腦膜瘤患者圍手術(shù)期腦脊液中MMP—2、MMP—9、HGF水平的動(dòng)態(tài)變化及其臨床意義

胡俊峰　王建禎

摘要：目的 研究腦膜瘤患者圍手術(shù)期腦脊液中基質(zhì)金屬蛋白酶（MMP-2、MMP-9）及肝細(xì)胞生長因子（HGF）水平的動(dòng)態(tài)變化并探討其臨床意義。方法 2013年5月～2014年10月在我院神經(jīng)外科手術(shù)的42例腦膜瘤患者作為實(shí)驗(yàn)組，所有病例均為我院病理科診斷為腦膜瘤患者，依據(jù)WHO腦腫瘤分級(jí)將所有患者分為低級(jí)別組（I級(jí)）和高級(jí)別組（Ⅱ-Ⅲ級(jí)），選取同期10例門診健康體檢人群為對(duì)照組，行腰椎穿刺分別采集患者術(shù)前24h、術(shù)后24h、術(shù)后72h和術(shù)后120h腦脊液。采用ELISA法檢測標(biāo)本中MMP-2、MMP-9、HGF的表達(dá)水平并進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。結(jié)果 42例腦膜瘤患者術(shù)前CSF中MMP-2、MMP-9、HGF水平顯著增高（P<0.05），其中高級(jí)別組CSF中MMP-2、MMP-9、HGF水平顯著高于低級(jí)別組（P<0.05）；CSF中MMP-2、MMP-9、HGF的水平在手術(shù)后24h內(nèi)明顯降低。結(jié)論 腦膜瘤患者腦脊液中MMP-2、MMP-9、HGF的水平與對(duì)照組相比都有顯著性差異，這些細(xì)胞因子可能在腦膜瘤免疫和侵襲中起主導(dǎo)或決定性作用；腦膜瘤患者腦脊液中MMP-2、MMP-9、HGF的表達(dá)在高級(jí)別與低級(jí)別之間有顯著性差異，可以作為腦膜瘤級(jí)別的參考指標(biāo)，其水平在術(shù)后24h內(nèi)明顯降低，可能與載瘤狀態(tài)解除有關(guān)，可以作為預(yù)測患者臨床預(yù)后的生化指標(biāo)。

關(guān)鍵詞：腦膜瘤；基質(zhì)金屬蛋白酶；肝細(xì)胞生長因子；腦脊液

浸潤性是腦膜瘤重要的生物學(xué)特征，腫瘤組織產(chǎn)生的多種蛋白酶對(duì)細(xì)胞外基質(zhì)和基底膜的降解是腫瘤浸潤和轉(zhuǎn)移的首要條件。MMP-2、MMP-9是最重要的基質(zhì)蛋白酶，HGF是一種多肽生長因子，與其受體結(jié)合后，具有強(qiáng)促分裂、組織形成、誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞遷移、侵襲以及誘導(dǎo)血管生成等作用，本研究應(yīng)用ELISA法檢測腦膜瘤患者圍手術(shù)期腦脊液中MMP-2、MMP-9、HGF水平的動(dòng)態(tài)變化，以探討這些酶的表達(dá)與腫瘤惡性程度及預(yù)后的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1一般資料 2013年5月～2014年10月在我院神經(jīng)外科手術(shù)的42例腦膜瘤患者作為實(shí)驗(yàn)組，年齡12～60歲，平均38.5歲，其中男18例，女24例，所有病例均由我院病理科確診為腦膜瘤患者，依據(jù)WHO腦腫瘤分級(jí)將所有腦膜瘤患者分為低級(jí)別組（I級(jí)）和高級(jí)別組（Ⅱ-Ⅲ級(jí)），其中低級(jí)別組29例，高級(jí)別組13例；選取同期10例門診健康體檢人群為對(duì)照組，年齡26～60歲，平均38.8歲，其中男4例，女6例。所有手術(shù)治療均得到我院倫理委員會(huì)同意，術(shù)前均行手術(shù)風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估，告知患者及家屬手術(shù)風(fēng)險(xiǎn)及術(shù)后可能并發(fā)癥，并簽手術(shù)知情同意書。

1.2方法 術(shù)前高顱壓患者，給予甘露醇脫水降顱壓治療，幕上腫瘤患者給予丙戊酸鈉預(yù)防癲癇，同時(shí)糾正水、電解質(zhì)紊亂，控制血脂、血糖、血壓，改善胃腸道功能。42例手術(shù)患者均用顯微技術(shù)切除，14例位置表淺并遠(yuǎn)離功能區(qū)行腫瘤全切除，5例腫瘤臨近重要功能區(qū)，行腫瘤部分切除，17例腫瘤呈彌漫性生長而無明顯邊界，6例腫瘤部位較深。嚴(yán)格按照腰椎穿刺操作規(guī)范，實(shí)驗(yàn)組患者分別留取術(shù)前24h、術(shù)后24h、術(shù)后72h和術(shù)后120h腦脊液。采集腦脊液后，立即行腦脊液常規(guī)生化檢查，剩余標(biāo)本4℃4000×r/min離心20min后，收集上清液置于-80℃冰箱保存，對(duì)照組處理方法同手術(shù)組，采用雙抗夾心酶聯(lián)免疫吸附法，根據(jù)試劑孔的OD值與空白孔OD值得差值作為縱坐標(biāo)，以標(biāo)準(zhǔn)品濃度作為橫坐標(biāo)繪制相關(guān)曲線，依待測標(biāo)本的OD值查得其濃度。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 所有數(shù)據(jù)均以±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，采用統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件SPSS 17.0對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，應(yīng)用t檢驗(yàn)及單因素方差分析比較各組間差別和組內(nèi)不同時(shí)間點(diǎn)的差別，P﹤0.05代表有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。

2 結(jié)果

42例腦膜瘤患者手術(shù)均順利完成，無術(shù)后腦脊液漏、顱內(nèi)血腫及切口感染等近期并發(fā)癥，2例術(shù)后出現(xiàn)胃腸紊亂，內(nèi)科治療后均緩解，實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組年齡差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，MMP-2、MMP-9、HGF水平結(jié)果如表1。

高級(jí)別組中MMP-2、MMP-9、HGF水平明顯高于低級(jí)別組，結(jié)果如表2。

腦膜瘤患者CSF中MMP-2、MMP-9、HGF術(shù)后較術(shù)前明顯降低，結(jié)果如表3。

3 討論

腦膜瘤是腦腫瘤系統(tǒng)中僅次于膠質(zhì)瘤的常見腫瘤，它不僅向顱骨及硬膜浸潤，還可向腦組織浸潤。MMP-2、MMP-9是Ⅳ型膠原酶，能降解以Ⅳ型膠原為主的細(xì)胞外基質(zhì)和基底膜，在腫瘤浸潤轉(zhuǎn)移中起著重要作用。HGF是一種多肽生長因子，與其受體結(jié)合后，具有強(qiáng)促分裂、組織形成、誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞遷移、侵襲以及誘導(dǎo)血管生成等作用。因此我們對(duì)42例腦膜瘤CSF中MMP-2、MMP-9、HGF進(jìn)行ELISA檢測，發(fā)現(xiàn)術(shù)前腦脊液中MMP-2、MMP-9、HGF水平顯著增高（P<0.05）；高級(jí)別組的腦脊液中MMP-2、MMP-9、HGF水平顯著高于低級(jí)別組（P<0.05），MMP-2、MMP-9、HGF水平在手術(shù)后24 h內(nèi)明顯降低，MMP-9在三個(gè)指標(biāo)中差異最顯著，靈敏度較高。

Sandeng等在惡性及浸潤性腦膜瘤中檢測到MMP-9高表達(dá)，在良性腦膜瘤中MMP-9少量表達(dá)，MMP-2在良、惡性腦膜瘤中均高表達(dá)。本研究顯示高級(jí)別組中MMP-9、MMP-2高表達(dá)，MMP-9水平明顯高于MMP-2、HGF，表明侵襲性腦膜瘤高分泌MMP-9，MMP-2可能又通過激活MMP-9協(xié)同作用[1]，從而共同降解細(xì)胞外基質(zhì)和基底膜，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞向周圍侵襲，MMP-9和MMP-2共同高表達(dá)在腦膜瘤浸潤中起重要作用。術(shù)后MMP-9、MMP-2水平的降低，這可能與載瘤狀態(tài)解除有關(guān)，也提示它有可能來源于腫瘤細(xì)胞本身或腫瘤刺激周圍正常細(xì)胞產(chǎn)生，MMP-9、MMP-2與浸潤性腦膜瘤存在的關(guān)系密切，可以作為腦膜瘤預(yù)后重要參考指標(biāo)，值得深入研究。

HGF最初是從部分肝切除的大鼠血小板和血漿中純化獲得，被認(rèn)為是一種刺激肝細(xì)胞增生的因子，其主要通過細(xì)胞膜上的特異性跨膜受體C-Met而發(fā)揮生物學(xué)效應(yīng)，HGF是有效的血管生成因子，能誘導(dǎo)多種上皮細(xì)胞形成分支管狀結(jié)構(gòu)，具有直接刺激微血管內(nèi)皮細(xì)胞生長作用。在本研究中，HGF在高級(jí)別組中高表達(dá)，其原因可能是HGF與C-Met結(jié)合后激活受體發(fā)生自身磷酸化，進(jìn)而導(dǎo)致多種底物蛋白磷酸化，從而形成一種包括膜外結(jié)合位點(diǎn)、跨膜蛋白、膜內(nèi)激酶區(qū)域完整的細(xì)胞膜受體，決定著腦膜瘤的浸潤能力，術(shù)后因腫瘤消失而逐漸降低，在高級(jí)別組中表達(dá)高于低級(jí)別組，其水平與腫瘤惡性程度呈正相關(guān)。Martinez-Rumayor A等對(duì)42例腦膜瘤患者的研究發(fā)現(xiàn)，測定HGF及其受體C-Met在腦膜瘤中的表達(dá)可以作為一個(gè)腦膜瘤復(fù)發(fā)預(yù)測因素。

腦膜瘤的發(fā)生發(fā)展是多方面、多因素共同作用的結(jié)果，在對(duì)腫瘤的研究中，許多學(xué)者對(duì)多種因素進(jìn)行的大量的研究，但是，最終沒有找到令人滿意的答案，本研究中MMP-2、MMP-9、HGF與腦膜瘤的密切相關(guān)性，為腦膜瘤臨床的治療提供了有力的參考價(jià)值，筆者相信，對(duì)腦膜瘤細(xì)胞因子的深入研究可能會(huì)推動(dòng)腫瘤生成機(jī)制、以及腫瘤治療的研究進(jìn)展。

參考文獻(xiàn)：

[1]Fridman R，Toth M，Pena D.et al.Activation of progelatinase B（MMP-9）by gelatinase A（MMP-2）[J].Cancer Res，1995，55：2548.編輯/哈濤