油菜蜂花粉黃酮的研究進(jìn)展

薛茗閣，溫苗苗，祁夢(mèng)雅，卜翠萍，3*，趙祥祥，3，紀(jì)麗蓮，3　(1.揚(yáng)州大學(xué)食品科學(xué)與工程學(xué)院，江蘇揚(yáng)州 517；.淮陰師范學(xué)院生命科學(xué)學(xué)院，江蘇省環(huán)洪澤湖生態(tài)農(nóng)業(yè)生物技術(shù)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，江蘇淮安 3300；3.淮陰師范學(xué)院，江蘇省高校區(qū)域現(xiàn)代農(nóng)業(yè)與環(huán)境保護(hù)協(xié)同創(chuàng)新中心，江蘇淮安 3300)

?

油菜蜂花粉黃酮的研究進(jìn)展

薛茗閣1，2，溫苗苗2，祁夢(mèng)雅2，卜翠萍2，3*，趙祥祥2，3，紀(jì)麗蓮1，2，3(1.揚(yáng)州大學(xué)食品科學(xué)與工程學(xué)院，江蘇揚(yáng)州 225127；2.淮陰師范學(xué)院生命科學(xué)學(xué)院，江蘇省環(huán)洪澤湖生態(tài)農(nóng)業(yè)生物技術(shù)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，江蘇淮安 223300；3.淮陰師范學(xué)院，江蘇省高校區(qū)域現(xiàn)代農(nóng)業(yè)與環(huán)境保護(hù)協(xié)同創(chuàng)新中心，江蘇淮安 223300)

摘要蜂花粉素有“微型營(yíng)養(yǎng)庫”的稱號(hào)，具有抗氧化、護(hù)肝、抑菌、抗炎等多種藥理活性。在此對(duì)油菜蜂花粉中黃酮類物質(zhì)的提取工藝、已分離或檢測(cè)到的成分及其生物活性進(jìn)行綜述，為今后其研究和開發(fā)利用提供參考。

關(guān)鍵詞油菜蜂花粉；黃酮類；提取工藝；化學(xué)成分；生物活性

Research Progress on Flavonoids of Rape Bee Pollen

XUE Ming-ge1,2, WEN Miao-miao2, QI Meng-ya2, BU Cui-ping2,3*et al(1. College of Food Science and Engineering, Yangzhou University, Yangzhou, Jiangsu 225127; 2. Jiangsu Key Laboratory for Eco-agricultural Biotechnology around Hongze Lake, School of Life Sciences, Huaiyin Normal University, Huaian, Jiangsu 223300; 3. Jiangsu Collaborative Innovation Center of Regional Modern Agriculture & Environmental Protection, Huaiyin Normal University, Huaian, Jiangsu 223300)

AbstractRape bee pollen is called “micro-nutrition library”, with a variety of pharmacological activity, antioxidant, antibacterial, anti-inflammatory and hepatoprotective. The extraction techniques, isolated and detected components and the physiological activities of citrus flavonoids were introduced, which will provide a reference on research and exploitation in the future.

Key wordsRape bee pollen; Flavonoids; Extraction technique; Chemical components; Biological activity

蜂花粉是蜜蜂在采集的花粉中加入花蜜和唾液而形成的花粉團(tuán)狀物，種類多與蜜蜂采集花朵的種類相關(guān)，其中，油菜蜂花粉應(yīng)用潛力大。油菜蜂花粉在我國(guó)分布廣泛，產(chǎn)量豐富，居我國(guó)花粉貿(mào)易之首。營(yíng)養(yǎng)價(jià)值方面，油菜蜂花粉因?yàn)楹腥梭w所需的糖類、氨基酸、脂肪酸、維生素、微量元素以及大量的酚類、酶類等其他生物活性物質(zhì)，被公認(rèn)為天然的健康食品[1]。研究證明，油菜蜂花粉具有抗氧化、抗炎癥、抗輻射、抑制腫瘤、調(diào)節(jié)免疫、抑菌、調(diào)節(jié)血脂等多種生物功效，在提高人體綜合免疫功能、調(diào)節(jié)神經(jīng)系統(tǒng)、改善腸胃功能、防治心腦血管疾病等方面發(fā)揮重要療效[2-5]。

黃酮類化合物是一類重要的天然有機(jī)化合物，是植物在長(zhǎng)期自然選擇過程中產(chǎn)生的一類次生代謝產(chǎn)物。黃酮類化合物既有高度的化學(xué)反應(yīng)性，又有很多重要的藥理作用[6]。油菜花蜂花粉中總黃酮含量在玫瑰花、五味子花等15種蜂花粉中含量最高[7]，且與蜂花粉清除自由基、降血壓、降血脂、糖尿病和前列腺炎治療和預(yù)防的功效直接相關(guān)[8-11]。目前油菜蜂花粉中黃酮類化合物的研究主要集中在提取純化、測(cè)定含量及成分、生物活性等方面。筆者在此對(duì)油菜蜂花粉中黃酮類化合物的提取工藝、化學(xué)成分和生物活性進(jìn)行歸納綜述，為今后的深入研究和開發(fā)利用提供參考。

1提取工藝

目前黃酮類化合物的傳統(tǒng)提取方法主要有加熱回流法、冷浸提取法、索式提取法，新型提取方法有超聲波輔助提取法和微波輔助提取法。王小艷等[12]分析比較加熱回流法、冷浸提取法、索式提取法和超聲波輔助提取法4種方法發(fā)現(xiàn)，索式提取法得率最高，但不適合大量樣品的制備；加熱回流法得率次之，但溶劑需求量較大，操作較繁瑣；冷浸法和超聲法得率近似，但冷浸法耗時(shí)過長(zhǎng)，同時(shí)有效成分不易完全浸出；超聲法提取時(shí)間短、使用溶劑少、操作簡(jiǎn)單，是一種可推廣的新型提取方法；經(jīng)正交試驗(yàn)，確定超聲輔助提取法的最佳工藝條件為40 ℃、100 W功率下用1∶12的料液比，提取25 min，測(cè)得含量為31.27 mg/g。黨云剛[13]通過響應(yīng)面法確定以上4種方法的最佳提取條件，綜合比較得出水浴回流法黃酮得率相對(duì)較高，但超聲法提取效率最高，作為提取方法更為合適；超聲波法最佳提取條件為溫度50 ℃、時(shí)間20 min、功率200 W、乙醇濃度80%、料液比1∶31，超聲次數(shù)3次，黃酮得率為3.249%。

微波輔助提取法作為一種新型方法，提取效率也較高。在相同的條件下，微波輔助提取法提取油菜花中黃酮得率比索式提取法、冷浸法、加熱回流法更高，槲皮素和山奈酚的含量分別可達(dá)1.37、23.44 mg/g[14]。這是因?yàn)槲⒉ǚ赏瑫r(shí)作用細(xì)胞壁的內(nèi)外兩層結(jié)構(gòu)[15]，使蜂花粉同時(shí)被加熱，內(nèi)部迅速升溫，內(nèi)壓大大增加，超過細(xì)胞壁膨脹所能承受的壓力時(shí)，細(xì)胞破裂，從而使有效成分溶解于萃取溶劑中[16-17]。

為了更好地利用超聲波和微波的優(yōu)勢(shì)，孫巖等[18]采用超聲-微波協(xié)同萃取法提取油菜蜂花粉中黃酮類物質(zhì)，與熱回流法、超聲法、微波法相比，提取效率明顯提高，同時(shí)具有節(jié)能、安全的優(yōu)點(diǎn)；在乙醇體積分?jǐn)?shù)90%、料液比1∶30、微波功率260 W、提取時(shí)間180 s條件下，提取得率最高，達(dá)3.36%。

2化學(xué)成分

已報(bào)道的油菜蜂花粉黃酮主要為黃酮醇苷類，主要包括槲皮素、山奈酚、異鼠李素、柚皮素、蘆丁。其中經(jīng)核磁鑒定的化合物有山奈酚-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷、山奈酚-3，4′-雙-O-β-D-吡喃葡萄糖苷、山奈酚-3-O-β-D-葡萄糖-(2→1)-β-D-葡萄糖苷、山奈酚-3-O-β-D-吡喃葡萄糖基-( 1→2)-β-D-吡喃葡萄糖苷、山奈酚-3-O-新橙皮糖苷[19]、槲皮素-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷、槲皮素-3-O-β-D-吡喃葡萄糖基-( 1→2)-O-β-D-吡喃葡萄糖苷、槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖-(2→1)-β-D-葡萄糖苷、5，7，4′-三羥基-8-甲氧基黃酮醇-3-O-β-D-槐糖苷[20]、異鼠李素-3-O-β-D-吡喃葡萄糖基-( 1→2)-β-D-吡喃葡萄糖苷[18]。

3生物活性

在還原力的評(píng)價(jià)結(jié)果中，黃酮類物質(zhì)和其他酚類物質(zhì)相互協(xié)同，一起發(fā)揮作用[31]。從地理角度分析，全國(guó)幾個(gè)油菜主產(chǎn)區(qū)中，新疆、湖北油菜蜂花粉中總黃酮含量、還原力和DPPH自由基清除率顯著高于其他產(chǎn)地[32]?？赡芘c植物生長(zhǎng)環(huán)境的晝夜溫差、濕度以及光照時(shí)間等因素有關(guān)[33-34]。

3.2保肝作用黃酮醇苷類物質(zhì)是油菜蜂花粉中主要的保肝活性成分。CCl4經(jīng)肝微粒體細(xì)胞色素P450酶激活后，生成三氯甲烷自由基(·CCl3)和氯自由基(·Cl)，它們攻擊肝細(xì)胞膜上磷脂分子引起脂質(zhì)過氧化或肝微粒體脂質(zhì)和蛋白質(zhì)發(fā)生共價(jià)結(jié)合，可直接引發(fā)肝細(xì)胞脂質(zhì)過氧化作用，誘發(fā)細(xì)胞死亡[35-37]。油菜蜂花粉黃酮醇苷類物質(zhì)可以通過清除活性自由基，終止自由基鏈?zhǔn)椒磻?yīng)，顯著地降低CCl4造成的脂質(zhì)過氧化小鼠苷勻漿和血清中MDA含量，提高SOD活性和總抗氧化能力(T-AOC)，改善CCl4誘導(dǎo)的脂質(zhì)過氧化損傷[38-39]。彭定利等[9，20]建立以10 mmol/L CCl4誘導(dǎo)的體外肝細(xì)胞損傷模型中，通過MTT法測(cè)定細(xì)胞存活率并以其作為細(xì)胞活性篩選指標(biāo)，正丁醇萃取組分在100 μg/ml劑量下活性可高于同劑量的水飛薊賓，可為模型組的2.41倍，初步判斷為黃酮醇苷類物質(zhì)，并從作用機(jī)制驗(yàn)證了其對(duì)CCl4引起的肝損傷具有顯著保護(hù)作用。

3.3抑菌作用Carpes[40]首先發(fā)現(xiàn)蜂花粉中的酚類物質(zhì)具有抑菌作用。孫麗萍等[41]進(jìn)而對(duì)油菜蜂花粉分離提取，以對(duì)枯草芽孢桿菌、大腸埃希氏菌、金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌的抑菌能力為活性跟蹤指標(biāo)，以最小抑菌質(zhì)量濃度(MIC)和最小殺菌質(zhì)量濃度(MBC)為評(píng)價(jià)指標(biāo)，進(jìn)行活性追蹤和結(jié)構(gòu)鑒定，結(jié)果表明，乙醚萃取部分的抑菌活性最強(qiáng)，山奈酚是其中主要抑菌活性成分，效果顯著，是油菜蜂花粉抑菌作用的主要物質(zhì)基礎(chǔ)。

3.4其他郭雪微等[42]選擇確診血脂紊亂、2型糖尿病、腦梗塞和健康者各30例，給與油菜蜂花粉黃酮類化合物口服40 mg，每日2次，持續(xù)2個(gè)月，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，血脂紊亂組、糖尿病組和腦梗塞各組甘油三酯(TG)、白細(xì)胞計(jì)數(shù)(WBC)、血小板計(jì)數(shù)(PCT)、高敏C反應(yīng)蛋白(hsCRP)和丙二醛(MDA)明顯下降，高密度脂蛋白膽固醇(HDL- C)顯著升高，血糖(BG)、總膽固醇(TC)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)也有一定程度下降，說明油菜蜂花粉黃酮類化合物具有一定程度地調(diào)節(jié)血脂、抑制炎性因子、控制血糖作用，在臨床的藥理研究有很廣闊前景[43]。

4結(jié)語

油菜蜂花粉含有大量黃酮類化合物，因其顯著的藥理特性和保健功能，具有很大的研發(fā)價(jià)值。但目前對(duì)油菜蜂花粉的主要研究停留在酚類化合物的生理活性上，在食品的應(yīng)用上也主要側(cè)重于蜂花粉整體的功能療效，還沒有完全科學(xué)地認(rèn)識(shí)黃酮生物活性上的應(yīng)用空間。另外，對(duì)黃酮的分離提取方法絕大多數(shù)還局限在試驗(yàn)室的操作階段，與商業(yè)化大規(guī)模的生產(chǎn)開發(fā)上存在一定距離。相信隨著相關(guān)試驗(yàn)的開展，油菜蜂花粉中黃酮類化合物更多的生物活性將被發(fā)現(xiàn)，被人們所開發(fā)利用。

參考文獻(xiàn)

[1] 馮慧，焦士蓉，唐遠(yuǎn)謀，等.油菜花粉研究進(jìn)展[J].食品工業(yè)，2011(9)：108-110.

[2] WAGENLEHNER F M，SCHNEIDER H，LUDWIG M，et al.A pollen extract(Cernilton)in patients with inflammatory chronic prostatitis-chronic pelvic pain syndrome：A multicentre，randomised，prospective，double-blind，placebo-controlled phase 3 study[J].European urology，2009，56：544-551.

[3] LEBLANC B W，DAVIS O K，BOUE S，et al.Antioxidant activity of Sonoran Desert bee pollen[J].Food chemistry，2009，115：1299-1305.

[4] MEDEIROS K C，F(xiàn)IGUEIREDO C A，F(xiàn)IGUEREDO T B，et al.Anti-allergic effect of bee pollen phenolic extract and myricetin in ovalbumin-sensitized mice[J].Journal of ethnopharmacology，2008，119：41-46.

[5] 汪磊，朱波，王國(guó)澤，等.油菜花粉保健功能研究進(jìn)展[J].糧食與油脂，2012(11)：5-8.

[6] 延璽，劉會(huì)青，鄒永青，等.黃酮類化合物生理活性及合成研究進(jìn)展[J].有機(jī)化學(xué)，2008，28(9)：1534-1544.

[7] 胡曉嵐，湯麗倩，張翀，等.蜂花粉總黃酮含量的品種和產(chǎn)地差異[J].食品工業(yè)科技，2013(3)：132-139.

[8] 陳南迪，方妙玉，吳錫鴻，等.不同品種蜂花粉總黃酮含量與抗氧化活性相關(guān)性的研究[J].食品工業(yè)科技，2013，34(1)：70-73.

[9] 彭定利，孫麗萍，龐杰，等.油菜蜂花粉保肝活性組分的分離及細(xì)胞學(xué)篩選[J].中國(guó)食品學(xué)報(bào)，2014，14(3)：100-105.

[10] 郭芳彬.蜂花粉防治前列腺增生的效果和機(jī)理探析[J].蜜蜂雜志，2004(10)：5-7.

[11] 韓慧英.前列康及其原料油菜花粉活性成分的研究[D].沈陽：沈陽藥科大學(xué)，2004：105-107.

[12] 王小艷，王洪倫，劉永軍，等.油菜蜂花粉總黃酮集中提取方法的研究[J].天然產(chǎn)物研究與開發(fā)，2007(19)：318-321.

[13] 黨云剛.蜂花粉中黃酮類物質(zhì)的提取及純化工藝研究[D].西安：陜西科技大學(xué)，2010：58-59.

[14] LV H H，WANG X Y，HE Y F，et al.Identification and quantification of flavonoid aglycones in rape bee pollen from Qinghai-Tibetan Plateau by HPLC-DAD-APCI/MS[J].Journal of food composition and analysis，2015，38：49-54.

[15] BLACKMORE S，WORTLEY A H，SKVARLA J J，et al.Developmental origins of structural diversity in pollen walls of Compositae[J].Plant systematics and evolution，2009，284：17-32.

[16] 賈淑云.微波萃取技術(shù)在中藥有效成分提取中的應(yīng)用[J].中國(guó)處方藥，2014，12(3)：34-35.

[17] MANDAL V，MOHAN Y，HEMALATHA S.Microwave assisted extraction-aninnovative and promising extraction tool for medicinal plant research[J].Pharmacognosy reviews，2007，1：7-18.

[18] 孫巖，郭慶興，童群義.超聲-微波協(xié)同萃取法提取油菜蜂花粉中黃酮類物質(zhì)[J].食品與發(fā)酵工業(yè)，2014，40(10)：238-244.

[19] 楊開，葉興乾，劉東紅，等.油菜花粉中黃酮苷類的制備分離和鑒定[J].中國(guó)糧油學(xué)報(bào)，2010，25(8)：91-97.

[20] 彭定利.油菜蜂花粉保肝活性成分的分離及其保肝機(jī)制初探[D].福州：福建農(nóng)林大學(xué).2013：35.

[21] VINSON J A，DABBAGH Y A，SERRY M M，et al.Plant flavonoids，especially tea flavonols，are powerful antioxidants using an in vitro oxidation model for heart disease[J].Agric Food Chem，1995，43(11)：2800-2802.

[23] ENRIQUE M，GLORIA M.The anti-oxidant activity of Chilean honey and bee pollen produced in the llaima volcano’ s zones[J].Journal of food quality，2012，35：315-322.

[24] 石玉平，盧挺，王永寧.油菜蜂花粉中黃酮類物質(zhì)清除羥基自由基的研究[J].食品科學(xué)，2004，11(25)：300-302.

[25] 陳南迪，方妙玉，吳錫鴻，等.不同品種蜂花粉總黃酮含量與抗氧化活性相關(guān)性的研究[J].食品工業(yè)科技，2013，34(1)：70-73.

[26] 楊佳林.油菜蜂花粉黃酮醇的測(cè)定及其抗氧化活性研究[J].食品科學(xué)，2010，31(3)：79-82.

[27] 饒劍，吳盼盼，徐德平.油菜蜂花粉的抗氧化活性[J].食品與發(fā)酵工業(yè)，2014，40(1)：139-142.

[28] 趙劍喜，卜令娜，劉曄瑋，等.油菜蜂花粉抗氧化活性研究[J].天然產(chǎn)物研究與開發(fā)，2012，24(7)：959-962.

[29] 曹煒，趙長(zhǎng)琦，尉亞輝.油菜花粉黃酮對(duì)氧自由基致鼠紅細(xì)胞膜損傷的保護(hù)作用[J].食品科學(xué)，2002，23(9)：115-118.

[30] 魏永生，鄭敏燕.油菜蜂花粉黃酮類物質(zhì)的提取及抗氧化性研究[J].西北農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)，2005，14(3)：123-126.

[31] 張紅城，董捷，李慧，等.六中蜂花粉多酚和黃酮類物質(zhì)含量測(cè)定及抗氧化性的研究[J].食品科學(xué)，2007，28(9)：500-504.

[32] 程妮，王畢妮，鄧建軍，等.不同產(chǎn)地油菜蜂花粉抗氧化活性比較研究[J].食品科學(xué)，2011，32(21)：34-36.

[33] SANTOS-GOMES P C，SEABRA R M，ANDRADE P B，et al.Phenolic antioxidant compounds produced byinvitroshoots of sage(SalviaofficinalisL.)[J].Plant science，2002，162(6)：981-987.

[34] COHEN S D，TARARA J M，KENNEDY J A.Assessing the impact of temperature on grape phenolic metabolism[J].Analytica chimica acta，2008，621(1)：57-67.

[35] BOLL M，WEBER L W D，BECKER E，et al.Mechanism of carbon tetrachloride-induced hepatotoxicity.Hepatocellular damage by reactive carbon tetrachloride metabolites[J].Zeitschrift Fur Naturforschung C，2001，56(7/8)：649-659.

[36] WEBER L W，BOLL M，STAMPFL A.Hepatotoxicity and mechanism of action of haloalkanes：Carbon tetrachloride as a toxicological model[J].Crit Rev Toxicol，2003，33(2)：105-136.

[37] BERGER M L，BHATT H，COMBES B，et al.CCl4-induced toxicity in isolated hepatocytes：The importance of direct solvent injury[J].Hepatology，1986，6(1)：36-45.

[38] 孫麗萍，徐響，廖磊.油菜蜂花粉黃酮醇苷的體內(nèi)外抗氧化研究[J].食品科學(xué)，2010，31(19)：359-362.

[39] 楊佳林，孫麗萍，徐響.油菜蜂花粉黃酮醇的測(cè)定及其抗氧化活性研究[J].食品科學(xué)，2010，31(3)：79-82.

[40] CARPES S T.Study of prepations of bee pollen extracts，antioxidant and antibacterial activity[J].Lavras，2007，31(6)：1818-1825.

[41] 孫麗萍，杜夏，陳有根，等.油菜蜂花粉中抑菌活性成分的分離純化和結(jié)構(gòu)鑒定[J].食品科學(xué)，2011，32(19)：75-78.

[42] 郭雪微，盧梃，鮑艷江，等.油菜蜂花粉黃酮類化合物抗氧化等作用的臨床觀察[J].北京中醫(yī)藥，2011，30(7)：488-492.

收稿日期2015-10-23

作者簡(jiǎn)介薛茗閣(1989- )，女，天津人，碩士研究生，研究方向：營(yíng)養(yǎng)與食品衛(wèi)生學(xué)。*通訊作者，副教授，博士，從事動(dòng)物學(xué)、發(fā)育生物學(xué)、動(dòng)物生物學(xué)研究。

基金項(xiàng)目國(guó)家自然科學(xué)基金(31300463)；江蘇省自然科學(xué)基金(BK20130414)。

中圖分類號(hào)S 609.9

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼A

文章編號(hào)0517-6611(2015)33-165-03