談艾滋病檢測(cè)中應(yīng)注意的問題

摘要：早期艾滋病病毒（HIV）感染僅僅會(huì)表現(xiàn)出輕微癥狀或者無癥狀，只有通過實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)才可以準(zhǔn)確發(fā)現(xiàn)HIV感染者/艾滋?。ˋIDS）患者。但是在實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)的過程中很容易由于各種問題影響實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性，為了有效避免漏檢、誤檢現(xiàn)象，本文主要分析了目前較為常見的幾種實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)方法中應(yīng)該注意的問題，以期提高艾滋病檢測(cè)的有效性、準(zhǔn)確性。

關(guān)鍵詞：艾滋??；實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)；注意問題

艾滋?。ˋIDS）主要是由于人類免疫缺陷病毒（HIV）導(dǎo)致的免疫缺陷性疾病，目前臨床上還沒有研究出有效預(yù)防艾滋病的疫苗，也沒有研究出有效的治療方法。實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)是診斷HIV感染者/AIDS患者的主要手段，其中血清HIV抗體檢測(cè)是診斷各時(shí)期艾滋病的重要方法，假如處于HIV感染“窗口期”或者HIV抗體結(jié)果無法確定的情況下，還需要通過抗原檢測(cè)、HIV特異性抗體檢測(cè)、核酸檢測(cè)、病毒分離培養(yǎng)等多種方式輔助診斷，才可以確定屬于HIV感染[1]。其次，臨床很多學(xué)者已經(jīng)經(jīng)過實(shí)踐研究證明[2]，核酸檢測(cè)、CD+4 T細(xì)胞檢測(cè)對(duì)于患者用藥療效觀察。

1 HIV抗體檢測(cè)中需要注意的幾點(diǎn)問題

1.1試劑盒 HIV抗體檢測(cè)中，選用的試劑盒必須得到國家藥品監(jiān)督管理局的注冊(cè)或者批準(zhǔn)，而且需要經(jīng)過中國藥品生物制品檢定所的嚴(yán)格審批、檢查合格，經(jīng)過國家艾滋病預(yù)防及控制中心進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室評(píng)估后的質(zhì)量為優(yōu)良等級(jí)。同時(shí)，應(yīng)該仔細(xì)檢查試劑盒的有效使用期限，必須要求使用的產(chǎn)品在有效期內(nèi)，應(yīng)該仔細(xì)檢查試劑盒的批號(hào)，如果試劑盒批號(hào)不同的情況下，有的試劑是不允許混合使用的。

1.2做好實(shí)驗(yàn)前的相關(guān)準(zhǔn)備工作 稀釋液以及酶標(biāo)板等只有在室溫的條件下才可以開始實(shí)驗(yàn)，因此在正式開始實(shí)驗(yàn)前應(yīng)該將其從冰箱中提前取出來。其次，因?yàn)橛械臅r(shí)候酶標(biāo)板上的蓋膜會(huì)存在一些縫隙，這些縫隙會(huì)改變酶標(biāo)小球的顏色以及體積，一旦發(fā)現(xiàn)酶標(biāo)小球出現(xiàn)變化后一定要及時(shí)更新。

1.3加樣環(huán)節(jié) 實(shí)驗(yàn)室采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（E LISA）試劑盒大部分都會(huì)選擇全自動(dòng)或者半自動(dòng)酶標(biāo)儀，酶標(biāo)儀的質(zhì)量對(duì)于實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)結(jié)果有很大的影響。全自動(dòng)酶標(biāo)儀主要是儀器自動(dòng)進(jìn)行加樣。酶標(biāo)儀在日常使用過程中，一定要做好清洗工作，保證加樣針能夠保持暢通，而且應(yīng)該準(zhǔn)確把握加樣量。其次，檢測(cè)者應(yīng)該及時(shí)檢查、核對(duì)樣本管編號(hào)和儀器上的編號(hào)位置是否相符，還應(yīng)該注意儀器有沒有將樣品添加到酶標(biāo)板中的正確位置，總之，檢測(cè)者應(yīng)該密切注意觀察整個(gè)儀器加樣過程。假如是手工加樣的情況下，首先應(yīng)該確保準(zhǔn)確的吸樣量，同時(shí)還應(yīng)該確保酶標(biāo)板上樣品添加到正確的位置上。這樣可有效預(yù)防由于加樣失誤而出現(xiàn)假陽性或者假陰性等情況。

1.4溫育條件 加樣后應(yīng)該選擇水浴法進(jìn)行溫育，避免溫度不均勻。放置酶標(biāo)板之前，應(yīng)該提前將溫度調(diào)節(jié)到實(shí)驗(yàn)需要的溫度，確保能夠擁有充足的溫育時(shí)間。其次，需要注意的是，不能反復(fù)應(yīng)用封板用的膜。

1.5洗板 在實(shí)驗(yàn)的過程中，一定要嚴(yán)格根據(jù)說明書中的要求確定洗板的洗液量、浸泡時(shí)間、洗板次數(shù)。同時(shí)，應(yīng)該定時(shí)清理洗板機(jī)的吸液孔，避免標(biāo)本纖維蛋白絲以及被洗液結(jié)晶將吸液孔堵塞，保證所有的洗液空以及吸液孔能夠在洗板的過程中保持正常、高效的運(yùn)行狀態(tài)。如果洗板沒有清理干凈的情況下，很容易出現(xiàn)假陽性結(jié)果。

1.6質(zhì)量控制環(huán)節(jié) 每一次進(jìn)行試驗(yàn)的過程中，都應(yīng)該將內(nèi)外部對(duì)照質(zhì)控血清包含進(jìn)來，這樣可大大提高HIV檢測(cè)結(jié)果的可靠性、準(zhǔn)確性。對(duì)于內(nèi)部質(zhì)控血清，一定要特別注意批號(hào)，如果試劑盒的批號(hào)不同的情況下，禁止混合使用。其次，每次試驗(yàn)都必須添加外部質(zhì)控血清，結(jié)束試驗(yàn)后，一定要檢查當(dāng)天的質(zhì)控結(jié)果有沒有控制在合理允許的范圍中。

臨床上有的懷孕婦女、惡性疾病患者、器官移植化患者、輸血患者以及自身免疫性疾病患者，因?yàn)槠渌遣《镜鞍卓贵w之間產(chǎn)生的交叉反應(yīng)，極易導(dǎo)致患者的身體出現(xiàn)一些抗體，這種反應(yīng)非常類似于HIV p24核心蛋白抗體引發(fā)的一系列反應(yīng)，患者初篩、復(fù)檢的吸光度值都相對(duì)比較低。一旦發(fā)生這樣的情況，一定要和接診醫(yī)生及時(shí)聯(lián)系，詳細(xì)詢問患者的病情后，再?zèng)Q定需不需要送往實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行確證試驗(yàn)。大部分確證試驗(yàn)雖然結(jié)果表明都是陰性，但是檢測(cè)者也不能習(xí)慣性的將初篩陰性報(bào)告發(fā)出去，避免出現(xiàn)漏檢情況。

2 核酸檢測(cè)

臨床上已經(jīng)廣泛推廣應(yīng)用了第四代HIV抗體試劑，大大提前了HIV臨床感染窗口期，然而早期HIV感染患者并沒有明顯的臨床癥狀，這種情況下需要輔助進(jìn)行核酸檢測(cè)。很多學(xué)者提出[3]，HIV感染后患者血漿中病毒載量和患者的病情發(fā)展速度呈正相關(guān)性，也就是說血漿中病毒載量越多，患者的病情發(fā)展越快。在實(shí)驗(yàn)過程中還存在很多因素會(huì)對(duì)核酸檢測(cè)結(jié)果的可靠性、準(zhǔn)確性造成很大的影響。因此，需要注意以下幾點(diǎn)：①相對(duì)于其他采血管RNA水平而言，EDTA抗凝采血管采集到的血漿會(huì)有一定偏高，而且隨著時(shí)間的不斷變化，并不會(huì)有很大的損失，因此在標(biāo)本采集的過程中，采血管應(yīng)該采用EDTA抗凝采血管。②采全血后4～6 h將血漿分離的效果最好，采集血樣標(biāo)本后，應(yīng)該將血漿盡快分離，并且冰凍保存。③根據(jù)相關(guān)數(shù)據(jù)研究顯示，血漿樣本的HIV RNA含量保存在-20℃的環(huán)境下12 w，其含量會(huì)低于保存在-80℃環(huán)境。到了20～24 w，HIV RNA含量會(huì)降低30%～80%。因此將血漿分離后，應(yīng)該立即進(jìn)行檢測(cè)，不然應(yīng)該將其保存于-80℃環(huán)境中。

3 CD4+T淋巴細(xì)胞檢測(cè)

現(xiàn)階段，CD4+T淋巴細(xì)胞亞群檢測(cè)方法較為常用的是流式細(xì)胞術(shù)，因?yàn)镃D4+T淋巴細(xì)胞的水平值波動(dòng)幅度比較大。為了有效確保臨床檢測(cè)結(jié)果的可靠性、準(zhǔn)確性，應(yīng)該注意以下幾點(diǎn)：①采集標(biāo)本的過程中，應(yīng)該盡量采用EDTA抗凝采血管，在采血的過程中也應(yīng)該及時(shí)將血液標(biāo)本搖勻，避免出現(xiàn)凝塊。②最好在室溫2 h內(nèi)及時(shí)檢測(cè)標(biāo)本，假如無法及時(shí)進(jìn)行檢測(cè)的情況下，在室溫下將標(biāo)本保存的時(shí)間應(yīng)該在2 d以內(nèi)。加入抗體的過程中，千萬不能將加樣槍頭觸碰到管底部微球，避免吸頭會(huì)吸附微球，降低管內(nèi)微球數(shù)量，增加CD+4 T淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)。③加樣量的準(zhǔn)確性會(huì)對(duì)CD4+T淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)結(jié)果有直接的影響，因此必須定期校正加樣槍，采用反向加樣法進(jìn)行加樣。④一定要保證流式細(xì)胞儀的工作狀態(tài)保持最佳狀態(tài)。當(dāng)天使用完儀器后，應(yīng)該立即清洗，為了確保管路保持更好的狀態(tài)，可以先用次氯酸鈉進(jìn)行清洗后，再采用具備去蛋白作用的清洗液再進(jìn)行一次清洗，而且應(yīng)該定期進(jìn)行一次大沖洗。

綜上所述，想要有效確保艾滋病檢測(cè)結(jié)果的質(zhì)量，要求實(shí)驗(yàn)室應(yīng)該具備較高的硬件水平，并且制定嚴(yán)格的管理制度以及科學(xué)的操作規(guī)程。而實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)人員也應(yīng)該具備較高的專業(yè)素質(zhì)以及技術(shù)水平，提高艾滋病診斷正確性，為臨床診治艾滋病提供科學(xué)、可靠的依據(jù)。

參考文獻(xiàn)：

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