妥曲珠利對(duì)人工感染雞柔嫩艾美爾球蟲病的臨床治療試驗(yàn)

范建華，韋玉勇，俞燕，何友義，徐步*，卜仕金

(1.中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院家禽所，江蘇揚(yáng)州，225125；2.揚(yáng)州大學(xué)，江蘇揚(yáng)州，225009；3.江蘇威泰龍生物科技有限公司)

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妥曲珠利對(duì)人工感染雞柔嫩艾美爾球蟲病的臨床治療試驗(yàn)

范建華1，韋玉勇1，俞燕1，何友義3，徐步1*，卜仕金2

(1.中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院家禽所，江蘇揚(yáng)州，225125；2.揚(yáng)州大學(xué)，江蘇揚(yáng)州，225009；3.江蘇威泰龍生物科技有限公司)

為比較、測(cè)定國內(nèi)廠家生產(chǎn)的妥曲珠利可溶性對(duì)雞球蟲病的治療效果，試驗(yàn)設(shè)計(jì)三個(gè)劑量組，并以德國拜耳公司生產(chǎn)的百球清作為藥物對(duì)照，進(jìn)行飲水治療人工感染艾美爾球蟲病，一日2次，連用3 d。結(jié)果表明，受試藥物的高(0.75 g/L)、中(0.5 g/L)劑量組，能顯著降低球蟲病感染引起的死亡率、血便、盲腸病變，并提高相對(duì)增重率(P<0.05)。推薦國內(nèi)廠家生產(chǎn)的妥曲珠利可溶性粉最佳臨床治療用法為：劑量0.5 g/L，連續(xù)飲水給藥3 d。

妥曲珠利可溶性粉；雞柔嫩艾美爾球蟲?。慌R床療效

雞球蟲病是當(dāng)前養(yǎng)雞業(yè)最常見的，也是危害較嚴(yán)重的疾病之一，特別是在平養(yǎng)式肉雞中造成的危害更為顯著，全世界每年因雞球蟲病造成的經(jīng)濟(jì)損失可高達(dá)數(shù)億計(jì)美元[1]。目前用于雞球蟲病治療的藥物較多，其中三嗪類抗球蟲藥妥曲珠利，是目前用藥濃度最低的一種抗球蟲藥，廣譜、高效、低毒，可作用于球蟲細(xì)胞的各個(gè)發(fā)育階段，具有干擾球蟲細(xì)胞核的分裂及線粒體的作用，廣泛用于預(yù)防和治療雞球蟲病[2]。妥曲珠利最早是德國拜耳公司于20世紀(jì)80年代開發(fā)的動(dòng)物專用的抗球蟲藥物，商品名為百球清。我國1999年批準(zhǔn)可引進(jìn)原料藥用于生產(chǎn)，21世紀(jì)初才有合成研究。目前國內(nèi)獸用妥曲珠利主要有預(yù)混劑和飲水粉劑，然而許多廠家生產(chǎn)的妥曲珠利制劑要么是水溶性不好，要么是含量或穩(wěn)定性不夠[3]。國內(nèi)將妥曲珠利成功制得10%鉀鹽可溶性粉劑，為進(jìn)一步驗(yàn)證該制劑的雞球蟲病的防治效果，特進(jìn)行如下臨床治療試驗(yàn)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 藥品 受試藥：10%妥曲珠利可溶性粉，由國內(nèi)某獸藥廠提供。對(duì)照藥：德國拜耳公司的百球清，5%妥曲珠利水溶液，推薦用法與用量為：混飲，每1 L飲水加本品1 mL，連用3 d。

1.1.2 試驗(yàn)蟲株 柔嫩艾美耳球蟲強(qiáng)毒株，由南京農(nóng)業(yè)大學(xué)寄生蟲病教研組惠贈(zèng)。

1.1.3 主要試劑及培養(yǎng)基 重鉻酸鉀，胰蛋白酶，無水乙醇等均購自上海生工生物制劑有限公司。

1.1.4 試驗(yàn)動(dòng)物 200只1日齡蘇禽黃羽肉雞，購自揚(yáng)州翔龍禽業(yè)發(fā)展有限公司。在無球蟲環(huán)境中飼養(yǎng)，飲水為清潔涼開水，試驗(yàn)前7d隨機(jī)取糞便經(jīng)顯微鏡觀察，確認(rèn)無球蟲感染后作為試驗(yàn)用雞。

1.2 方法

1.2.1 蟲株復(fù)壯 試驗(yàn)前取柔嫩艾美耳球蟲卵囊懸浮液，3000 r/min離心10 min，棄去上清，再用純化水3000 r/min，10 min清洗3次，棄去上清，沉淀物即為純化卵囊。攻毒前卵囊計(jì)數(shù)5×104/mL，并于9日齡選6只雞，每只雞口服0.5 mL。5 d后收集感染糞便，在自來水下反復(fù)沖洗，分別過60目、100目和260目濾篩，隨后自然沉淀4～5 h，取上清用10倍體積的飽和生理鹽水漂浮蟲卵，再3000 r/min離心10 min，沉淀物按1:1加2.5%的重鉻酸鉀，在28 ℃的電熱恒溫箱孵育3 d。3 d后拿出室溫保存，通過鏡檢觀察為孢子化蟲卵，方可用于攻毒蟲株。

1.2.2 試驗(yàn)分組及處理 蘇禽黃羽肉雛雞飼喂至14日齡后，從中挑選180只體重均勻、健康雞作為試驗(yàn)對(duì)象，隨機(jī)分成6組，每組30只，單羽稱量初始重。試驗(yàn)時(shí)，取以上孵育好的孢子化卵囊，于感染對(duì)照組和受試藥物組每只雞經(jīng)一次性注射器灌服0.5 mL。攻毒后2 d，各試驗(yàn)組均出現(xiàn)不同程度的血便，部分雞羽毛蓬松，采食量顯著減少。攻毒后第3天開始給藥，具體分組、攻毒給藥情況見表1。

表1 試驗(yàn)雞分組及處理表

1.2.3 療效評(píng)價(jià)

1.2.3.1 臨床觀察 用藥期間每天觀察各組雞的臨床癥狀，記錄發(fā)病及死亡前況。對(duì)病死雞進(jìn)行剖檢并進(jìn)一步作病原學(xué)鑒定、分析，判定是否死于球蟲病。停藥后繼續(xù)觀察7 d。

1.2.3.2 存活率及增重 實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)分別統(tǒng)計(jì)各組間雞只存活數(shù)及試驗(yàn)始末增重情況。存活率=(組內(nèi)存活雞數(shù)/ 組內(nèi)原總雞數(shù))×100%,相對(duì)增重率=(試驗(yàn)組相對(duì)增重 / 健康對(duì)照組相對(duì)增重)×100%。

1.2.3.3 血便計(jì)分 試驗(yàn)期間逐日觀察各組間雞糞便變化情況，及時(shí)記錄血便出現(xiàn)時(shí)間和肉眼觀察最嚴(yán)重時(shí)的血便百分率。0分，100%不帶血；1分，不足25%的糞便帶血；2分，25%～50%的糞便帶血；3分，51%～75%的糞便帶血；4分，76%～100%的糞便帶血。

1.2.3.4 OPG 試驗(yàn)期末隨機(jī)采各組間雞糞便1 g，溶于10倍超純水中混勻稀釋后，用血球計(jì)數(shù)板在顯微鏡下進(jìn)行球蟲卵囊計(jì)數(shù)，即為OPG。當(dāng)OPG為0～0.1時(shí)，卵囊值為0；當(dāng)OPG為0.11～1.0時(shí)，卵囊值為1；當(dāng)OPG為1.1～1.9時(shí)，卵囊值為10；當(dāng)OPG為2.0～5.9時(shí)，卵囊值為20；當(dāng)OPG為6.0～10.9時(shí)，卵囊值為30；當(dāng)OPG大于11時(shí)，卵囊值為40。

1.2.3.5 盲腸病變計(jì)分 盲腸病變計(jì)分按照J(rèn)ohnson和Reid[4]等5分制計(jì)分方法計(jì)分。0分為未見病變；1分為盲腸內(nèi)容物正常，但內(nèi)有少量散在血斑，腸壁未見增厚；2分為盲腸內(nèi)容物有少量血液粘液，腸壁增厚，有多處血斑；3分為盲腸內(nèi)容物有多處血液粘液，盲腸萎縮，內(nèi)容物少；4分為盲腸內(nèi)極度充滿血液或嚴(yán)重潰瘍，直至直腸部。病變值=每組雞平均病變計(jì)分×10。

1.2.3.6 抗球蟲卵囊指數(shù) (ACI)根據(jù)Merck公司方法計(jì)算。ACI=(相對(duì)增重率+存活率)×100-(病變值+卵囊值)。ACI<120為試驗(yàn)藥物無效；ACI=160～180間，為藥效良好；ACI>180為藥物高效。

1.2.4 試驗(yàn)數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析 所有試驗(yàn)數(shù)據(jù)用Excel整理，用SPASS17.0統(tǒng)計(jì)軟件中的 One—way ANOVA方法對(duì)各組數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 試驗(yàn)雞臨床癥狀觀察人 工接種毒后第3天，除健康對(duì)照組外，各組別均有少數(shù)雞出現(xiàn)精神不振，食欲減退，羽毛蓬松，拉白色稀糞或魚腸樣血紅色糞便。隨機(jī)取陽性對(duì)照組1只雞進(jìn)行剖檢，可見盲腸腫大，如拇指大小，內(nèi)有液狀或部分凝固的血液，黏膜面有大量出血點(diǎn)及出血斑，從漿膜面看非常明顯，外觀為暗紅色瘀點(diǎn)，其它組織器官無肉眼可見病變。進(jìn)一步對(duì)盲腸粘液進(jìn)行病原分離、鑒定，微觀鏡下可見有球蟲蟲卵，說明此次人工感染球蟲試驗(yàn)?zāi)Ｐ统晒Α４撕?0 d內(nèi)(用藥3 d，繼續(xù)觀察期7 d)又對(duì)各試驗(yàn)組臨床癥狀進(jìn)行了統(tǒng)計(jì)，結(jié)果顯示治療組較感染對(duì)照組和健康對(duì)照組有明顯改善，具體見表2。

表2 各試驗(yàn)組試驗(yàn)觀察期內(nèi)臨床癥狀結(jié)果表

注：“+”數(shù)量越多，表示良好程度高，“—”表示臨床癥狀較差；血便計(jì)分是10天內(nèi)觀測(cè)的結(jié)果平均取值

2.2 各試驗(yàn)組雞存活情況及增重 試驗(yàn)雞共養(yǎng)了28 d，試驗(yàn)期末對(duì)各籠組單羽進(jìn)行稱重，并對(duì)照初始重進(jìn)行了相對(duì)增重率及料肉比統(tǒng)計(jì)，結(jié)果顯示除感染對(duì)照組有顯著差異外(P<0.05)，其它各組間均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。同時(shí)根據(jù)表3數(shù)據(jù)又進(jìn)一步對(duì)存活率進(jìn)行了統(tǒng)計(jì)，統(tǒng)計(jì)結(jié)果也進(jìn)一步表明了藥物治療組確實(shí)對(duì)球蟲引起的肉雞死亡有較好的控制。具體各組別雞只存活情況及增重情況見表3。

表3 各試驗(yàn)組試驗(yàn)雞存活率及相對(duì)增重率結(jié)果表

注：欄內(nèi)同列不同上標(biāo)字母表示差異顯著(P<0.05)，反之差異不顯著(P>0.05)，下表同

2.3 各試驗(yàn)組總體藥效評(píng)價(jià) 試驗(yàn)期內(nèi)，拜耳百球清和10%妥曲珠利高、中劑量組ACI值分別為187.02、182.07、182.60，均超過了180，說明受試藥物高、中劑量組和藥物對(duì)照組對(duì)球蟲病引起的血便、盲腸病變、球蟲蟲卵等均有較好的防治效果，屬高效藥物。具體結(jié)果詳見表4。

表4 各試驗(yàn)組藥效總體評(píng)價(jià)結(jié)果表

3 小結(jié)

本次試驗(yàn)選用蘇禽黃羽中速生長型肉雞作為試驗(yàn)?zāi)Ｐ停?4日齡灌服艾美爾球蟲強(qiáng)毒孢子化卵囊。結(jié)果顯示，感染后第3天雞開始出現(xiàn)精神癥狀及血便，對(duì)感染對(duì)照組雞盲腸取樣檢測(cè)，經(jīng)實(shí)驗(yàn)室病原分離、鑒定，確定實(shí)屬球蟲感染所致，證明此次人工造病成功，為進(jìn)一步開展藥物臨床治療試驗(yàn)奠定了良好基礎(chǔ)，也為其它單位開展雞球蟲人工攻毒試驗(yàn)的方法設(shè)計(jì)提供了較好的參考和依據(jù)。

球蟲病多發(fā)于高熱、潮濕季節(jié)，臨床許多藥物治療效果不明顯的主要原因是，球蟲的卵囊難以徹底治根和治療藥物的耐藥性問題。盡管目前最有效當(dāng)屬妥曲珠利等三嗪類抗球蟲藥，但在感染最嚴(yán)重時(shí)期，絕非單一藥物所能控制，所以本次試驗(yàn)治療期選擇在感染初始的第3天，以治療兼顧預(yù)防作為本次試驗(yàn)的最佳方案。

從本次試驗(yàn)結(jié)果來看，藥物治療組均顯示有效，且受試藥物的高、中劑量組和藥物對(duì)照組對(duì)治療雞球蟲病療效顯著(P<0.05)。按照當(dāng)量換算，這與EMEA曾報(bào)道妥曲珠利按75mg/L，連用2d，對(duì)治療肉雞艾美爾球蟲療效相當(dāng)。國內(nèi)馮秀娟[5]、王海珍[6]等也有類似藥用效果報(bào)道。本次試驗(yàn)同時(shí)顯示，各治療組盡管對(duì)球蟲感染期肉雞的增重及料肉比有一定的改善作用，但試驗(yàn)結(jié)果未顯示差異顯著(P>0.05)，這與國內(nèi)孫燕[7]、高榮琨[8]的試驗(yàn)結(jié)果略有差異。

結(jié)合以上試驗(yàn)結(jié)果及臨床治療實(shí)際成本，建議該10%妥曲珠利可溶性粉按0.5g/L的劑量飲水給藥，連用3d，能有效治療雞柔嫩艾美爾球蟲病感染。

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(編 輯：侯向輝)

Clinic Treatment Test of Toltrazuril Soluble Powder on Chicken Eimeria Tenellaby Artificial Inducement

FAN Jian-hua1, WEI Yu-yong1,YU yan1, HE You-yi3, XU Bu1*,BU Shi-jin2

(1.Poultrylnstitute，ChineseAcademyofAgriculturalSciences,Yangzhou,Jiangsu225125，China;2.YangzhouUniversity,Yangzhou,Jiangsu225009，China; 3.JiangsuWeitailongBiologicalTechnologyCo.,Ltd,Taizhou,Jiangsu225000，China)

To study the effects of toltrazuril soluble powder produced by a domestic manufacturer on curing chicken eimeriatenella infected artificially, the experiment was designed 3 drug dosage groups, and toltrazuril from Bayer company as a drug control. All tested drugs administered by drinking water twice a day, for 3 days. The results showed the high dosage group(0.75 g/L), the middle(0.5 g/L)and the drug control group had distinguished effects on reducing death, bloody stool, lesions of the appendix, and increasing weight gain rate (WGR) (P<0.05). Accordingly, the dosage of 0.5 g/L Toltrazuril soluble powder from the manufacturers was recommended as the best usage by continuous drinking water administration for 3 days.

toltrazuril soluble powder；eimeriatenella；clinical effect

范建華，從事獸醫(yī)藥理和青理學(xué)研究及新獸藥研發(fā)。

徐步。E-mail: bu-xu@yahoo.com

2015-06-08

A

1002-1280 (2015) 08-0024-04

S859.796