探討糖尿病患者雌激素受體（ER）基因多態(tài)性與骨密度的關(guān)系

摘要：目的 深入探討糖尿病患者雌激素受體基因多態(tài)性與骨密度之間的聯(lián)系。方法 選取我院2012年11月～2014年10月收治的40例糖尿病患者為研究對象，采用雙能量X線法對患者的BMD進(jìn)行測量，PCR-RELP檢測雌激素受體基因多態(tài)性，并與60例健康受檢人群進(jìn)行綜合性比較。結(jié)果 檢測結(jié)果顯示，與健康人群相比，糖尿病患者PP、xx基因型頻率明顯更高（P<0.05）；pp、XX基因型頻率高于健康人群（P<0.05）。1型糖尿病患者于2型糖尿病患者相比，骨質(zhì)疏松發(fā)生率或骨量減少發(fā)生率較高（P<0.05）。結(jié)論 與健康人群相比，糖尿病患者的雌激素受體基因型分布存在顯著的差異性，p、X等位基因?qū)橇烤哂幸欢ǖ谋Ｗo(hù)作用。

關(guān)鍵詞：糖尿??；雌激素受體；骨密度

結(jié)合現(xiàn)有的臨床研究資料來看，我們普遍將骨質(zhì)疏松及骨量減少定位糖尿病的常見并發(fā)真，有研究報(bào)告顯示2型糖尿病患者存在雌激素及其受體水平異常的情況，而雌激素受體基因多態(tài)性可對雌激素受體的表達(dá)和功能造成不同程度的影響[1]。當(dāng)前，我們的研究更多的著落于健康人群雌激素受體基因多態(tài)性與BMD之間的聯(lián)系，而關(guān)于糖尿病患者的研究則還處于相對較為初級的階段，基于此，我院就將采取實(shí)例對比的方式，深入探討糖尿病患者雌激素受體基因多態(tài)性與骨密度之間的聯(lián)系，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取我院2012年11月～2014年10月收治的40例糖尿病患者為研究對象，其中1型糖尿病和2型糖尿病患者分別20例；1型糖尿病患者中，男性患者11例，女性患者9例，患者平均年齡（42.7±4.8）歲，2型糖尿病患者中，男性患者9例，女性患者11例，患者平均年齡（45.6±3.9）歲；40例患者均排除原發(fā)性肝腎功能疾病、甲狀腺及甲狀旁腺疾病患者以及在近期服用影響骨代謝藥物的患者。另選取同一時(shí)間段到我院進(jìn)行常規(guī)體檢的40例受檢者為研究對照，40例受檢人群中，男性21例，女性19例，平均年齡（41.1±6.2）歲。兩組人群一般臨床資料比較無顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>0.05）。

1.2方法

1.2.1骨密度及骨代謝相關(guān)指標(biāo)的檢測 采用的儀器為NORLAND XR-36雙能量X線骨密度測量儀，首先對受檢對象左側(cè)股骨近端的股骨頸、華氏三角、大轉(zhuǎn)子以及第2、3、4以及2～4腰椎骨密度進(jìn)行全面的測量。然后結(jié)合受檢對象的基本臨床資料計(jì)算其體重指數(shù)（BMI，kg/m2）；研究中對受檢對象的血鈣、鎂、磷等指標(biāo)的測量則采用自動(dòng)生化分析儀進(jìn)行具體測量。

1.2.2雌激素受體（ER）基因多態(tài)性檢測 下游引物：5，-TCT TTC TCT GCC ACC CTG GCG TCG ATT ATC TGA-3，；下游引物：5，-CTG CCA CCC TAT CTG TAT CTT TTC CTA TTC TCC-3，；全血DNA抽提：2%EDTA抗凝（1：0.2）全血μl，采用Promega公司生產(chǎn)的全血DNA抽提試劑盒，抽提基因組DNA，并將其充分溶于60μlTE中，然后將其置于-20℃進(jìn)行保存；PCR反應(yīng)：取基因組DNA1.1μl，下游引物及上游引物各20pmol，KC150mmol/L，dNTP200μmol/L，MgCl22.5mmol/L，Tris-HCL 10mmol/L，Taq DNA Polymerase 0.5U，反應(yīng)總體系為30μl；循環(huán)條件：72℃延伸70s，61℃退火45s，94℃變性45s，嚴(yán)格經(jīng)過35個(gè)循環(huán)后，72℃延伸5min，上述操作完成之后，取產(chǎn)物10μl經(jīng)1.5%瓊脂糖凝膠電泳，紫外光下就擴(kuò)增的結(jié)果進(jìn)行詳細(xì)的觀察；最后，當(dāng)反應(yīng)終止以后，產(chǎn)物經(jīng)1.5%瓊脂糖凝膠電泳，溴化乙錠染色，借助美國阿爾法公司生產(chǎn)的凝膠圖像分析儀射片，然后對基因型進(jìn)行最后的分析：\"P\"、\"X\"表示不存在相應(yīng)酶切點(diǎn)，\"p\"、\"x\"則表示存在相應(yīng)的酶切點(diǎn)。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 運(yùn)用SPSS.17.0統(tǒng)計(jì)軟件加以分析，使用（x±s）表示本實(shí)驗(yàn)的計(jì)量資料，并應(yīng)用配對t檢驗(yàn)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義P<0.05。

2 結(jié)果

2.1 ER基因多態(tài)的PCR及酶切結(jié)果 ER基因PCR產(chǎn)物為長1300bp的片段，經(jīng)PvuII酶切后PP型為單一條帶1300bp，Pp型則為450bp、850bp以及1300bp三條帶，pp型為450bp和805bp而條帶；經(jīng)XbaI酶切后xx型為390bp和910bp而條帶，Xx型為390bp、910bp和1300bp三條帶，XX型為1300bp單一條帶。

2.2糖尿病患者于健康受檢者ER基因多態(tài)性分布特點(diǎn)比較，1型糖尿?。╪=20）及2型糖尿?。╪=20）PP基因型頻率分別為5例（25.00%）和4例（20.00%），健康受檢人群（n=40）PP為4例（10.00%），組間比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；1型糖尿病及2型糖尿病患者xx分別為11例（55.00%）和12例（60.00%），健康受檢者7例（35.00%），組間比較均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；pp基因型，1型及2型糖尿病患者分別為5例（25.00%）和6例（30.00%），健康受檢者11例（55.00%），組間比較均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；XX型基因頻率，1型及2型糖尿病患者分別為2例（10.00%）和3例（15.00%），健康受檢者8例（40.00%），組間比較均有銅繼續(xù)學(xué)意義（P<0.05）；Pp和Xx型基因頻率組間比較則無顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>0.05）。

3 討論

從早期研究資料來看，界內(nèi)普遍認(rèn)為2型糖尿病患者的的骨量正?；蛐》壬遊2]，而隨著臨床研究的深入我們發(fā)現(xiàn)，2型糖尿病患者存在比較明顯的骨代謝異常，骨密度降低則與患者繼發(fā)性甲旁亢有直接或間接的額聯(lián)系，并且與糖尿病病程呈明顯的負(fù)相關(guān)；從性別角度來看，男性糖尿病患者腰椎BMD低于正常同齡對照，而女性腰椎BMD則并呈現(xiàn)低于同齡對照的情況，而相反是髖部BMD較低；從這一點(diǎn)我們也能夠看出男性BMD除了會(huì)受到年齡因素的影響之外，糖尿病是一個(gè)非常重要的因素；而女性患者BMD除了與正常同齡人一樣受絕經(jīng)及其年齡因素的影響以外，糖尿病可在一定程度上加重其髖部骨量的流失。

結(jié)合而本次研究來看，我們還發(fā)現(xiàn)糖尿病及其慢性并發(fā)癥與患者遺傳因素具有非常緊密的聯(lián)系，但是當(dāng)前臨床研究上還并沒有關(guān)于ER基因多態(tài)性與糖尿病患者骨密度關(guān)系的研究資料，因此，我們還需要投入更多的精力進(jìn)行更深層次的研究和探討。

從研究結(jié)果及相關(guān)數(shù)據(jù)來看，糖尿病患者發(fā)生骨量減少和骨質(zhì)疏松的情況比較高，ER基因多態(tài)性的檢測不僅能夠?qū)琴|(zhì)疏松的分子遺傳學(xué)發(fā)病機(jī)制有著不可替代的指導(dǎo)意義以外，還能夠有效預(yù)測糖尿病患者發(fā)生骨質(zhì)疏松的危險(xiǎn)性，這對于糖尿病的患者來說意義重大。

參考文獻(xiàn)：

[1]關(guān)美萍.雌激素受體基因多態(tài)性與2型糖尿病骨密度的相關(guān)研究[D].第一軍醫(yī)大學(xué)，2000.

[2]吳潔，邱勇，張樂，等.青少年特發(fā)性脊柱側(cè)凸患者雌激素受體基因多態(tài)性與骨密度的關(guān)系[J].中國骨質(zhì)疏松雜志，2012，3（11）：246-249.

編輯/金昊天