老年患者胰腺癌組織中USP9X 的表達(dá)及其臨床意義

張秀忠，丁偉超，張蓬波，張 沖，任澤強(qiáng)

0 引 言

近年來，我國的胰腺癌發(fā)病率已呈逐漸上升趨勢［1］。迄今為止，胰腺癌仍是最難診斷和治療的惡性腫瘤之一［2－3］。因其具有臨床癥狀的不典型和發(fā)病較隱匿等特點(diǎn)，加之老年人對腹部疼痛不適等癥狀不敏感，對早期發(fā)現(xiàn)疾病造成很大困難。因此，分析研究老年患者胰腺癌的發(fā)病機(jī)制、探索有效的早期診斷指標(biāo)及預(yù)后評價指標(biāo)有重要的臨床意義。本研究應(yīng)用免疫組織化學(xué)鏈霉菌抗生物素蛋白-過氧化物酶連結(jié)法(streptavidin-perosidase，SP)對老年患者胰腺癌組織進(jìn)行泛素特異性蛋白酶9X(ubiquitin-specific protease 9X，USP9X)檢測，旨在探討USP9X 的表達(dá)與老年患者胰腺癌的發(fā)生、發(fā)展及預(yù)后的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集我院2006－2010 年行根治性手術(shù)切除的老年患者(年齡≥60 歲)胰腺導(dǎo)管腺癌標(biāo)本30 例。其中，男18 例，女12 例，年齡60 ～85歲，平均年齡(68.93±6.78)歲。高分化+中分化腺癌和低分化腺癌分別為22 例和8 例;TNM 分期Ⅰ期和Ⅱ～Ⅳ期分別為15 例和15 例。選取距離腫瘤邊緣2 cm 以上的組織作為癌旁非腫瘤標(biāo)本。所有患者均獲隨訪，隨訪日期截止至2013 年12 月，隨訪方式為電話、書信隨訪或/和門診復(fù)查。納入標(biāo)準(zhǔn):①經(jīng)病理診斷為原發(fā)性胰腺導(dǎo)管腺癌;②術(shù)前均未行放療、化療及免疫治療。排除標(biāo)準(zhǔn):①其他病理類型的胰腺癌;②術(shù)前行其他特殊治療者。

1.2 主要實(shí)驗(yàn)試劑和儀器 兔抗人USP9X 單克隆抗體、鏈霉素抗生物素蛋白-過氧化物酶(SP)試劑盒、濃縮型3，3-二氨基聯(lián)苯胺(DAB)顯色劑均購于北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司;所使用免疫組織化學(xué)專用濕盒購于海門志達(dá)實(shí)驗(yàn)器材公司，抗原修復(fù)盒購于北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司，光學(xué)顯微鏡購于日本Olympus 公司，正置熒光顯微鏡購于尼康(中國)公司。

1.3 免疫組織化學(xué)檢測 采用SP 法，具體步驟按照SP 試劑盒說明書進(jìn)行。USP9X 抗體工作濃度為1∶100，4 ℃過夜。細(xì)胞質(zhì)和/或細(xì)胞膜染成棕黃色為陽性。每張切片任選5 個400 倍光鏡視野觀察。免疫組織化學(xué)結(jié)果評分［4］如下:不著色計0 分，淺黃色計1 分，棕黃色計2 分，棕褐色計3 分;著色細(xì)胞占計數(shù)細(xì)胞的百分率為0 計0 分，≤10%計1 分，10%～50%計2 分，51%～80%計3 分，≥80%計4 分;每張切片平均染色程度得分與平均染色細(xì)胞百分率得分各自相乘為最后得分;≤4 分為陰性，＞4 分為陽性。

1.4 統(tǒng)計學(xué)分析 采用SPSS16.0 軟件進(jìn)行統(tǒng)計分析，定性資料采用χ2檢驗(yàn)或Fisher 確切概率法。單因素與多因素生存分析采用Cox 比例風(fēng)險模型(單因素分析中P ＜0.05 的變量納入多因素分析)。以P≤0.05 為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 USP9X 的表達(dá)及其與臨床病理指標(biāo)的關(guān)系

30 例胰腺癌組織中17 例USP9X 表達(dá)陽性，陽性率56.7%，癌旁非腫瘤組織中均未見USP9X 表達(dá)，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P ＜0.05)。見圖1。

USP9X 的表達(dá)與患者的性別、年齡、腫瘤部位、腫瘤大小及腫瘤分化程度無關(guān)(P ＞0.05)，而與有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及TNM 分期顯著相關(guān)(P ＜0.05)。見表1。

圖1 USP9X 在胰腺癌組織中的陽性表達(dá)(SP ×400)Figure 1 USP9X positive expression in pancreatic carcinoma tissue(SP ×400)

表1 USP9X 的表達(dá)與臨床病理指標(biāo)的關(guān)系(n)Table 1 The relationship between expression of USP9X and clinicopathological parameters(n)

2.2 老年胰腺癌患者預(yù)后的COX 比例風(fēng)險分析單因素COX 比例風(fēng)險分析顯示，TNM 分期、有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及USP9X 表達(dá)影響胰腺癌患者臨床預(yù)后(P ＜0.05)。見表2。

多因素COX 比例風(fēng)險分析顯示，TNM 分期、有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及USP9X 表達(dá)是影響預(yù)后的獨(dú)立危險因素(P ＜0.05)。見表3。

表2 老年胰腺癌患者的單因素COX 比例風(fēng)險分析Table 2 The univariate Cox proportional hazards analysis in pancreatic carcinoma of elderly patients

表3 老年胰腺癌患者的多因素COX 比例風(fēng)險分析Table 3 The multivariate Cox proportional hazards analysis in pancreatic carcinoma of elderly patients

3 討 論

作為去泛素化酶家族的亞家族泛素特異性蛋白酶的成員之一［5－6］，USP9X 與一些腫瘤的生物學(xué)行為密切相關(guān)［7－8］。Schwickart 等［9］研究表明，USP9X通過穩(wěn)定抗凋亡蛋白MCL-1，從而促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的生長;同時也可通過穩(wěn)定凋亡信號調(diào)控激酶，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞凋亡［10］。Trivigno 等［11］研究認(rèn)為，USP9X 穩(wěn)定抗凋亡蛋白MCL-1，可能是腫瘤細(xì)胞對放療產(chǎn)生耐受的機(jī)制之一。而Harris 等［12］研究發(fā)現(xiàn)，通過降低USP9X 表達(dá)，可以激活結(jié)腸癌細(xì)胞的凋亡信號通路，并增強(qiáng)5-氟尿嘧啶(5-FU)的化療作用。

眾所周知，胰腺癌是一種發(fā)展十分迅速、惡性程度極高的消化系腫瘤，因其早期診斷困難且預(yù)后差，已成為威脅人類健康的重要疾病之一［13－14］。關(guān)于USP9X 與胰腺癌的關(guān)系，既往報道少見。本研究應(yīng)用免疫組織化學(xué)SP 法對老年患者胰腺癌組織進(jìn)行USP9X 檢測。結(jié)果顯示:30 例胰腺癌組織中17 例USP9X 表達(dá)陽性，陽性率56.7%，癌旁非腫瘤組織中未見表達(dá)，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P ＜0.05);USP9X 的表達(dá)與患者的性別、年齡、腫瘤部位、腫瘤大小及腫瘤分化程度無關(guān)(P ＞0.05)，而與有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及TNM 分期顯著相關(guān)(P ＜0.05)。USP9X 在胰腺癌組織中表達(dá)陽性，在癌旁非腫瘤組織中不表達(dá)，提示USP9X 在老年患者胰腺癌的發(fā)生中發(fā)揮了重要作用;胰腺癌組織中USP9X 表達(dá)與有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及TNM分期顯著相關(guān)，提示USP9X 在老年患者胰腺癌的發(fā)展過程中也發(fā)揮重要作用，USP9X 表達(dá)陽性的胰腺癌組織可能具有更強(qiáng)的侵襲性。此外，COX 比例風(fēng)險分析顯示，TNM 分期、有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及USP9X 表達(dá)是影響預(yù)后的獨(dú)立危險因素(P ＜0.05)。

綜上所述，USP9X 在老年患者胰腺癌的發(fā)生、發(fā)展及預(yù)后中發(fā)揮重要作用，有望成為胰腺癌有效的診斷與預(yù)后評價指標(biāo)，有助于指導(dǎo)老年胰腺癌患者術(shù)后的綜合治療與隨訪，改善患者的預(yù)后。

［1］ 許娟娟，劉 詩，易粹瓊.胰腺癌的研究進(jìn)展［J］.臨床消化病雜志，2012，24(2):117-120.

［2］ 徐 冬.凋亡抑制基因Survivin 在胰腺癌中的研究進(jìn)展［J］.醫(yī)學(xué)研究生學(xué)報，2013，26(3):319-322.

［3］ 丁偉超，張蓬波，張秀忠.胰腺癌組織中survivin 的表達(dá)及與預(yù)后的關(guān)系［J］.中國普通外科雜志，2014，23(3):329-332.

［4］ Peng J，Hu Q，Liu W，et al.USP9X expression correlates with tumor progression and poor prognosis in esophageal squamous cell carcinoma［J］.Diagn Pathol，2013，8(1):177-185.

［5］ Reyes-Turcu FE，Wilkinson KD.Polyubiquitin binding and disassembly by deubiquitinating enzymes［J］.Chem Rev，2009，109(4):1495-1508.

［6］ Fraile JM，Quesada V，Rodriguez D，et al.Deubiquitinases in cancer:new functions and therapeutic options［J］.Oncogene，2012，31(19):2373-2388.

［7］ Agrawal P，Chen YT，Schilling B，et al.Ubiquitin-specific peptidase 9，X-linked(USP9X)modulates activity of mammalian target of rapamycin(mTOR)［J］.J Biol Chem，2012，287(25):21164-21175.

［8］ Populo H，Lopes JM，Soares P.The mTOR signaling pathway in human Cancer［J］.Int J Mol Sci，2012，13(2):1886-1918.

［9］ Schwickart M，Huang X，Lill JR，et al.Deubiquitinase USP9X stabilizes MCL1 and promotes tumour cell survival［J］.Nature，2010，463(7277):103-107.

［10］ Nagai H，Noguchi T，Homma K，et al.Ubiquitin-like sequence in ASK1 plays critical roles in the recognition and stabilization by USP9X and oxidative stress-induced cell death［J］.Mol Cell，2009，36(5):805-818.

［11］ Trivigno D，Essmann F，Huber SM，et al.Deubiquitinase USP9x confers radioresistance through stabilization of Mcl-1［J］.Neoplasia，2012，14(10):893-904.

［12］ Harris DR，Mims A，Bunz F.Genetic disruption of USP9X sensitizes colorectal Cancer cells to 5-fluorouracil［J］.Cancer Biol Ther，2012，13(13):1319-1324.

［13］ 張建宇，杜云翔，劉永新.介入化療聯(lián)合伽瑪?shù)吨委熞认侔?7例臨床分析［J］.徐州醫(yī)學(xué)院學(xué)報，2013，33(7):473-475.

［14］ 劉海林，王 磊.胰腺癌早期診斷與治療的研究進(jìn)展［J］.世界華人消化雜志，2009，17(34):3475-3479.