5) %的環(huán)境下喂養(yǎng)，整個過程給予標(biāo)準(zhǔn)實驗飲食。

1.2主要試劑及藥物雨蛙肽及脂多糖購自Sigma;中藥清胰湯Ⅱ號沖劑(成分、劑量、產(chǎn)地等見表1)為清胰湯Ⅱ號煎劑濃縮、蒸發(fā)而得顆粒沖劑，其質(zhì)量以規(guī)范藥物制備的每一流程、用高效液相色譜法( high-performance liquid chromatography，HPLC)測定每批次清胰湯Ⅱ號顆粒中大黃素和大黃酚的含量來控制。本實驗所用產(chǎn)品由遵義醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院提供。淀粉酶和髓過氧化物酶( myeloperoxidase，MPO)試劑盒購自南京建成生物試劑公司; ELISA試劑盒購自深圳達科為生物技術(shù)公司。

表1　清胰湯Ⅱ號沖劑成分、用量、藥用部分和產(chǎn)地Table 1.Detailed information on the composition of Qing Yi TangⅡgranule，the used parts and the place of origin

1.3主要儀器Leica DM2500顯微鏡( Leica) ; ELx800酶標(biāo)儀( BioTek) ; BD FACSVerse流式細胞儀( BD)。

2方法

2.1重型急性胰腺炎小鼠模型復(fù)制及分組處理取C57BL/6小鼠24只，雌雄各半，隨機均分為3組:正常對照組( control)、急性胰腺炎組( AP組)和急性胰腺炎+清胰湯Ⅱ號沖劑治療組( AP + QYT組)。各組小鼠自由飲水條件下禁食12 h后接受實驗。用雨蛙肽及脂多糖腹腔注射復(fù)制小鼠AP模型［6］。具體操作方法如下:給小鼠腹腔注射雨蛙肽( 50 μg/ kg)，每小時1次，連續(xù)注射6次;在第6次注射的同時給予脂多糖( 10 mg/kg)腹腔注射。AP + QYT組在第1次雨蛙肽注射前30 min及注射后5 h按0. 1 mL/10 g體重經(jīng)胃管給小鼠飲用水( AP組)或24%濃度的清胰湯Ⅱ號沖劑［4-5］。正常對照組小鼠獲得相同次數(shù)和劑量的生理鹽水腹腔注射以及飲用水灌胃。于末次注射后3 h麻醉處死小鼠，取胰腺、肺、腸組織、小腸Peyer’s結(jié)及血液。

2.2指標(biāo)檢測

2.2.1組織病理學(xué)變化取胰腺組織，固定、包埋、切片，HE染色。光學(xué)顯微鏡下觀察胰腺組織病理改變，采用盲法由病理專業(yè)人員在光鏡下閱片，參照Nathan等［7］標(biāo)準(zhǔn)進行評分。

2.2.2血漿淀粉酶活性取血液抗凝，離心取上清液。血漿淀粉酶活性用化學(xué)試劑盒，按照廠家說明書進行測定。結(jié)果以對照組的值為100%，AP組和AP + QTY組的值分別以對照組的百分比來表示。

2.2.3血漿炎癥介質(zhì)水平用ELISA試劑盒，按照說明書介紹的方法分別檢測血漿IL-6和MCP-1水平，結(jié)果以mg/L表示。

2.2.4胰腺和肺組織髓過氧化物酶活性組織稱重后以生理鹽水按1∶9制成10%勻漿，離心后取上清液，用MPO檢測試劑盒，按照說明書要求進行檢測，計算出單位組織重量中MPO活性。結(jié)果以對照組的值為100%，AP組和AP + QTY組的值分別以對照組的百分比來表示。

2.2.5腸菌檢測在距盲腸上、下1 cm左右取回腸和結(jié)腸各1 cm，稱重，用LB液態(tài)培養(yǎng)基沖洗腸壁，進行大腸桿菌、腸球菌、雙歧桿菌及總細菌數(shù)的培養(yǎng)，培養(yǎng)48 h后作細菌計數(shù)［8］。結(jié)果以每mg組織樣品中含有的細菌菌落總數(shù)( cfu/mg)來表示。

2.2.6小腸Peyer’s結(jié)T淋巴細胞亞群檢測取小腸，記錄Peyer’s結(jié)數(shù)量并摘取之，用機械分離法取得單細胞，進行細胞計數(shù)。取10 μL 1×109/L細胞懸液于EP管，進行血清封閉后加100 μL FACS buffer與CD3-Percp、CD4-FITC和CD8-PE抗體混合液，避光，冰上孵育30分鐘。1 500 r/min離心5 min，棄上清，加200 μL PBS重懸，轉(zhuǎn)移至流式細胞管中，用BD FACSVerse流式細胞儀收集細胞，用FlowJo 7. 6. 1進行數(shù)據(jù)分析，獲得各標(biāo)本中CD3+、CD4+和 CD8+T淋巴細胞，并計算CD4+/CD8+比值。

3統(tǒng)計學(xué)處理

這一創(chuàng)新做法，從2013年起連續(xù)6年被寫入安徽省委一號文件，2017年被原農(nóng)業(yè)部等六部委聯(lián)合發(fā)文向全國推廣，2018年被寫入中央一號文件。為抓好政策扶持和配套服務(wù)，宿州市委、市政府出臺了《關(guān)于扶持農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)化聯(lián)合體發(fā)展的若干政策意見》等文件，市、縣區(qū)兩級財政每年兌現(xiàn)產(chǎn)業(yè)化聯(lián)合體成員各類獎補資金3600多萬元。

統(tǒng)計分析數(shù)據(jù)采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差( mean±SD)或均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)誤( mean±SEM)表示，用SPSS 20. 0統(tǒng)計軟件行單因素方差分析:先采用單因素方差分析，若方差齊，采用LSD的兩兩比較，若方差不齊，則對數(shù)據(jù)進行個案排秩;然后使用個案排秩后的數(shù)據(jù)進行單因素方差分析，并采用LSD的兩兩比較。以P＜0. 05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

結(jié)果

1胰腺組織病理學(xué)

與正常小鼠比較，AP小鼠胰腺組織損傷嚴(yán)重，表現(xiàn)為水腫、出血、腺泡壞死、炎癥細胞浸潤等，組織病理學(xué)評分明顯增高( P＜0. 01)，說明AP小鼠模型復(fù)制成功。清胰湯Ⅱ號沖劑治療使小鼠胰腺組織水腫及炎癥程度減輕，小葉間隙輕度增寬，組織仍可見少量炎癥細胞浸潤，但程度減輕，未見明顯胰腺腺泡壞死;組織評分較AP組顯著降低( P＜0. 01)。結(jié)果表明，清胰湯Ⅱ號沖劑能夠改善AP時胰腺組織的炎癥和損傷，見圖1。

Figure 1.Effects of Qing Yi TangⅡgranule ( QYT) on the pathological changes ( HE staining，×400) and histological scores of pancreas sections from mice with acute pancreatitis ( AP).Mean±SEM.n = 3.＊＊P＜0. 01 vs control;##P＜0. 01 vs AP group.圖1　清胰湯Ⅱ號沖劑對AP小鼠胰腺組織病理變化的影響

2血漿淀粉酶活性的變化

血漿淀粉酶的檢測結(jié)果顯示，AP組小鼠血漿淀粉酶活性較正常小鼠明顯升高( P＜0. 01)，進一步證實AP模型復(fù)制成功;清胰湯Ⅱ號沖劑治療可明顯降低血漿淀粉酶的活性( P＜0. 01)，見圖2。

3血漿炎癥介質(zhì)水平的變化

Figure 2.Effect of QYT on amylase activity in plasma from mice with AP.Mean±SEM.n =6.＊＊P＜0. 01 vs control;##P＜0. 01 vs AP group.圖2　清胰湯Ⅱ號沖劑對AP小鼠血漿淀粉酶活性的影響

Figure 3.Effects of QYT on levels of inflammatory mediators in the plasma of mice with AP.Mean±SEM.n = 6.＊＊P＜0. 01 vs control;#P＜0. 05，##P＜0. 01 vs AP group.圖3　清胰湯Ⅱ號沖劑對AP小鼠血漿炎癥介質(zhì)水平的影響

4胰腺和肺組織髓過氧化物酶活性的變化

與正常對照組比較，AP組小鼠肺臟組織的髓過氧化物酶活性明顯升高( P＜0. 05)，在胰腺組織的升高更為顯著( P＜0. 01)，與圖1 HE染色所示的胰腺組織中炎細胞增多相一致; AP + QYT組小鼠無論肺臟，還是胰腺組織的MPO活性都較AP組顯著降低( P＜0. 05)。結(jié)果提示，清胰湯Ⅱ號沖劑能夠明顯降低AP時中性粒細胞在胰腺和肺臟的浸潤，見圖4。

Figure 4.Effect of QYT on MPO activity in pulmonary ( A) and pancreatic ( B) tissues of mice with AP.Mean± SEM.n = 6.*P＜0. 05，＊＊P＜0. 01 vs control;#P＜0. 05，##P＜0. 01 vs AP group.圖4　清胰湯Ⅱ號沖劑對AP小鼠肺和胰腺組織MPO活性的影響

5腸道菌群的變化

與對照組相比，AP組小鼠回腸和結(jié)腸中的大腸桿菌、腸球菌、雙歧桿菌以及總細菌數(shù)都明顯增多，其中大腸桿菌和腸球菌增多更明顯，差異有統(tǒng)計學(xué)意義( P＜0. 05)。清胰湯Ⅱ號沖劑干預(yù)后，各類細菌較AP組均顯著減少( P＜0. 01)，表明清胰湯Ⅱ號沖劑有利于腸道細菌的清除，見表2。

6小腸Peyer’s結(jié)T淋巴細胞亞群的改變

圖5為流式細胞術(shù)檢測小鼠腸道Peyer’s T淋巴細胞的代表圖，可見其中CD3+T淋巴細胞的變化，與對照組比較，AP組最低，AP + QYT組降低不明顯。將各組CD3+細胞再分類，得到亞型CD4+T淋巴細胞和CD8+T淋巴細胞所占百分比。與對照組比較，AP組和AP + QYT組CD4+T淋巴細胞所占比例明顯增加( P＜0. 01)，CD4+/CD8+比值也增加，AP + QYT組更明顯( P＜0. 05)。這提示清胰湯Ⅱ號沖劑可能有提高CD4+T淋巴細胞、改善細胞免疫功能的作用，見圖5、表3。

表2　清胰湯Ⅱ號對治療急性胰腺炎小鼠腸道菌群的影響Table 2.Effects of QYT on the intestinal microflora in ileum and colon from mice with AP ( cfu/mg.Mean±SEM.n =6)

Figure 5.Changes of CD3+T lymphocyte percentage in the intestinal Peyer’s patches from mice with AP ( representative figures captured from flow cytometry measurement).圖5　腸道Peyer’s結(jié)CD3+淋巴細胞百分?jǐn)?shù)變化的流式圖

表3　腸道Peyer’s結(jié)T淋巴細胞亞群的變化Table 3.Changes of T lymphocytes in the intestinal Peyer’s patches from mice with AP.( Mean±SD.n =6)

討論

急性胰腺炎的發(fā)病機制復(fù)雜，涉及多環(huán)節(jié)、多因素，包括胰酶的過早激活及胰腺組織自身消化、自由基的損傷作用、鈣超載，以及炎癥介質(zhì)、促炎細胞因子的大量釋放等［9-10］。如何有效防治急性胰腺炎，尤其是控制病變從局部向遠隔器官的擴散，以及機體多個器官系統(tǒng)的受累及MODS，一直是基礎(chǔ)和臨床的研究課題。雨蛙肽是膽囊收縮素( cholecystokinin，CCK)的類似物，有研究表明它可與胰腺細胞的CCK-A低親和受體結(jié)合，引起胰酶的分泌，大劑量使用可誘導(dǎo)AP發(fā)生［11］。內(nèi)毒素主要成分是脂多糖，作用于機體后可促使巨噬細胞和白細胞產(chǎn)生白細胞介素1、6、8和腫瘤壞死因子α等炎癥介質(zhì)，還可直接損傷血管內(nèi)皮細胞，使小血管擴張、通透性發(fā)生改變，造成微循環(huán)障礙，從而加重胰腺組織的損害。我們用雨蛙肽及脂多糖腹腔注射復(fù)制重型急性胰腺炎小鼠模型［6］，通過胰腺病理切片觀察到組織明顯炎癥及損傷，大量淀粉酶釋放入血，同時有血漿促炎細胞因子水平增高以及遠隔器官肺臟的炎細胞浸潤，證明急性胰腺炎小鼠模型復(fù)制成功。

急性胰腺炎往往累及肺，肺損傷是AP的嚴(yán)重并發(fā)癥，當(dāng)AP合并ARDS時病人的死亡率非常高。肺損傷的機制主要是由于炎癥的播散，中性粒細胞、單核巨噬細胞、淋巴細胞的激活和移行，引發(fā)炎癥介質(zhì)和氧化應(yīng)激分子大量產(chǎn)生所導(dǎo)致［12］?？梢?，炎癥細胞浸潤在AP并發(fā)急性肺損傷的發(fā)生機制中起著重要的作用。AP也常常累及胃腸道，引起胃腸道運動功能減弱，腸內(nèi)容物排空受阻，導(dǎo)致細菌過度生長，加上腸道機械屏障、免疫屏障功能的改變，可出現(xiàn)腸道菌群的紊亂和移位［13］。腸道細菌移位進一步刺激機體免疫細胞和炎癥相關(guān)的信號通路，釋放過量的細胞因子和炎癥介質(zhì)，這些物質(zhì)又造成對胰腺等組織器官第2次打擊，可能誘發(fā)MODS。這些變化在本實驗AP小鼠中也不同程度地發(fā)生。因此，改善胃腸運動功能和保護腸道屏障是AP治療的重要環(huán)節(jié)。

通過多年的實驗研究及臨床經(jīng)驗，已經(jīng)證明中藥復(fù)方清胰湯對AP動物及患者的治療作用。有報道，清胰湯能明顯降低AP時IL-1、IL-6等促炎細胞因子的表達和釋放，阻斷其觸發(fā)的一系列連鎖反應(yīng)［14-15］。研究表明，清胰湯能減輕胰腺炎引發(fā)的多方面的病理生理變化，維護腸黏膜屏障功能，減少腸道細菌移位和感染的發(fā)生機會，其保護機制可能是通過促進腸蠕動以促進細菌和毒素排泄，調(diào)整腸道微生態(tài)平衡，減輕內(nèi)毒素和各種細胞因子的損傷，并調(diào)節(jié)機體的免疫功能等綜合作用來實現(xiàn)的［8，16］。本實驗用標(biāo)準(zhǔn)化的、同時利于患者攜帶和服用的清胰湯Ⅱ號沖劑治療AP，效果得到進一步的肯定，主要實驗依據(jù)及可能的作用機制包括: ( 1)明顯減輕AP動物胰腺組織的水腫、出血和壞死程度以及炎細胞的浸潤; ( 2)降低血漿淀粉酶活性; ( 3)下調(diào)炎癥介質(zhì)IL-6、MCP-1的血漿水平，進而可能阻斷由其觸發(fā)的一系列炎癥連鎖反應(yīng); ( 4)減輕肺部炎細胞浸潤。本研究結(jié)果表明，AP小鼠肺組織中MPO活性明顯增高，給予清胰湯Ⅱ號沖劑的小鼠，肺組織的MPO活性顯著降低，提示肺部中性粒細胞的浸潤減少，炎癥減輕; ( 5)促進腸內(nèi)細菌的清除。清胰湯Ⅱ號加重了大黃等藥物的用量，具有通里攻下、清熱解毒、疏肝理氣等功能，可促進排便、抑制腸道細菌的增殖。我們之前的研究還發(fā)現(xiàn)，清胰湯可增加胃動素的分泌，提高胃腸的蠕動，從而促進腸內(nèi)毒物的排泄［17］; ( 6)增強小腸免疫屏障功能。小腸Peyer’s結(jié)是腸道免疫屏障的重要組成部分，從其中淋巴細胞亞群的分類，反映出AP時腸道細胞免疫功能有改變。在清胰湯Ⅱ號沖劑治療組小鼠，其小腸Peyer’s結(jié)的CD3+T淋巴細胞百分比增加，其亞群CD4+細胞比例以及CD4+/ CD8+比值也增高。結(jié)合前面清胰湯Ⅱ號沖劑改善AP胰腺組織的損傷，下調(diào)血漿炎癥介質(zhì)，抑制炎細胞浸潤等功能，提示清胰湯Ⅱ號沖劑可能有改善腸道免疫屏障功能的作用。已知，CD3 T淋巴細胞中包括CD4和CD8T淋巴細胞，CD4為輔助/誘導(dǎo)T淋巴細胞( Th/Ti)，Ti細胞誘導(dǎo)細胞的成熟，這類細胞在細胞免疫的效應(yīng)階段產(chǎn)生多種淋巴因子，導(dǎo)致炎癥反應(yīng)，適度的炎癥反應(yīng)可加速消除抗原物質(zhì)。CD8+細胞可對靶細胞產(chǎn)生細胞介導(dǎo)的細胞毒作用，且對CD4+細胞具有調(diào)節(jié)作用。CD4+/ CD8+比值反映細胞免疫功能狀態(tài)［18］。藥理研究揭示，大黃中的有效成分大黃素對淋巴細胞外鈣內(nèi)流有明顯促進作用，可增強淋巴細胞免疫功能［19］。至于高比例的CD4+T淋巴細胞中又有哪些亞群在行使主要作用，我們將進一步探究，包括對分泌IL-10、γ-干擾素或IL-17的CD4+T淋巴細胞的數(shù)量和功能的研究，以揭示清胰湯Ⅱ號沖劑改善腸道免疫屏障功能的作用機制。

［參考文獻］

［1］魚毛毛，劉金姣，王雨楠，等.葡萄多酚對雨蛙肽誘導(dǎo)的急性胰腺炎胰腺組織的保護作用［J］.中國病理生理雜志，2014，30( 10) : 1820-1826.

［2］宋勝江，湯禮貴，戴華衛(wèi)，等.清胰湯對實驗性重癥胰腺炎大鼠炎癥介質(zhì)的影響［J］.福建中醫(yī)藥，2010，41 ( 2) : 44-45.

［3］李振華，王湘英.重癥急性胰腺炎腸黏膜屏障功能障礙細菌易位的研究現(xiàn)狀［J］.中國普通外科雜志，2011，20( 3) : 286-291.

［4］Li Y，Sibaev A，Zhou M，et al.The Chinese herbal preparation Qing Yi Tang ( QYT) improves intestinal myoelectrical activity and increases intestinal transit during acute pancreatitis in rodents［J］.Phytother Res，2007，21 ( 4) : 324-331.

［5］周明正，李永渝，朱國英，等.清胰湯制劑對急性胰腺炎大鼠胃腸肌電活動變化的作用［J］.同濟大學(xué)學(xué)報醫(yī)學(xué)版，2006，27( 4) : 4-8.

［6］Li YY，Stephanie O，Gao ZR，et al.Regulation of HSP60 and the role of MK2 in a new model of severe experimental pancreatitis［J］.Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol，2009，297( 5) : G981-G989.

［7］Nathan JD，Peng RY，Wang Y，et al.Primary sensory neurons a common final pathway for inflammation in experimental pancreatitis in rats［J］.Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol，2002，283( 4) : G938-G946.

［8］吳承堂，黎沾良，黃祥成，等.中藥清胰湯及雙歧桿菌合劑對急性壞死性胰腺炎腸道細菌移位影響的比較研究［J］.世界華人消化雜志，1999，7( 6) : 69-72.

［9］林旭紅，李永渝.急性胰腺炎發(fā)病機制及相關(guān)治療的研究進展［J］.中國病理生理雜志，2010，26( 5) : 1029-1032.

［10］Li K，F(xiàn)eng JY，Li YY，et al.Anti-inflammatory role of cannabidiol and O-1602 in cerulein-induced acute pancreatitis in mice［J］.Pancreas，2013，42( 1) : 123-129.

［11］馮佳燕，李琨，林旭紅，等.新型大麻制劑O-1602 和CBD減輕小鼠實驗性急性胰腺炎的機制研究［J］.中國病理生理雜志，2011，27( 3) : 539-544.

［12］兌丹華，彭慈軍，趙鵬，等.清胰Ⅱ號對香豬重癥急性胰腺炎胰肺損害的保護作用［J］.消化外科，2004，3( 6) : 394-395.

［13］兌丹華，彭慈軍，高占峰，等.清胰湯對香豬重癥急性胰腺炎并發(fā)內(nèi)毒素血癥的防治實驗研究［J］.遵義醫(yī)學(xué)院學(xué)報，2004，27( 4) : 343-346.

［14］李永渝，高占峰，兌丹華，等.清胰湯和漢防己甲素對香豬重癥急性胰腺炎的治療作用及血藥濃度測定［J］.中國中西醫(yī)結(jié)合雜志，2003，23( 11) : 832-836.

［15］朱國英，李永渝，李學(xué)禮.急性胰腺炎大鼠胰、肝組織IκBα的表達及中藥新清胰湯的影響［J］.中國病理生理雜志，2006，22( 12) : 2438-2442.

［16］郁燕.雙歧桿菌聯(lián)合清胰湯防治重癥胰腺炎患者腸道菌群失調(diào)［J］.內(nèi)蒙古中醫(yī)藥，2014，33( 6) : 72-73.

［17］李永渝，高占峰，兌丹華，等.粉防己堿、清胰湯對重癥急性胰腺炎豬血胃泌素、胃動素的影響［J］.胰腺病學(xué)，2004，4( 1) : 5-9.

［18］Haga Y，Tempero MA，Zetterman RK.Unconjugated bilirubin inhibits in vitro cytotoxic T lymphocyte activity of human lymphocytes［J］.Biochim Biophys Acta，1996，1317 ( 1) : 65-70.

［19］高峰，張中平，陳育健，等.清胰湯對急性胰腺炎患者細胞免疫功能的影響［J］.中國中醫(yī)急癥，2006，15 ( 5) : 476-477.

Chinese herbal preparation Qing Yi TangⅡgranule protects against experimental acute pancreatitis in mice

LI Min1，2，LIN Si-si1，SHEN Li3，ZHANG Rui-qin1，DUI Dan-hua4，LI Yong-yu1
(1Department of Pathophysiology，Institute of Digestive Disease，Tongji University School of Medicine，Shanghai 200092，China;2Department of Physiology，Zunyi Medical and Pharmaceutical College，Zunyi 563000，China;3Department of Pathogen Biology，Tongji University School of Medicine，Shanghai 200092，China;4Department of Hepato-Biliary-Pancreatic Surgery，Affiliated Hospital of Zunyi Medical College，Zunyi 563003，China.E-mail: liyongyu@ #edu.cn)

［ABSTRACT］AIM: To investigate the protect effect of Chinese herbal preparation，Qing Yi TangⅡgranule ( QYT)，on acute pancreatitis ( AP) mice and its mechanism.METHODS: Adult male and female C57BL/6 mice ( n = 24) were randomly divided into control group，AP group and AP + QYT group.Severe AP was induced by combined intraperitoneal injection of caerulein ( 50 μg/kg) and lipopolysaccharide ( LPS; 10 mg/kg).Drinking water or 24% QYT solution was given to the mice in AP group or AP + QYT group by oral gavage.The mice in control group were intraperitoneally injected with equivalent volume of normal saline and gavaged with water.The mice were sacrificed 3 h after the last injection.Severity of AP was assessed by biochemical markers and histology.The plasma level of IL-6 and MCP-1，and lung myeloperoxidase ( MPO) levels were determined for assessing the extent of systemic inflammatory response.The intestinal microflora，T lymphocytes and T-lymphocyte subgroups were examined for assessing the function of the intestinal barrier.RESULTS: Compared with control group，the mice in AP group presented significant increases in pathological histological scores，plasma amylase activity and IL-6 and MCP-1 levels，as well as the MPO activity in the lung and pancreatic tissues.QYT attenuated these changes to some extent.Furthermore，the increased intestinal microflora was significantly reversed by QYT.No difference of the numbers of Peyer’s patches in small intestine in the 3 groups was observed，but the percentage of CD3+T lymphocytes decreased significantly in AP group，and increased percentage of CD4+and CD4+/CD8+ratio were found in AP group and AP + QYT group.CONCLUSION: QYT protects against cearulein and LPS-induced acute pancreatitis in mice.The mechanisms may be related to the suppression of the inflammatory response，promoting intestinal bacteria removal，and regulating the functions of T lymphocytes in the intestinal barrier.

［KEY WORDS］Qing Yi TangⅡgranule; Acute pancreatitis; Inflammatory mediators; Intestinal microflora; Peyer’s patches

通訊作者△Tel: 021-65981021; E-mail: liyongyu@ #edu.cn

*［基金項目］國家自然科學(xué)基金資助項目( No.81270477)

［收稿日期］2015-01-12［修回日期］2015-04-03

［文章編號］1000-4718( 2015)07-1282-06

［中圖分類號］R363. 2

［文獻標(biāo)志碼］A

doi:10.3969/j.issn.1000-4718.2015.07.023