川東北地區(qū)表面健康人群抗線粒體M2抗體參考范圍調(diào)查

摘要：目的 建立適合川東北地區(qū)表面健康人群抗線粒體M2抗體（AMA-M2）的參考范圍。方法 體格檢查和相關(guān)的實(shí)驗(yàn)室檢查均無異常的表面健康人群共420例，按性別和年齡分組，采用Alegria全自動酶聯(lián)免疫分析儀和配套的檢測試劑以及檢測參數(shù)檢測血清AMA-M2濃度。結(jié)果 AMA-M2檢測系統(tǒng)的批內(nèi)和天間的檢測精密度良好，其他性能參數(shù)符合臨床使用要求。表面健康人群女性組血清AMA-M2濃度為1.90（1.70-4.50）IU/ml，明顯高于男性組的1.85（1.60～2.70）IU/ml（Z=-2.804，P=0.005）；而<50歲年齡組和≥50歲年齡組血清AMA-M2檢測結(jié)果之間無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（Z=-0.317，P=0.751）。血清AMA-M2參考范圍在女性組為0～4.45IU/ml，男性組為0～2.50IU/ml。結(jié)論 AMA-M2參考范圍應(yīng)按性別分別設(shè)定，建立一個適合本地區(qū)人群的AMA-M2參考范圍具有重要的臨床應(yīng)用價值。

關(guān)鍵詞：抗線粒體M2抗體；參考范圍；表面健康人群

原發(fā)性膽汁性肝硬化（Primary biliary cirrhosis，PBC）是一種以肝內(nèi)膽小管進(jìn)行性非化膿性炎癥為特征的慢性膽汁淤積性肝臟疾病，隨著疾病的進(jìn)程逐漸出現(xiàn)肝臟纖維化，并最終導(dǎo)致肝硬化和肝衰竭[1-2]。目前，在全球，PBC的總體發(fā)病率為6.7～400/100萬，主要好發(fā)于中年女性，其男女發(fā)病比例約為1：9[3-4]。抗線粒體M2抗體（AMA-M2）被認(rèn)為是PBC診斷的最特異的標(biāo)志物，存在于90%以上的PBC患者血清中[2]。

1 資料與方法

1.1一般資料 參加健康體檢者共420例，年齡23～73歲，平均年齡45歲；其中男性246例，女性174例。經(jīng)檢查，均無明顯心血管、肝、腎疾病，無結(jié)締組織病病史的健康人群。實(shí)驗(yàn)室檢測結(jié)果：AST<40U/L，ALT<40U/L，ALP<110U/L，γ-GT<50U/L。

標(biāo)本采集：符合上述要求的人員安靜狀態(tài)下空腹采集靜脈血3ml，2h內(nèi)以離心速度3800rpm/min離心5min后分離得血清。

1.2儀器和試劑 檢測儀器為德國Orgentec公司生產(chǎn)的Alegria全自動酶聯(lián)免疫分析儀，所有配套AMA-M2檢測試劑盒均購自德國Orgentec公司。

1.3方法

1.3.1用含0.2%吐溫20的PBS對采集的標(biāo)本進(jìn)行1：40稀釋后，采用間接免疫熒光法對稀釋標(biāo)本進(jìn)行檢測。

1.3.2血清AMA-M2檢測 按儀器SOP對待檢標(biāo)本上機(jī)檢測。各項(xiàng)檢測參數(shù)均符合生產(chǎn)廠商要求。

1.3.3不精密度實(shí)驗(yàn) ①選擇低中高三個不同濃度血清在1d內(nèi)分別連續(xù)測定20次，了解批內(nèi)不精密度，用變異系數(shù)（CV）表示；②選擇不同濃度血清5份，各將其分為20份，并置于-80℃低溫冰箱中。每天各取1份置于室溫中，待完全溶解后上機(jī)檢測，連續(xù)檢測20d，了解天間不精密度，并粗略估計(jì)該檢測系統(tǒng)CV為10%時的AMA-M2最低檢測限。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行分析。由于數(shù)據(jù)呈偏態(tài)分布，所以采用中位數(shù)（范圍）表示；不同性別以及不同性別各年齡組織之間比較采用兩組獨(dú)立樣本非參數(shù)檢驗(yàn)（Mann-Whitney U檢驗(yàn)），P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。參考范圍的建立采用百分位數(shù)法。

2 結(jié)果

2.1間接免疫熒光法檢測結(jié)果 420例標(biāo)本運(yùn)用間接免疫熒光法檢測，其結(jié)果均為1：40陰性。

2.2不精密度檢測

2.2.1批內(nèi)不精密度 AMA-M2高濃度（125.90IU/ml）、中濃度（22.30IU/ml）和低濃度（4.70IU/ml）的批內(nèi)不精密度的CV分別為3.92%、4.86%和6.83%。

2.2.2天間不精密度 AMA-M2濃度分別為1.94IU/ml、5.10IU/ml、22.46IU/ml、82.20IU/ml和123.96IU/ml時，天間不精密度的CV分別為11.87%、7.63%、4.99%、4.56%和4.41%（圖1）。由圖1可見，當(dāng)天間不精密度的CV為10%時，Alegria全自動酶聯(lián)免疫分析儀在本實(shí)驗(yàn)室檢測AMA-M2的最低檢測值約為2.00IU/ml。

2.3不同性別表面健康人群血清AMA-M2水平 對246例男性和174例女性血清AMA-M2檢測數(shù)據(jù)進(jìn)行正態(tài)性檢驗(yàn)，表明兩組數(shù)據(jù)均呈偏態(tài)分布。表面健康人群女性組血清AMA-M2濃度為1.90（1.70-4.50）IU/ml，明顯高于男性組的1.85（1.60-2.70）IU/ml（Z=-2.804，P=0.005）。見表1。

2.4不同年齡表面健康人群血清AMA-M2水平 對302例<50歲人群和118例≥50歲人群血清AMA-M2檢測數(shù)據(jù)進(jìn)行正態(tài)性檢驗(yàn)，表明兩組數(shù)據(jù)均呈偏態(tài)分布。表面健康人群<50歲年齡組血清AMA-M2濃度為1.90（1.70～4.50）IU/ml，與≥50歲年齡組的1.90（1.60-2.10）IU/ml比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（Z=-0.317，P=0.751）。見表2。

2.5表面健康人群血清AMA-M2參考范圍 表面健康人群血清AMA-M2含量與性別相關(guān)，與年齡無關(guān)，故分不同性別來建立血清AMA-M2的參考范圍，其95%表面健康人群血清AMA-M2的參考范圍分別為男性：0～2.50IU/ml，女性：0～4.45IU/ml。

3 討論

美國肝病學(xué)會（AASLD）和歐洲肝病學(xué)會（EASL）均將AMA-M2的存在作為PBC的3個診斷標(biāo)準(zhǔn)之一[5]。許多的研究也同時表明，AMA-M2能在PBC發(fā)病前10年的無癥狀個體中出現(xiàn)。Metcalf等對無癥狀的血清AMA-M2陽性個體進(jìn)行11～24年的隨訪，發(fā)現(xiàn)有76%的人群最終出現(xiàn)了PBC的癥狀[6]。

在本次實(shí)驗(yàn)中，我們首先對標(biāo)本進(jìn)行1：40稀釋后進(jìn)行間接免疫熒光檢測，主要基于兩方面的考慮：①EASL明確提出AMA-M2的熒光強(qiáng)度>1：40是PBC的診斷標(biāo)準(zhǔn)之一；②血清AMA-M2可早于臨床癥狀出現(xiàn)。通過檢測420份標(biāo)本，其間接免疫熒光結(jié)果均為1：40陰性，同時所有標(biāo)本ALP均小于110U/L，從而最大程度地排除了實(shí)驗(yàn)對象中可能存在無癥狀PBC個體的可能性，保證了實(shí)驗(yàn)對象的可靠性。

本次實(shí)驗(yàn)檢測結(jié)果提示，血清AMA-M2含量與性別相關(guān)，與年齡無關(guān)，故分不同性別來建立血清AMA-M2的參考范圍，并且各組數(shù)據(jù)均呈偏態(tài)分布，同時對于血清AMA-M2含量來說，其升高才具有臨床意義，因此我們在進(jìn)行參考范圍的建立時，采用第95百分位數(shù)作為95%表面健康人群的參考上限。對Alegria檢測系統(tǒng)進(jìn)行批內(nèi)和天間的精密度檢測，試驗(yàn)結(jié)果表明，Alegria全自動酶聯(lián)免疫分析儀檢測血清AMA-M2具有良好的重復(fù)性，當(dāng)天間不精密度的CV為10%時，Alegria全自動酶聯(lián)免疫分析儀在本實(shí)驗(yàn)室檢測AMA-M2的最低檢測值約為2.00IU/ml，該結(jié)果均低于通過試驗(yàn)得出的男性和女性的參考范圍上限，表明該檢測系統(tǒng)檢測血清AMA-M2具有較好的靈敏度，完全符合臨床應(yīng)用要求。

綜上所述，AMA-M2對于PBC具有很高的診斷價值，進(jìn)行血清AMA-M2檢測也有利于PBC的早期發(fā)現(xiàn)和干預(yù)。因此對體檢人群進(jìn)行該項(xiàng)目的開展具有較高的應(yīng)用價值。另外，不同實(shí)驗(yàn)室由于實(shí)驗(yàn)方法和實(shí)驗(yàn)條件的差異，不同地區(qū)人群生活環(huán)境和生活習(xí)慣的差異，將有必要建立本實(shí)驗(yàn)室本地區(qū)表面健康人群的參考范圍。

參考文獻(xiàn)：

[1]Saito H，Takahashi A，Abe K，et al.Autoantibodies by line immunoassay in patients with primary biliary cirrhosis[J].Fukushima J Med Sci，2012，58（2）：107-116.

[2]Mantaka A，Koulentaki M，Chlouverakis G，et al.Primary biliary cirrhosis in a genetically homogeneous population：disease associations and familial occurrence rates[J].BMC Gastroenterol，2012，12：110.

[3]Smyk DS，Bogdanos DP，Mytilinaiou MG，et al.Rheumatoid arthritis and primary biliary cirrhosis：cause，consequence，orcoincidence[J].Arthritis，2012，2012：391567.

[4]Smyk DS，Rigopoulou EI，Pares A，et al.Sex differences associated with primary biliary cirrhosis[J].Clin Dev Immunol，2012，2012：610504.

[5]Lindor KD，Gershwin ME，Poupon R，et al.American Association for study of Liver Disease.Primary biliary cirrhosis[J].Hepatology，2009，50：291-308.

[6]Metcalf JV，Mitchison HC，Palmer JM，et al.Natural history of early primary biliary cirrhosis[J].Lancet，1996，348（9039）：1399-402.編輯/金昊天