自制混合血漿在血漿糾正試驗(yàn)中的臨床應(yīng)用初探

龔 婭，何宗忠，王曉冬，史秋霞，林林東(廣州軍區(qū)廣州總醫(yī)院157分院檢驗(yàn)科，廣州 510510)

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·論 著·

自制混合血漿在血漿糾正試驗(yàn)中的臨床應(yīng)用初探

龔 婭，何宗忠△，王曉冬，史秋霞，林林東(廣州軍區(qū)廣州總醫(yī)院157分院檢驗(yàn)科，廣州 510510)

目的 通過(guò)比較不同溫度保存的自制混合血漿與正?；旌涎獫{對(duì)血漿糾正試驗(yàn)的影響，探討自制混合血漿在血漿糾正試驗(yàn)中的臨床應(yīng)用價(jià)值。方法 收集凝血酶原時(shí)間(PT)≥18.0 s和(或)活化部分凝血活酶時(shí)間(APTT)≥52.0 s的血漿標(biāo)本35份，分別與正?；旌涎獫{(A組)、-80 ℃(B組)和-20 ℃(C組)保存的自制混合血漿按體積1∶1混合后做血漿糾正試驗(yàn)，即混合后立即測(cè)定PT和(或)APTT，37 ℃孵育1 h后再次檢測(cè)。計(jì)算35份標(biāo)本可被正?；旌涎獫{糾正的比例及3組的糾正率。結(jié)果 88.57%(31/35)可被正常混合血漿立即糾正，4例未被糾正，其中1例孵育后比孵育前測(cè)定時(shí)間更加延長(zhǎng)，占2.86%；3例孵育前后測(cè)定結(jié)果不變，占8.57%。在PT延長(zhǎng)的血漿糾正試驗(yàn)中，各組之間糾正率差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。在APTT延長(zhǎng)的糾正試驗(yàn)中，孵育前A組、B組和C組的糾正率分別為(32.93±16.17)%、(27.56±23.48)%和(13.70±12.87)%，A組和B組之間糾正率差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，其余各組之間糾正率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。結(jié)論 -80 ℃保存的自制混合血漿可代替商品化的正?；旌涎獫{進(jìn)行血漿糾正試驗(yàn)。

正常混合血漿； 血漿糾正試驗(yàn)； 凝血酶原時(shí)間； 活化部分凝血活酶時(shí)間

臨床上常遇到凝血酶原時(shí)間(PT)和(或)活化部分凝血活酶時(shí)間(APTT)延長(zhǎng)(PT延長(zhǎng)超過(guò)3 s，APTT≥1.3倍正常參考值)的患者，其原因有可能為凝血因子缺乏、存在特異性的抗凝血因子或非特異性抗凝物質(zhì)(如磷脂抗體或副蛋白)等[1-2]。臨床上可表現(xiàn)為以凝血因子缺乏為主的出血傾向和存在狼瘡抗凝物質(zhì)的血栓形成傾向，這2種不同傾向采取的治療方案也不相同。在經(jīng)濟(jì)發(fā)達(dá)國(guó)家或地區(qū)可以采取檢測(cè)具體的凝血因子、特異性或非特異性抗凝物質(zhì)等進(jìn)一步加以確認(rèn)，但基層單位往往由于費(fèi)用昂貴而無(wú)力開展，為此筆者選取2015年1～3月本院收治的PT≥18.0 s或APTT≥52.0 s且滿足凝血酶時(shí)間(TT)正常和纖維蛋白原(FIB)≥2.0 g/L的患者的異常血漿35份，分別與正?；旌涎獫{、-80與-20 ℃保存的自制混合血漿按體積1∶1混合后立即檢測(cè)PT和(或)APTT，接著37 ℃孵育1 h后再次檢測(cè)，然后統(tǒng)計(jì)分析以探討自制混合血漿應(yīng)用于血漿糾正試驗(yàn)的臨床應(yīng)用價(jià)值，現(xiàn)將研究結(jié)果報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2015年1～3月本院收治的PT和(或)APTT延長(zhǎng)的35例血漿標(biāo)本，其中男15例，女20例；標(biāo)本來(lái)源手術(shù)科室12例，非手術(shù)科室23例；年齡3～88歲，平均(58.31±20.45)歲；其中單獨(dú)PT延長(zhǎng)10例、單獨(dú)APTT延長(zhǎng)11例、二者均延長(zhǎng)14例。納入標(biāo)準(zhǔn)：PT≥18.0 s 或APTT≥52.0 s且滿足TT正常和FIB≥2.0 g/L。

1.2 方法

1.2.1 采集方法 0.109 mol/L枸櫞酸鈉抗凝真空采血管(BD公司)采血至1.8 mL刻度線，充分搖勻，以3 000 r/min離心10 min，取血漿分別檢測(cè)PT、APTT、TT、FIB。

1.2.2 儀器與試劑 全自動(dòng)血凝分析儀為法國(guó)STAGO公司Stago-compact。正?；旌涎獫{(批號(hào)111289)、PT(批號(hào)112094)、APTT(批號(hào)112290)、TT(批號(hào)112003)、FIB(批號(hào)112342)均為廠家配套原裝試劑，室內(nèi)質(zhì)控品與定標(biāo)品由STAGO公司提供，均嚴(yán)格按照說(shuō)明書操作，所有試劑均在有效期內(nèi)使用。所有標(biāo)本均為室內(nèi)質(zhì)控在控的狀態(tài)下檢測(cè)。

1.2.3 自制混合血漿 收集PT、APTT、FIB、TT 4項(xiàng)結(jié)果均處于正常范圍的20份以上無(wú)溶血、黃疸及脂濁的非孕婦血漿標(biāo)本，充分混勻后以3 000 r/min離心10 min，棄底部血漿[3]；取0.8 mL上層血漿測(cè)定PT、APTT、FIB、TT，以確保4項(xiàng)結(jié)果均在正常范圍內(nèi)，37 ℃水浴1 h后再次檢測(cè)4項(xiàng)指標(biāo)均正常。取上層血漿分成2份，分別放置-80與-20 ℃冰箱保存以備后續(xù)試驗(yàn)。

1.2.4 血漿糾正試驗(yàn) 各取200 μL的異常血漿分別與200 μL的正?；旌涎獫{(A組)、-80 ℃保存的自制混合血漿(B組)、-20 ℃保存的自制混合血漿(C組)充分混合后立即測(cè)定PT和(或)APTT，水浴1 h后再次測(cè)定PT和(或)APTT。

1.2.5 血漿糾正率的計(jì)算 血漿糾正率(%)=(糾正前的測(cè)定值-糾正后的測(cè)定值)/糾正前的測(cè)定值×100%。

2 結(jié) 果

2.1 血漿糾正試驗(yàn)檢測(cè)結(jié)果構(gòu)成比 88.57%(31/35)可被正常血漿立即糾正，提示可能存在凝血因子缺乏；2.86%(1/35)不能被糾正且孵育后較孵育前測(cè)定時(shí)間更長(zhǎng)，提示受檢血漿中可能存在特異性抗凝血因子抗體；8.57%(3/35)不能被立即糾正且孵育前后測(cè)定結(jié)果不變，提示血漿中可能有磷脂抗體或副蛋白等非特異性抗凝物質(zhì)。

表1 血漿糾正試驗(yàn)結(jié)果±s)

注：與A組比較，*P<0.05；與B組比較，#P<0.05。

2.2 正?；旌涎獫{與自制混合血漿在血漿糾正試驗(yàn)中的結(jié)果比較 在PT延長(zhǎng)的血漿糾正試驗(yàn)中各組之間糾正率差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.395)。在APTT延長(zhǎng)的糾正試驗(yàn)中，孵育前A組、B組和C組的糾正率分別為(32.93±16.17)%、(27.56±23.48)%和(13.70±12.87)%，A組和B組糾正率接近，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.436)，A組和C組之間及B組和C組之間糾正率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P值分別為0.005和0.028)。見表1。

3 討 論

PT和(或)APTT延長(zhǎng)的原因非常多，如采血時(shí)抗凝劑與血液標(biāo)本比例差異、抗凝藥物治療、各種慢性肝病、彌散性血管內(nèi)凝血、凝血因子Ⅻ缺乏、狼瘡抗凝物陽(yáng)性、蛋白C缺乏、維生素K依賴性因子Ⅱ、Ⅶ、Ⅺ及Ⅹ的聯(lián)合缺乏等[4-6]。具體的凝血因子、維生素K、蛋白C、狼瘡因子等檢測(cè)對(duì)判斷出血傾向或血栓形成傾向具有重要臨床意義，但設(shè)備和檢測(cè)條件等限制了大多數(shù)的醫(yī)療單位無(wú)法開展較為全面的原因分析，影響了臨床應(yīng)用，探索經(jīng)濟(jì)實(shí)用的方法就尤為重要。分析PT和(或)APTT延長(zhǎng)的原因，血漿糾正試驗(yàn)是一個(gè)重要方法，可提示是否缺乏凝血因子、存在特異性的抗凝血因子抗體或非特異性抗凝物質(zhì)(如磷脂抗體或副蛋白)等。

研究結(jié)果表明，88.57%PT和(或)APTT延長(zhǎng)的患者可能存在凝血因子缺乏，遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于北京協(xié)和醫(yī)院郭夢(mèng)妮[1]統(tǒng)計(jì)的數(shù)據(jù)，而非特異性抗凝物質(zhì)遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于Chng等[7]報(bào)道的數(shù)據(jù)，可能與本次的研究對(duì)象中無(wú)自身免疫性疾病患者有關(guān)。在PT延長(zhǎng)的血漿糾正試驗(yàn)中，其糾正率的差異在各組之間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，表明自制混合血漿可以替代正?；旌涎獫{進(jìn)行PT延長(zhǎng)的血漿糾正試驗(yàn)。在APTT延長(zhǎng)的糾正試驗(yàn)中，-80 ℃冰箱保存的自制混合血漿其糾正率雖低于正?；旌涎獫{，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；-20 ℃保存的自制混合血漿其糾正率明顯低于正?；旌涎獫{與-80 ℃保存的自制混合血漿，其差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，表明-20 ℃保存的自制混合血漿不能代替正?；旌涎獫{，其糾正效果也不如-80 ℃深凍冰箱保存的自制混合血漿。常規(guī)凝血指標(biāo)的檢測(cè)宜在采血后1 h內(nèi)完成，置-20 ℃下僅能放置2周，-70 ℃條件下可放置6個(gè)月，而-80 ℃深凍冰箱保存則可維持新鮮冰凍血漿的凝血性質(zhì)等同于新鮮血漿，保證凝血因子、抗凝物質(zhì)的活性，可至少穩(wěn)定8個(gè)月[8]。本研究也證實(shí)了保存溫度越低，凝血因子的促凝活性保持時(shí)間也越長(zhǎng)，與文獻(xiàn)[9]報(bào)道一致。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，-20 ℃冰箱保存的自制混合血漿可用于PT的血漿糾正試驗(yàn)而不能用于APTT的糾正試驗(yàn)，這可能與Ⅷ、Ⅸ、Ⅺ因子為內(nèi)源性凝血途徑的關(guān)鍵因子，而這些因子在不同的保存條件下其活性變化也非常大有關(guān)。Ⅷ、Ⅸ、Ⅺ等因子隨放置溫度升高、時(shí)間延長(zhǎng)，其活性呈下降趨勢(shì)，尤其是Ⅷ因子最不穩(wěn)定[10]。數(shù)據(jù)顯示Ⅷ因子在-80 ℃超低溫保存能維持1個(gè)月以上，而-20 ℃條件下僅能保持1 d，室溫僅能維持2 h，置20 ℃的室溫12 h后其活性降至43%，24 h后則僅有30%，極易失去活性[11]。另外，-80 ℃保存的自制混合血漿雖可代替商品化的正?；旌涎獫{進(jìn)行APTT血漿糾正試驗(yàn)，但糾正效果不如商品化的正?；旌涎獫{，這可能是-80 ℃超低溫雖然可以有效保持某些因子活性，但不如廠商采用凍干的方式保存更有效。

綜上所述，建議優(yōu)先使用商品化的正?；旌涎獫{用于血漿糾正試驗(yàn)，其次使用置-80 ℃冰箱保存的自制混合血漿，不建議使用-20 ℃冰箱保存的自制混合血漿。總之，-80 ℃保存的自制混合血漿，使用方便，價(jià)格低廉，且不需要配置特殊設(shè)備，適合在基層實(shí)驗(yàn)室推廣使用。

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Preliminary investigation on clinical application of homemade mixed plasma in plasma correcting test

GONGYa,HEZong-zhong△,WANGXiao-dong,SHIQiu-xia,LINLin-dong

(DepartmentofClinicalLaboratory,157BranchHospital,GuangzhouGeneralHospitalofGuangzhouMilitaryRegion,Guangzhou,Guangdong510510,China)

Objective To explore the clinical application value of homemade plasma in the plasma correct test by comparing the influence of normal mixture plasma and homemade plasma storage at different temperatures.Methods 35 plasma samples of prothrombin time(PT)≥18.0 s and/or activated partial thromboplastin time (APTT)≥52.0 s were collected and mixed with the normal mixture plasma(group A),homemade plasma stored at -80 ℃(group B) and -20 ℃ (group C) with the proportion of 1∶1 respectively,then PT and APTT were tested immediately,and retested after 37 ℃ incubating for 1 h,finally the correcting proportion in 35 samples and the correct ratio of these three groups were calculated.Results In the 35 cases of PT and/or APTT prolongation,31 cases (88.57%) could be corrected by the normal mixture plasma and 4 cases were not corrected,among them,the detection time after incubation in 1 case(2.86%) was prolonged than that before incubation,and the detection results before and after incubation in 3 cases were unchanged,accounting for 8.57%.In the PT prolonged correction test,there was no statistical difference in the correct ratio among 3 groups (P>0.05).In the APTT prolonged correction test,the correcting ratios before incubation in the group A,B and C were (32.93±16.17)%,(27.56±23.48)% and (13.70±12.87)% respectively,there was no statistical difference in the correct ratio between the group A and B (P>0.05),which in the other groups had statistical difference(P<0.05).Conclusion The homemade plasma stored at -80 ℃ can replace the commercialization normal mixture plasma for conducting the plasma correcting test.

normal mixture plasma; plasma correcting test; prothrombin time; activated partial thromboplastin time

龔婭，女，主管技師，碩士，主要從事臨床檢驗(yàn)工作?！?/p>

，E-mail:zongzhong1107@aliyun.com。

10.3969/j.issn.1672-9455.2015.16.023

A

1672-9455(2015)16-2357-02

2015-02-12

2015-04-15)