ｈＭＳＨ２、ｐ５３及ＰＴＥＮ在宮頸癌組織中的表達(dá)及意義

蘇　紅　李　梅　王秀瑩　呂　申

[摘要]目的：探討宮頸癌組織中hMSH2、p53及PTEN蛋白表達(dá)的關(guān)系及意義。方法：采用免疫組織化學(xué)SP法檢測(cè)54例宮頸癌中的hMSH2、p53及PTEN蛋白表達(dá)。結(jié)果：①宮頸癌組織中，hMSH2、p53蛋白陽(yáng)性表達(dá)率分別為62.96%、66.67%，PTEN蛋白缺失表達(dá)率55.56%。②在hMSH2陽(yáng)性表達(dá)的宮頸癌患者中，p53蛋白陽(yáng)性表達(dá)率為76.47%、PTEN蛋白缺失表達(dá)率為52.94%。hMSH2與p53表達(dá)呈正相關(guān)（P＜0.05）。 結(jié)論：宮頸癌組織中，p53基因突變與錯(cuò)配修復(fù)基因的功能缺陷有關(guān)。

[關(guān)鍵詞] 宮頸癌；hMSH2；P53；PTEN；免疫組織化學(xué)

[中圖分類號(hào)] R737.3 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼]A [文章編號(hào)]1674-4721（2009）05（a）-014-02

Expressions of hMSH2、p53 and PTEN in cervical cancers and its significance

SU Hong1，LI Mei2, WANG Xiuying3, LV Shen2*

(1.Department of Gynaecology and Obstetrics, the Second Affiliated Hospital, Dalian Medical University, Dalian116027, China； 2. Central Laboratory, the Second Affiliated Hospital of Dalian Medical University, Dalian116027, China；3. Department of Gynaecology and Obstetrics, Dalian Maternity Hospital，Dalian116021, China)

[Abstract] Objective: To disscuss the relationship ofhMSH2、p53 and PTEN protein expression in cervical cancers and its significance. Methods: Immunohistochemistry was used to examine the proteins expression of hMSH2，p53 and PTEN in 54 cases of cervical cancers. Results: ①In cervical cancer, the positive expression rates of hMSH2 and p53 protein were 62.96% and 66.67%. The lack expression rate of PTEN is 55.56%. ②In the cervical cancer cases of hMSH2 positive expression, the positive expression rate ofp53 and the lack expression rate of PTEN were 76.47% and 52.94%. hMSH2 and p53 protein expression was positively correlated (P<0.05). Conclusion: Interaction between mismatch repair gene defect and p53 gene mutation may be related to the carcinogenesis of cervical cancer.

[Key words] Cervical cancer；hMSH2；p53；PTEN；Immunohistochemistry

宮頸癌是最常見的婦科惡性腫瘤之一，在全球婦女惡性腫瘤中居第二位，其發(fā)病機(jī)制目前尚不清楚。目前認(rèn)為，腫瘤是細(xì)胞多種基因突變累積的結(jié)果。這些基因突變主要發(fā)生在原癌基因、抑癌基因和DNA錯(cuò)配修復(fù)基因， hMSH2是第一個(gè)被發(fā)現(xiàn)的人類錯(cuò)配修復(fù)基因。p53已經(jīng)證實(shí)是與人類腫瘤相關(guān)性最高的基因[1]。PTEN基因(phosphate and tension homology deleted on chromosome ten，PTEN)是一個(gè)具有磷酸酶活性的抑癌基因。本研究通過免疫組織化學(xué)法檢測(cè)54例宮頸癌的hMSH2、p53及PTEN蛋白表達(dá)，探討宮頸癌中hMSH2表達(dá)與p53、PTEN的關(guān)系及意義。

1資料與方法

1.1一般資料

選取大連婦產(chǎn)醫(yī)院2000～2002年收治的54例宮頸癌手術(shù)病例。患者年齡為22～78歲，中位年齡39.5歲。所有標(biāo)本均經(jīng)4%中性甲醛固定，石蠟包埋，制成3～4 μm切片，HE 染色，由兩位有經(jīng)驗(yàn)的病理醫(yī)師進(jìn)行病理學(xué)診斷。

1.2試劑與方法

采用免疫組織化學(xué)SP法染色，切片常規(guī)脫蠟水化，微波加熱抗原修復(fù)，鼠抗人單克隆抗體hMSH2（1∶250稀釋，美國(guó)Zymed Laboratories公司，克隆系：FE11）、鼠抗人p53單克隆抗體（DAKO公司，1∶50）、鼠抗人PTEN單克隆抗體（北京中山生物技術(shù)有限公司，1∶75）40℃孵育過夜，操作按SP試劑盒（北京中山生物技術(shù)有限公司）說明書進(jìn)行。以PBS代替一抗作為陰性對(duì)照。選取已知陽(yáng)性的切片作為陽(yáng)性對(duì)照。

1.3結(jié)果判定

hMSH2以細(xì)胞核或細(xì)胞漿內(nèi)出現(xiàn)棕黃色顆粒的細(xì)胞為陽(yáng)性細(xì)胞。對(duì)hMSH2判定：陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)與實(shí)質(zhì)細(xì)胞總數(shù)之比≥10%，判為陽(yáng)性表達(dá)，否則為陰性表達(dá)。PTEN和p53計(jì)數(shù)5個(gè)高倍視野或500個(gè)細(xì)胞，按胞核或胞漿內(nèi)染色強(qiáng)度打分：0分為無色，1分為淡黃色，2分為棕黃色，3分為棕褐色。再將陽(yáng)性細(xì)胞所占的百分比打分:0分為陰性，1分 0%＜陽(yáng)性細(xì)胞≤10%，2分 10%＜陽(yáng)性細(xì)胞≤50%，3分 50%＜陽(yáng)性細(xì)胞≤75%，4分 75%＜陽(yáng)性細(xì)胞≤100%。染色強(qiáng)度與陽(yáng)性細(xì)胞百分比的乘積＞3分者為免疫反應(yīng)(＋)。結(jié)果均由兩位有經(jīng)驗(yàn)的病理醫(yī)師采用雙盲法判定。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用χ2 檢驗(yàn)，應(yīng)用SPSS13.0軟件對(duì)結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1 hMSH2、p53及PTEN蛋白表達(dá)

在宮頸癌組織中，hMSH2、p53蛋白表達(dá)陽(yáng)性率為62.96%、66.67%，PTEN蛋白表達(dá)陽(yáng)性率44.44%，表達(dá)缺失率55.56%，見圖1、2。

2.2hMSH2與p53、PTEN蛋白在宮頸癌中的表達(dá)關(guān)系

在hMSH2陽(yáng)性表達(dá)的宮頸癌病例中，p53蛋白陽(yáng)性表達(dá)率為76.47%、PTEN蛋白缺失表達(dá)率為52.94%。hMSH2陽(yáng)性表達(dá)中，p53及PTEN表達(dá)均較高，但PTEN與hMSH2無顯著性關(guān)系。hMSH2與p53表達(dá)呈正相關(guān)（P＜0.05），見表1。

3討論

腫瘤發(fā)生機(jī)制目前還不清楚，但DNA損傷和基因結(jié)構(gòu)的異常以及由此造成的癌基因和抑癌基因表達(dá)或功能上的改變是細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化的必要前提。錯(cuò)配修復(fù)基因通過其蛋白產(chǎn)物識(shí)別復(fù)制錯(cuò)配的堿基，并啟動(dòng)錯(cuò)配修復(fù)反應(yīng)，對(duì)DNA復(fù)制的忠實(shí)性和基因的穩(wěn)定性起著重要作用[2]。hMSH2的種系突變?yōu)殄e(cuò)配修復(fù)基因中最易檢測(cè)到的突變，突變主要為單堿基的改變和由于堿基的缺失和插入引起移碼突變，導(dǎo)致下游提前出現(xiàn)終止密碼，而使蛋白截?cái)嗷蚬δ苋笔?。hMSH2的突變主要為于其后面的外顯子上。有報(bào)道，膀胱癌、涎腺癌中hMSH2蛋白表達(dá)均增高[3-4]，本研究hMSH2蛋白在宮頸癌組織中的表達(dá)也增高，為62.96%。

在許多人類腫瘤中，p53基因突變被認(rèn)為是惡性腫瘤發(fā)生與發(fā)展的主要原因[5-6]。野生型p53是一種抑癌基因，對(duì)細(xì)胞的生長(zhǎng)起負(fù)調(diào)節(jié)作用，p53 蛋白活性受磷酸化狀態(tài)控制，它的磷酸化與細(xì)胞周期有關(guān)[7]。p53基因突變后，不僅失去抑制腫瘤增殖作用，而且使該基因功能異常[8]。PTEN基因定位于10q23.3。PTEN基因通過抑制細(xì)胞有絲分裂、誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡、抑制腫瘤血管形成、抑制腫瘤細(xì)胞侵襲和轉(zhuǎn)移等各個(gè)方面發(fā)揮抑癌基因的作用[9]。PTEN蛋白定位于細(xì)胞漿中，經(jīng)免疫組化法研究的PTEN蛋白在子宮頸癌中的表達(dá)，主要表現(xiàn)為PTEN蛋白表達(dá)缺失。PTEN表達(dá)缺失的原因有體細(xì)胞基因突變，即PTEN基因突變導(dǎo)致磷酸酶活性喪失，使細(xì)胞發(fā)生惡性轉(zhuǎn)化。有學(xué)者發(fā)現(xiàn)，前列腺癌、胃癌、子宮內(nèi)膜癌和宮頸癌等腫瘤常有PTEN表達(dá)下調(diào)[10-12]，本研究結(jié)果為PTEN蛋白表達(dá)陽(yáng)性率44.44%，與有關(guān)研究結(jié)果接近。

本研究雖然PTEN蛋白表達(dá)缺失率在hMSH2陽(yáng)性表達(dá)中高，但PTEN與hMSH2蛋白表達(dá)無顯著性相關(guān)。hMSH2、p53蛋白表達(dá)均增高，宮頸癌中突變型p53與hMSH2呈正相關(guān)（P<0.05）。即p53突變?cè)蕉?，錯(cuò)配修復(fù)基因hMSH2蛋白表達(dá)越高。說明p53基因突變與錯(cuò)配修復(fù)基因的功能缺陷有關(guān)。hMSH2和p53蛋白表達(dá)相互影響與宮頸癌的發(fā)生可能有關(guān)。

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（收稿日期：2009-04-13）