ＨＰＬＣ法測定蒲公英顆粒中咖啡酸含量

柯　薇

[摘要] 目的：建立高效液相色譜法測定蒲公英顆粒中咖啡酸含量的方法。方法：采用高效液相色譜法，色譜柱為Shim-Pack C₁₈柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；以甲醇-水-磷酸（100∶250∶0.1）為流動相；檢測波長為320 nm；流速為1.2 ml/min。結(jié)果：咖啡酸在0.010 0～0.090 0 mg/ml范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系，平均回收率為98.6%，RSD=1.27%（n=6）。結(jié)論：本方法簡便、快速、靈敏、準(zhǔn)確、重現(xiàn)性好，可用于蒲公英顆粒的質(zhì)量控制。

[關(guān)鍵詞] HLPC；蒲公英顆粒；咖啡酸

[中圖分類號] R927.2 [文獻(xiàn)標(biāo)識碼]A [文章編號]1674-4721（2009）05（a）-005-02

Determination of caffeic acid in pugongying granules by HPLC

KE Wei

(Department of Pharmacy, the Third People's Hospital of Huaihua, Huaihua418000, China)

[Abstract] Objective: To establish a method for the determination of caffeic acid in Pugongying granules by HPLC. Methods: The analysis was carried on a column of Shim-Pack C₁₈(250 mm×4.6 mm, 5 μm) with a mobile phase of methanol-water-phosphoric acid (100∶250∶0.1), and the UV detection wavelength was 320 nm. Rusults: The linear relation of caffeic acid was excellent within the range of 0.010 0~0.090 0 mg/ml (r=0.999 6, n=5), the mean recovery was 98.6% with RSD=1.27% (n=6). Conclusion: The method is simple, quick, sensitive, accurate, reproducible and can be control the quality of Pugongying granules.

[Key words] HLPC;Pugongying granules;Caffeic acid

蒲公英顆粒是由蒲公英加輔料蔗糖制成的顆粒劑，具有清熱消炎的功效，用于治療上呼吸道感染、急性扁桃體炎、癤腫、乳腺炎等，其主要有效成分為咖啡酸。目前有關(guān)蒲公英顆粒質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)僅包括性狀、檢查、鑒別、浸出物四項(xiàng)，但無定量研究[1-2]。為了提高蒲公英顆粒產(chǎn)品質(zhì)量控制水平，本文采用高效液相色譜（HPLC）法測定蒲公英顆粒咖啡酸的含量，為蒲公英顆粒的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)控制提供理論依據(jù)。

1儀器與試藥

漢邦高效液相色譜儀 SSI/ Lab Alliance（美國科學(xué)系統(tǒng)公司），型號：Series Ⅲ； Model 500型紫外檢測器；7725i型進(jìn)樣閥；LGC-1025M型柱溫箱；N2000化學(xué)工作站；HS3120D型超聲儀；電子天平[AL104梅特勒-托利多儀器（上海）有限公司]。咖啡酸對照品（中國藥品生物制品檢定所，批號為110885-200102）；蒲公英顆粒（四川省中藥廠有限責(zé)任公司，批號：03090，國藥準(zhǔn)字Z51020895）；試驗(yàn)用水為超純水；甲醇為色譜純(天津四友生

物醫(yī)學(xué)技術(shù)有限公司)，磷酸二氫鉀、甲酸、磷酸等均為分析純。

2方法與結(jié)果

2.1色譜分析條件及系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

色譜柱：Shim-Pack C₁₈柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動相：甲醇-水-磷酸（100∶250∶0.1）；檢測波長：320 nm；流速：1.2 ml/min；柱溫：40℃；進(jìn)樣量：20 μl。理論板數(shù)按咖啡酸峰計(jì)算應(yīng)不低于6 000。

2.2溶液的制備

對照品溶液的制備：精密稱取咖啡酸對照品0.005 0 g，置100 ml棕色容量瓶中，加甲醇適量，使之溶解，再加甲醇至刻度，即得。供試品溶液的制備：取本品研細(xì)，精密稱取3.671 3 g，置100 ml具塞錐形瓶中，加鹽酸0.3 ml，加水30 ml，加熱使溶解，用乙醚-乙醇（24∶1）混合溶液萃取4次，每次15 ml，用無水硫酸鈉脫水，合并，低溫蒸干，殘?jiān)恿鲃酉嗉状?水-磷酸（100∶250∶0.1）溶解，置棕色瓶中，并定容至5 ml。用0.45 μm微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液，即得。陰性對照品溶液的制備：按處方量稱取除蒲公英外的陰性樣品，照供試品溶液項(xiàng)下操作制成。

2.3方法學(xué)考察

2.3.1干擾試驗(yàn)在上述色譜條件下，取對照品、供試品和陰性對照品溶液各20 μl進(jìn)樣。結(jié)果在對照品色譜峰保留時間相應(yīng)的位置上，陰性對照品溶液在此峰位無吸收，對樣品的測定無干擾，分離良好，見圖1。

2.3.2 線性關(guān)系考察精密稱取咖啡酸對照品0.010 0 g，置100 ml棕色容量瓶中，加甲醇適量使之溶解，加甲醇至刻度，搖勻，配成濃度為0.100 0 mg/ml的溶液，分別精密吸取咖啡酸甲醇溶液1.0、3.0、5.0、7.0、9.0 ml分別置10 ml容量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，配成濃度分別為0.010 0、0.030 0、0.050 0、0.070 0、0.090 0 mg/ml的溶液。按前面所述色譜條件，分別精密吸取20 μl注入液相色譜儀，記錄色譜圖，以對照品溶液濃度（C）為縱坐標(biāo)，以峰面積（A）為橫坐標(biāo)，得回歸方程C=3.28×10^-8A-0.001，r=0.999 6（n=5）。結(jié)果表明咖啡酸在0.010 0~0.090 0 mg/ml范圍內(nèi)，與峰面積呈良好的線性關(guān)系。

2.3.3 精密度試驗(yàn)取線性試驗(yàn)中濃度為0.050 0 mg/ml的咖啡酸對照品溶液，精密吸取20 μl注入液相色譜儀，連續(xù)進(jìn)樣6次，得咖啡酸的峰面積計(jì)算RSD=0.83%，結(jié)果表明本實(shí)驗(yàn)精密度良好。

2.3.4 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取同一供試品溶液，分別在0、2、4、6、8 h精密吸取20 μl注入液相色譜儀，測定其峰面積，無顯著變化，并計(jì)算RSD=1.76%，表明本品溶液在8 h內(nèi)測定。

2.3.5重現(xiàn)性試驗(yàn)取同一批新生化顆粒樣品適量，照供試品溶液的制備方法制備各供試品溶液，分別取20 μl注入液相色譜儀，由峰面積按外標(biāo)法計(jì)算含量，并由含量計(jì)算RSD=0.83%，表明本實(shí)驗(yàn)結(jié)果重現(xiàn)性較好。

2.3.6加樣回收率試驗(yàn)精密稱取已測含量的樣品細(xì)粉適量，置100 ml具塞錐形瓶中，加入咖啡酸對照品溶液1 ml（0.100 0 mg/ml），加鹽酸0.3 ml，加水30 ml，加熱使之溶解，用乙醚-乙醇（24∶1）混合溶液萃取4次，每次15 ml，用無水硫酸鈉脫水，合并，低溫蒸干，殘?jiān)恿鲃酉嗉状?水-磷酸（100∶250∶0.1）溶解，置棕色瓶中，并定容至5 ml，用0.45 μm微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液，即得。精密吸取20 μl注入液相色譜儀，將測得峰面積代入線性方程，計(jì)算供試品中咖啡酸的含量，并計(jì)算回收率。結(jié)果見表1。

3 討論

蒲公英顆粒是常用的清熱解毒中藥，用于咽喉腫痛（急性扁桃體炎）瘡癤，乳癰發(fā)熱，也可用于熱淋。現(xiàn)代藥學(xué)及藥理研究表明， 蒲公英所含的咖啡酸具有廣譜抗菌和消炎利膽作用。體外試驗(yàn)表明， 蒲公英對金黃色葡萄球菌、變形桿菌、甲型鏈球菌、乙型鏈球菌均有明顯的抑制作用[3]。因此，本研究將咖啡酸作為蒲公英顆粒質(zhì)量控制的指標(biāo)是可行的。

國家食品藥品監(jiān)督管理局部頒中藥第三冊中收載的《蒲公英顆粒質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)》對含量未作要求，這對控制藥品質(zhì)量和保障人民用藥安全十分不利。為了保證產(chǎn)品質(zhì)量的均一性和臨床用藥的安全性及有效性，筆者在對蒲公英顆粒質(zhì)量研究的基礎(chǔ)上制定了蒲公英片中咖啡酸的含量限度[4]。

通過上述研究，建立了蒲公英片劑的定量測定方法，本研究結(jié)果表明該法方便、快速、準(zhǔn)確，為制劑的質(zhì)量控制提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)。該法可用于蒲公英片的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)和質(zhì)量控制，為全面控制產(chǎn)品質(zhì)量提供了方法。

[參考文獻(xiàn)]

[1]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典·一部[M].北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2005：28.

[2]都述虎，金繼曙.蒲公英中咖啡酸的含量測定研究[J].中國現(xiàn)代應(yīng)用藥學(xué)，2001，18（1）：59-60.

[3]陳勇，程智勇，韓鳳梅，等.蒲公英注射液的質(zhì)量探討[J].湖北大學(xué)學(xué)報，2000，22（3）：278-281.

[4]張旭東，張淑惠，張西如.反相高效液相色譜法測定蒲公英中咖啡酸的含量[J].中國現(xiàn)代藥學(xué)雜志，2003，20（6）：511-512.

(收稿日期：2009-03-06)