膝骨性關(guān)節(jié)炎患者關(guān)節(jié)液中MMP—7、MMP—9、TIMP—1、TNF—α的表達(dá)及意義

魯?！”R超　張嘉良　劉文剛　倪新玲

[摘要]目的觀察并探討膝關(guān)節(jié)骨性關(guān)節(jié)炎患者膝關(guān)節(jié)液中MMP-7、MMP-9、TIMP-1、TNF-α水平與病變程度的關(guān)系。方法膝關(guān)節(jié)骨性關(guān)節(jié)炎患者97例，根據(jù)患者的X線片，把OA的嚴(yán)重程度分為0～Ⅳ級(jí)，并進(jìn)行WOMAC骨關(guān)節(jié)炎指數(shù)評(píng)分，檢測(cè)膝關(guān)節(jié)液中MMP-7、MMP-9、TIMP-1蛋白表達(dá)量及TNF-α水平，以健康志愿者10例為正常對(duì)照組。結(jié)果骨性關(guān)節(jié)炎患者膝關(guān)節(jié)液中MMP-7、MMP-9、TIMP-1、TNF-α水平均高于正常對(duì)照組（P<0.05），隨著病變程度加重，膝關(guān)節(jié)液中MMP-7、MMP-9、TIMP-1、TNF-α水平顯著增加。結(jié)論MMP-7、MMP-9、TIMP-1、TNF-α水平在骨性關(guān)節(jié)炎患者膝關(guān)節(jié)液中均升高，與病變程度密切相關(guān)，檢測(cè)這些指標(biāo)有助于對(duì)膝關(guān)節(jié)骨性關(guān)節(jié)炎病情的判斷。

[關(guān)鍵詞]骨性關(guān)節(jié)炎；膝關(guān)節(jié)；基質(zhì)金屬蛋白酶；腫瘤壞死因子α

[中圖分類號(hào)]R684 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼]A [文章編號(hào)]2095-0616（2015）22-11-05

膝關(guān)節(jié)骨性關(guān)節(jié)炎（KOA）是一種多見于中老年人的多發(fā)病、常見病。它的病理特征是膝關(guān)節(jié)軟骨不斷褪變、軟骨下骨的病變、骨贅逐漸形成的退行性骨關(guān)節(jié)病變。但是，迄今為止，其具體的發(fā)病機(jī)理仍然沒有闡明。近年來，國(guó)內(nèi)外大量研究發(fā)現(xiàn)基質(zhì)金屬蛋白酶（MMPs）、腫瘤壞死因子-α（TNF-α）的表達(dá)及活性與OA發(fā)病機(jī)制之間存在著密切的關(guān)系。目前對(duì)于MMP-7、MMP-9在骨性關(guān)節(jié)炎患者中的表達(dá)研究較少。因此，在本研究中，我們研究各個(gè)階段膝關(guān)節(jié)骨性關(guān)節(jié)炎的臨床表現(xiàn)、相關(guān)的分子生物學(xué)代謝的改變，以尋找疼痛、僵硬、活動(dòng)功能等臨床指標(biāo)基質(zhì)金屬蛋白酶-7、-9、TNF-α、TIMP1等指標(biāo)的相關(guān)性，從而客觀評(píng)估MMP-7、MMP-9、TIMP1、TNF-α和以及WOMAC骨關(guān)節(jié)炎指數(shù)在骨性關(guān)節(jié)炎診斷中的意義及價(jià)值，從而為找到早期、敏感、準(zhǔn)確的膝關(guān)節(jié)骨性關(guān)節(jié)炎的診斷方法而做出探索。

1資料與方法

1.1一般資料

1.1.1骨性關(guān)節(jié)炎組

共97例，病例均來源于2013年10月～2014年3月就診于廣東省第二中醫(yī)院骨傷一科門診及住院部的患者，均符合骨性關(guān)節(jié)炎的診斷標(biāo)準(zhǔn)。根據(jù)患者的x線片，以Kellgren和Lawrence影像學(xué)分級(jí)量化標(biāo)準(zhǔn)，把OA的嚴(yán)重程度分為0～Ⅳ級(jí)：0級(jí)，正常；Ⅰ級(jí)，關(guān)節(jié)腔間隙≥7mm，關(guān)節(jié)表面骨贅形成；Ⅱ級(jí)，關(guān)節(jié)腔間隙4～7mm，有明顯骨贅；Ⅲ級(jí)，關(guān)節(jié)腔間隙≤4mm，有中等量骨贅；Ⅳ級(jí)，關(guān)節(jié)腔間隙消失，有大量骨贅。入選患者97例，其中Ⅰ級(jí)者33例，Ⅱ級(jí)者28例，Ⅲ級(jí)者20例，Ⅳ級(jí)者16例。

1.1.2正常人組

共10例，來源于2013年10月～2014年3月于廣東省第二中醫(yī)院骨傷一科門診自愿接受膝關(guān)節(jié)液檢查的健康體檢者。無關(guān)節(jié)炎和其他感染性疾病，肝腎功能等指標(biāo)均正常。

1.2診斷標(biāo)準(zhǔn)

1.2.1西醫(yī)診斷標(biāo)準(zhǔn)西醫(yī)診斷標(biāo)準(zhǔn)參照1995年美國(guó)風(fēng)濕病學(xué)院推薦的膝關(guān)節(jié)骨關(guān)節(jié)炎的診斷標(biāo)準(zhǔn)。

1.2.2影像學(xué)分級(jí)采用Kellgren和Lawrence影像學(xué)分級(jí)量化標(biāo)準(zhǔn)。

1.2.3膝骨關(guān)節(jié)炎臨床嚴(yán)重度分級(jí)采用、美國(guó)西部Ontario和McMaster大學(xué)骨關(guān)節(jié)炎指數(shù)評(píng)分（WOMAC骨關(guān)節(jié)炎指數(shù)評(píng)分）。包括疼痛、僵直、進(jìn)行日?；顒?dòng)的難度，共三方面癥狀評(píng)分，以3項(xiàng)評(píng)分之和為WOMAC骨關(guān)節(jié)炎總指數(shù)。

1.3納入標(biāo)準(zhǔn)

（1）年齡在40～70歲。（2）符合上述診斷標(biāo)準(zhǔn)。（3）排除合并有其他系統(tǒng)疾病者。（4）對(duì)研究意義有正確認(rèn)識(shí)，有良好的依從性者，并簽署知情同意書。

1.4排除標(biāo)準(zhǔn)

（1）患者年齡在35歲以下或者在69歲以上者。（2）不符合骨性關(guān)節(jié)炎診斷標(biāo)準(zhǔn)者。（3）妊娠或哺乳期婦女。（4）合并有重要臟器功能障礙及精神病患者等。（5）合并骨結(jié)核等骨病以及急性創(chuàng)傷等患者。（6）膝關(guān)節(jié)感染、皮膚破損、潰爛等不適應(yīng)進(jìn)行關(guān)節(jié)穿刺者。（7）不能配合研究或不同意參加本研究者。（8）正在參加其他臨床試驗(yàn)的患者。

1.5研究方法1.5.1觀察內(nèi)容（1）一般資料：受試者姓名、年齡、性別、病程等。（2）膝關(guān)節(jié)影像學(xué)特點(diǎn)：膝X線特點(diǎn)，膝關(guān)節(jié)局部狀況和全身的情況。（3）WOMAC骨關(guān)節(jié)炎指數(shù)評(píng)分（包括疼痛、僵硬、進(jìn)行日常活動(dòng)的難度）。（4）關(guān)節(jié)液中MMP-7、MMP-9、TIMP-1及TNF-α的含量。

1.5.2主要的實(shí)驗(yàn)儀器設(shè)備及試劑

酶標(biāo)儀（芬蘭，MK352型），冷凍高速離心機(jī)（SIGMA），ELISA試劑盒（美國(guó)R&DSystems公司）等。

1.5.3標(biāo)本（關(guān)節(jié)液）的采集與保存受試者采用仰臥位，膝關(guān)節(jié)伸直體位放置，取大腿股四頭肌外側(cè)緣與髕骨上緣連線交匯處作為穿刺點(diǎn)，75%醫(yī)用乙醇常規(guī)消毒穿刺部位，選用5mL注射器進(jìn)行穿刺，當(dāng)穿刺針頭進(jìn)入膝關(guān)節(jié)腔內(nèi)，感覺有落空感時(shí)，抽取膝關(guān)節(jié)液0.5～2mL，注入含肝素試管內(nèi)。采集標(biāo)本后2h內(nèi)，離心，快速冷凍，置于-80%超低溫冰箱保存。

1.5.4含量測(cè)定采用雙抗體夾心法測(cè)定基質(zhì)金屬蛋白酶及金屬蛋白酶組織抑制因子（MMP-7、MMP-9、TIMP-1）的含量；采用雙抗夾心ABC-ELISA法測(cè)定膝關(guān)節(jié)液TNF-α的含量。嚴(yán)格按試劑盒說明書步驟進(jìn)行。

1.6統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用統(tǒng)計(jì)軟件SPSS13.0處理所得數(shù)據(jù)，計(jì)量資料用（x±s）表示，選用成組t檢驗(yàn)分析OA患者及健康對(duì)照組MMPs、TIMP-1蛋白及其比值等指標(biāo)的差異；WOMAC骨關(guān)節(jié)炎指數(shù)分級(jí)與MMPs、TIMP-1蛋白及其比值等指標(biāo)的相關(guān)性、x線等級(jí)與關(guān)節(jié)液中MMPs、TIMP-1蛋白及其比值等指標(biāo)的相關(guān)性用Spearman相關(guān)的統(tǒng)計(jì)分析，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。