苦豆子總堿涂膜劑安全性試驗(yàn)研究

冷曉紅，王志強(qiáng)

(1.寧夏職業(yè)技術(shù)學(xué)院，銀川 750021；2.揚(yáng)州大學(xué)獸醫(yī)學(xué)院,江蘇揚(yáng)州 225008)

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苦豆子總堿涂膜劑安全性試驗(yàn)研究

冷曉紅1，王志強(qiáng)2

(1.寧夏職業(yè)技術(shù)學(xué)院，銀川 750021；2.揚(yáng)州大學(xué)獸醫(yī)學(xué)院,江蘇揚(yáng)州 225008)

為研究苦豆子總堿涂膜劑在預(yù)防和治療奶牛乳房炎方面的安全性，選用皮膚完好的健康家兔，觀察家兔對(duì)苦豆子總堿涂膜劑皮膚刺激反應(yīng)癥狀，并根據(jù)皮膚刺激反應(yīng)的評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行評(píng)分;選用皮膚完好的健康豚鼠進(jìn)行試驗(yàn)，觀察豚鼠對(duì)苦豆子總堿皮膚變態(tài)反應(yīng)癥狀，根據(jù)皮膚刺激反應(yīng)的評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行評(píng)分。結(jié)果表明：苦豆子總堿涂膜劑皮膚刺激反應(yīng)積分均值最大值為1.33，屬于輕刺激性。根據(jù)皮膚變態(tài)反應(yīng)的評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)，計(jì)算所得受試物試驗(yàn)組去除激發(fā)受試物后24 h和48 h時(shí)的致敏率分別為25%和8.3%，屬于輕度致敏強(qiáng)度。試驗(yàn)結(jié)果提示，苦豆子總堿涂膜劑臨床用藥安全，此結(jié)論為苦豆子總堿用于奶牛乳房炎的預(yù)防與治療提供了依據(jù)。

苦豆子總堿涂膜劑；皮膚刺激性試驗(yàn)；皮膚變態(tài)反應(yīng)試驗(yàn)

奶牛乳房炎是奶牛業(yè)一種常見多發(fā)病[1]。我國(guó)臨床型乳房炎奶牛發(fā)病率為33.41%，隱性乳腺炎奶牛的陽(yáng)性檢出率為73.91%。資料顯示，在我國(guó)因臨床型奶牛乳房炎淘汰的奶牛占總淘汰牛的9%～11%，在經(jīng)濟(jì)上造成了一定的損失[2]。長(zhǎng)期以來(lái),對(duì)奶牛乳房炎的治療主要采用抗生素和化學(xué)合成藥物的乳房灌注療法,隨著奶牛乳房炎病原菌的耐藥性逐漸增加，中藥預(yù)防和治療已成為發(fā)展趨勢(shì)[3]。研究表明[4-5]，苦豆子總堿具有清熱解毒、抗菌消炎、提高免疫力的功效，對(duì)引起奶牛乳房炎的三種病原菌金黃色葡萄球菌、無(wú)乳鏈球菌及大腸桿菌均有較強(qiáng)的抑菌活性。本研究通過(guò)對(duì)以苦豆子總堿為原料制備的涂膜劑進(jìn)行家兔的皮膚刺激試驗(yàn)和豚鼠的皮膚變態(tài)反應(yīng)試驗(yàn)研究，以期為苦豆子總堿涂膜劑在預(yù)防和治療奶牛乳房炎方面的新藥開發(fā)提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)動(dòng)物 3只皮膚完好的健康家兔，體重1.8～2.0 kg，購(gòu)自揚(yáng)州大學(xué)醫(yī)學(xué)中心。動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào)：SCXK(蘇)2012-0004，使用許可證號(hào)：SYXK(蘇)2012-0029。自由采食和飲水，飼料和飲水均符合動(dòng)物飼養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)。試驗(yàn)前在實(shí)驗(yàn)動(dòng)物房環(huán)境中適應(yīng)性飼養(yǎng)1 周，不限制飲水；皮膚完好的健康豚鼠36只，體重0.30～0.35 kg，購(gòu)自南京市浦口區(qū)萊芙養(yǎng)殖場(chǎng)。動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào)：SCXK(蘇)2014-0004，使用許可證號(hào)：SYXK(蘇)2012-0029。自由采食和飲水，飼料和飲水均符合動(dòng)物飼養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)。試驗(yàn)前在實(shí)驗(yàn)動(dòng)物房環(huán)境中適應(yīng)性飼養(yǎng)1周，不限制飲水。

1.2 受試藥物 苦豆子總堿涂膜劑，(批號(hào)：20140502，寧夏職業(yè)技術(shù)學(xué)院制備)，該藥以苦豆子總堿為主藥，以聚乙烯醇等為成膜材料，并加入透皮吸收促進(jìn)劑，經(jīng)制劑技術(shù)制成。臨用前生理鹽水配制成所需濃度溶液。脫毛劑：凈白溫和脫毛膏，100 g/管，廣州艾奇化妝品有限公司。陽(yáng)性對(duì)照物：2，4-二硝基氯苯，Sigma公司生產(chǎn)。臨用前以95%的乙醇于45～50 ℃熱水中攪拌溶解，配制的誘導(dǎo)濃度為5 mg/mL和激發(fā)濃度為2.5 mg/mL的溶液。其他試劑：氯化鈉，分析純。

1.3 方法

1.3.1 家兔皮膚刺激性試驗(yàn) 參照文獻(xiàn)[6]，在試驗(yàn)前24 h，用脫毛劑將家兔背部脊柱兩側(cè)的毛去掉，去毛范圍，左、右各約3 cm×3 cm。次日將受試物原液0.5 mL直接滴于面積為2.5 cm×2.5 cm 的一側(cè)去毛完整皮膚上，然后用一層無(wú)刺激塑料膜覆蓋，再用無(wú)刺激膠布固定。另一側(cè)去毛皮膚作為空白對(duì)照。敷貼時(shí)間為 4 h。試驗(yàn)結(jié)束后，用溫水或無(wú)刺激性溶劑除去殘留受試物。分別于去除受試物后1、24、48 h觀察皮膚局部反應(yīng)。結(jié)果評(píng)價(jià)：在各個(gè)觀察時(shí)間點(diǎn)，按照表1對(duì)動(dòng)物的皮膚紅斑與水腫形成情況進(jìn)行評(píng)分，并分別按時(shí)間點(diǎn)將3只動(dòng)物的評(píng)分相加，除以動(dòng)物數(shù)，獲得不同時(shí)間點(diǎn)的皮膚刺激反應(yīng)積分均值(刺激指數(shù))。取其中最高皮膚刺激指數(shù)，按表2 評(píng)定該受試物對(duì)動(dòng)物皮膚刺激強(qiáng)度的級(jí)別。

表1 皮膚刺激反應(yīng)的評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)

表2 皮膚刺激強(qiáng)度分級(jí)表

1.3.2 豚鼠皮膚變態(tài)反應(yīng)試驗(yàn) 參照文獻(xiàn)[7]，將豚鼠隨機(jī)分為陽(yáng)性對(duì)照組、試驗(yàn)組、陰性對(duì)照組，每組12只，雌雄各半。

對(duì)試驗(yàn)組豚鼠，給予受試物誘導(dǎo)和激發(fā)處理。陽(yáng)性對(duì)照組給予陽(yáng)性致敏物2，4-二硝基氯苯誘導(dǎo)和激發(fā)處理。陰性對(duì)照組僅給以受試物激發(fā)處理。

誘導(dǎo)：于試驗(yàn)前24 h將豚鼠背部左側(cè)3 cm×3 cm范圍內(nèi)去毛。將誘導(dǎo)濃度的消毒劑(受試物原液)0.5 mL，直接涂在 2 cm×2 cm左側(cè)去毛皮膚上。用一層無(wú)刺激塑料膜覆蓋，再以無(wú)刺激膠布固定，持續(xù) 6 h。第 7、 14天以同樣方法重復(fù)一次。

激發(fā)：在末次誘導(dǎo)后14 d，將激發(fā)濃度的消毒劑溶液(受試物原液)0.5 mL直接涂在2 cm×2 cm右側(cè)脫毛皮膚上，然后用一層塑料膜和無(wú)刺激膠布固定，6 h后將敷貼的受試物洗去。24 h和48 h后觀察皮膚反應(yīng)，按表3對(duì)皮膚反應(yīng)評(píng)分。

選用的陽(yáng)性對(duì)照物為2，4-二硝基氯代苯。陽(yáng)性對(duì)照組的操作程序同試驗(yàn)組，以陽(yáng)性致敏物替代受試物。

每次試驗(yàn)設(shè)置陰性對(duì)照組，僅對(duì)動(dòng)物給予受試物的激發(fā)接觸。

結(jié)果評(píng)價(jià)：藥物引起的過(guò)敏性接觸性皮炎，屬遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)。對(duì)于動(dòng)物，僅見皮膚紅斑和水腫。根據(jù)表3標(biāo)準(zhǔn)，將出現(xiàn)皮膚反應(yīng)(評(píng)分≥1)的動(dòng)物數(shù)除以該組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物數(shù)，求得致敏率(%)，按表4評(píng)定致敏強(qiáng)度。

表3 皮膚反應(yīng)的評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)表

表4 致敏強(qiáng)度分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)表

注：致敏率為0時(shí)，可判為未見皮膚變態(tài)反應(yīng)

2 結(jié)果與分析

2.1 家兔皮膚刺激性試驗(yàn) 受試藥物對(duì)家兔皮膚刺激反應(yīng)的評(píng)分結(jié)果見表5。從表中可以看出，該受試藥物皮膚刺激反應(yīng)積分均值最大值為1.33，由表2可知苦豆子總堿涂膜劑屬于輕刺激性產(chǎn)品。

表5 家兔皮膚刺激反應(yīng)評(píng)分結(jié)果表

2.2 對(duì)豚鼠皮膚變態(tài)反應(yīng)試驗(yàn)結(jié)果 受試藥物對(duì)豚鼠皮膚變態(tài)反應(yīng)試驗(yàn)的評(píng)分結(jié)果見表6。從表中可以看出，試驗(yàn)組在激發(fā)處理24 h和48 h后的致敏率分別為25%和8.3%，對(duì)照表5可知該受試物致敏等級(jí)為輕度。

3 討論與小結(jié)

3.1 奶牛乳房炎是危害奶牛的一種多發(fā)病，常規(guī)的治療主要采用抗生素[8]，當(dāng)前應(yīng)用的奶牛乳頭消毒劑主要為碘類消毒劑[9]，碘伏技術(shù)如果處置不當(dāng)，碘就會(huì)殘留在奶牛的乳腺中，導(dǎo)致奶制品碘超標(biāo)?？喽棺涌倝A是從天然藥用植物苦豆子中提取的生物堿，具有清熱解毒，祛風(fēng)燥濕，消炎止痛的功能，對(duì)引起奶牛乳房炎的多種病原菌有較好的抑制作用，對(duì)奶牛乳房炎癥有抗炎作用，同時(shí)還具有增強(qiáng)機(jī)體免疫的功能。3.2 涂膜劑是近年來(lái)發(fā)展起來(lái)的一種新型劑型，具有以下優(yōu)勢(shì)：在涂布或者沾取時(shí)可以起到消毒抑菌的作用；涂布后約5 min左右即可在奶牛乳頭形成一層保護(hù)膜，起到阻隔致病菌在乳頭導(dǎo)管孔擴(kuò)張時(shí)進(jìn)入的作用，同時(shí)延長(zhǎng)消毒作用時(shí)間；形成的保護(hù)膜在氣溫較低時(shí)可以防止奶牛乳頭的凍傷；形成的藥膜中的藥物透過(guò)奶牛乳頭皮膚可以進(jìn)入奶牛乳房組織起到一定的治療作用；使用方便，獸醫(yī)在奶牛擠奶后用棉簽涂布或使用藥浴杯浸濕奶牛乳頭即可；制備工藝簡(jiǎn)單，成本較低。以苦豆子總堿為原料開發(fā)苦豆子總堿涂膜劑用于奶牛乳房炎的預(yù)防和治療，既保留了碘消毒液瞬間殺菌的特點(diǎn)，又克服了碘容易揮發(fā)的缺陷，同時(shí)還可避免牛奶中抗生素殘留。

表6 受試藥物對(duì)豚鼠皮膚變態(tài)反應(yīng)試驗(yàn)評(píng)分結(jié)果表

3.3 依據(jù)中獸藥注冊(cè)管理辦法，需進(jìn)行包括皮膚刺激性及皮膚變態(tài)反應(yīng)等安全性試驗(yàn)研究，以確定該藥的使用安全。試驗(yàn)結(jié)果表明，苦豆子總堿涂膜劑對(duì)家兔皮膚刺激反應(yīng)積分均值最大值為1.33，屬于輕刺激性產(chǎn)品。對(duì)豚鼠皮膚變態(tài)反應(yīng)試驗(yàn)在激發(fā)處理24 h和48 h后的致敏率分別為25%和8.3%，致敏等級(jí)為輕度。同時(shí)苦豆子總堿急性毒性試驗(yàn)研究表明[10]，苦豆子總堿的毒性較低，提示苦豆子總堿涂膜劑臨床用藥安全可靠。本實(shí)驗(yàn)的研究結(jié)果為苦豆子總堿涂膜劑新制劑開發(fā)提供了依據(jù)。

[1] 鄧海平,蒲萬(wàn)霞,俞詩(shī)源,等.奶牛乳房炎主要病原菌及其分離鑒定方法研究進(jìn)展[J].中國(guó)畜牧獸醫(yī),2007,34(3):32-34.

[2] 劉萍,郝滿良,葉寶娜,等.奶牛乳腺炎的病因及其綜合防治措施[J].中國(guó)畜牧獸醫(yī),2007,34(3):32-34.

[3] 冷曉紅,王志強(qiáng),李軍.苦豆子生物堿對(duì)奶牛乳房炎致病菌體外抗菌活性的研究[J].中國(guó)獸藥雜志,2013,47(9): 31-33.

[4] 李成應(yīng),李培鋒,李曉楠.奶牛乳房炎的病因及其防治[J].畜牧與飼料科學(xué),2005,(3):52-55.

[5] 李新芳,盂富敏,劉文江,等.苦豆子總堿注射液的藥理研究[J].蘭州醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào),1985,(2):1-5.

[6] 國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局,中藥、天然藥物局部刺激性和溶血性研究技術(shù)指導(dǎo)原則[S].

[7] 國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局,藥物刺激性過(guò)敏性和溶血性研究技術(shù)指導(dǎo)原則[S].

[8] 蔣春茂,周新民,周廣生,等.奶牛乳房炎研究進(jìn)展[J].中國(guó)畜牧獸醫(yī),2004.31(5):36-38.

[9] 楊曉芳,王偉忠,康涌濤,等.奶牛乳房炎的發(fā)病調(diào)查、檢測(cè)及防治對(duì)策[J].中國(guó)畜牧獸醫(yī),2008,35(6)：70-71.

[10]陳申,劉宇,強(qiáng)哲,等.苦豆子總堿對(duì)小鼠急性毒性試驗(yàn)研究[J].中獸醫(yī)醫(yī)藥雜志,2013,(2):12-13.

(編 輯：侯向輝)

Study on Safety of Total Alkaloid of Sophora Alopecuroides Temperature

LENG Xiao-hong1, WANG Zhi-qiang2

(1.NingxiaVocationalandTechnicalCollege,Yinchuan750021,China;2.YangzhouUniversityCollegeofVeterinaryMedicine，Jiangsu，Yangzhou225009，China)

For study the security of total alkaloid of sophora alopecuroides temperature in prevention and treatment of dairy cow mastitis,the experiment choose health rabbit of skin in good condition,and observe irritation reaction symptoms of total alkaloid of sophora alopecuroides temperature on rabbit skin according to the criteria for skin irritation reaction score; choose health guinea pig of skin in good condition, Observing of total alkaloid of sophora alopecuroides temperature on guinea pig skin allergy symptoms according to the criteria for skin irritation reaction score. The results showed that maximum average score of skin irritation reaction was 1.33, belonging to light stimulus; sensitization rate of 24 h and 48 h was 25% and 8.3%, belonging to the light intensity of sensitization. The test results indicated that clinical medicine of the temperature was secure,and provided a basis for the prevention and treatment on cow mastitis.

total alkaloid of sophora alopecuroides temperature;skin irritation test; skin allergy test

寧夏科技支撐計(jì)劃項(xiàng)目(寧科技字〔2013〕20號(hào))

冷曉紅，從事藥用植物的教學(xué)與科研工作。E-mail:lxh-zss@163.com

2015-06-22

A

1002-1280 (2015) 08-0020-04

S859.79