海水浸泡對(duì)兔脊髓損傷后TNF-α及VEGF表達(dá)的影響

胡　灃　朱　捷　張　迪　方　健

基金基金： 南京軍區(qū)醫(yī)學(xué)科學(xué)技術(shù)研究十一五重點(diǎn)課題(項(xiàng)目編號(hào)：09Z008)

作者單位： 230031　合肥　安徽醫(yī)科大學(xué)解放軍臨床學(xué)院(中國(guó)人民解放軍第105醫(yī)院)骨科(胡灃，朱捷，方健)

230061　合肥　安徽省醫(yī)學(xué)情報(bào)研究所(張迪)

?

·基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)·

海水浸泡對(duì)兔脊髓損傷后TNF-α及VEGF表達(dá)的影響

胡灃朱捷張迪方健

基金基金： 南京軍區(qū)醫(yī)學(xué)科學(xué)技術(shù)研究十一五重點(diǎn)課題(項(xiàng)目編號(hào)：09Z008)

作者單位： 230031合肥安徽醫(yī)科大學(xué)解放軍臨床學(xué)院(中國(guó)人民解放軍第105醫(yī)院)骨科(胡灃，朱捷，方健)

230061合肥安徽省醫(yī)學(xué)情報(bào)研究所(張迪)

[摘要]目的建立兔開放性脊髓損傷模型，觀察海水浸泡對(duì)兔開放性脊髓損傷后TNF-α、VEGF表達(dá)的影響。方法采用改良Allens打擊器造兔脊髓損傷模型。選用日本大耳兔，體質(zhì)量2.5～3 kg，雌雄不拘。根據(jù)隨機(jī)數(shù)字表，將60只大耳白兔隨機(jī)分為兩組，實(shí)驗(yàn)組: 海水浸泡組(切除椎板并造脊髓損傷模型，海水浸泡60 min，n=30)，對(duì)照組: 單純損傷組(切除椎板并造脊髓損傷模型，不浸泡，n=30)。分別于致傷后1、6、12、24、48小時(shí)5個(gè)時(shí)間點(diǎn)取傷段脊髓，光鏡下觀察傷段脊髓組織病理形態(tài)，免疫組織化學(xué)染色和計(jì)算機(jī)圖形分析技術(shù)半定量化檢測(cè)TNF-α、VEGF表達(dá)。結(jié)果兩組脊髓組織均發(fā)生了創(chuàng)傷性水腫，但水腫高峰期的時(shí)間點(diǎn)不同, 單純損傷組致傷后6小時(shí)達(dá)水腫高峰，而海水浸泡組于致傷后12小時(shí)達(dá)水腫高峰。免疫組化檢測(cè)結(jié)果顯示TNF-α、VEGF在兩組中均有陽(yáng)性表達(dá)，但兩組在各時(shí)間點(diǎn)表達(dá)強(qiáng)度有差異(P<0.05)，且海水浸泡組TNF-α、VEGF表達(dá)的高峰與對(duì)照組不同。結(jié)論海水浸泡早期延遲了創(chuàng)傷性脊髓損傷的病理改變，但最終發(fā)生的脊髓損害較對(duì)照組加重。TNF-α、VEGF的高表達(dá)與損傷有著密切關(guān)系，可作為海水浸泡脊髓損傷預(yù)后判斷、傷情評(píng)估的指標(biāo)。

[關(guān)鍵詞]海水浸泡；脊髓損傷；腫瘤壞死因子α；血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子

脊髓損傷(spinal cord injury，SCI)是外科常見的嚴(yán)重?fù)p傷，通常分為原發(fā)性損傷和繼發(fā)性損傷。脊髓的原發(fā)性損傷是創(chuàng)傷本身造成的，包括不可逆性神經(jīng)細(xì)胞壞死、軸索斷裂等。繼發(fā)性損傷包括水腫、出血、炎癥反應(yīng)、局部缺血等，特別是其中的水腫與能量代謝系統(tǒng)障礙更可引起一系列放大效應(yīng)，使原有的脊髓損傷惡化。TNF-α是在中樞神經(jīng)系統(tǒng)損傷中最早出現(xiàn)增高的細(xì)胞因子，可上調(diào)其他細(xì)胞因子的表達(dá)，可能是眾多細(xì)胞因子的重要啟動(dòng)因子[1]。VEGF作為脊髓損傷后的一種保護(hù)因子，能促進(jìn)新生毛細(xì)血管的形成而有效改善損傷局部的微循環(huán)。開放性脊髓損傷在海戰(zhàn)或海事作業(yè)等情況下并不少見，均不同程度受到海水浸泡。海水具有低溫、高滲、低堿性的特點(diǎn)，其作為一種特殊的環(huán)境因素對(duì)脊髓損傷的病理生理改變有重要影響。本研究通過建立海水浸泡脊髓損傷模型探討海水浸泡對(duì)開放性脊髓損傷的病理改變以及對(duì)TNF-α、VEGF表達(dá)的影響，為海水浸泡脊髓損傷的病理變化規(guī)律及傷情加重的機(jī)制提供一定的科學(xué)依據(jù)。

1材料與方法

1.1人工海水配置根據(jù)國(guó)家海洋局第三研究所提供的人工海水配方配置，其主要指標(biāo)：滲透濃度(1 250±12) mmol/L，pH 8.2，Na+濃度(630.0±5.0)mmol/L，K+濃度(10.88±0.68)mmol/L，Cl-濃度為(658.8±5.25)mmol/L，溫度(21±2)℃。具體配方如下(g/L)：氯化鈉26.518、氯化鎂2.447、硫酸鎂 3.305、氯化鈣1.141、氯化鉀0.725。

1.2動(dòng)物模型制作與取材健康日本大耳兔60只，雌雄不限，體質(zhì)量2.5～3.0 kg，根據(jù)隨機(jī)數(shù)字表隨機(jī)分為兩組，實(shí)驗(yàn)組: 海水浸泡組(切除椎板并造脊髓損傷模型，海水浸泡60 min，n=30)，對(duì)照組: 單純損傷組(切除椎板并造脊髓損傷模型，但不浸泡，n=30)。兩組觀察時(shí)間點(diǎn)為1、6、12、24、48小時(shí)，每時(shí)間點(diǎn)6只動(dòng)物。麻醉起效后以T10為中心做正中縱行切口，暴露T10段脊髓。在暴露的硬膜表面放置一5 mm×3 mm的弧形墊片，采用改良Allen`s打擊器，致傷能量20 g×5 cm制作脊髓損傷模型。致傷后可見兔雙后肢抽搐、尾巴搖擺，即造模成功。實(shí)驗(yàn)組打擊成功后將兔固定在平板上直立浸泡于人工海水中，水面與胸骨柄上緣平齊，浸泡60 min。實(shí)驗(yàn)完成后動(dòng)物分籠飼養(yǎng)，每天注射抗菌藥物，按摩膀胱2次，協(xié)助其排尿。

1.3取材全部實(shí)驗(yàn)動(dòng)物按照分組分別在傷后1、6、12、24、48小時(shí)時(shí)間點(diǎn)進(jìn)行取材，對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物行戊巴比妥鈉按1 mL/kg 劑量經(jīng)耳緣靜脈麻醉，麻醉成功后，在劍突下剪開膈肌，暴露心臟，經(jīng)左心室插管至主動(dòng)脈并固定，在右心耳處剪一小口放血，經(jīng)導(dǎo)管快速灌注磷酸鹽緩沖液，待流出清亮液體時(shí)，更換4%多聚甲醛-磷酸鹽緩沖固定液持續(xù)灌注，至兔四肢僵硬。以打擊致傷點(diǎn)為中心，取長(zhǎng)約3 cm的脊髓標(biāo)本，置于4%多聚甲醛-磷酸鹽緩沖固定液中固定24～48 h，脫水，石蠟包埋，連續(xù)切片，厚5 μm，每份標(biāo)本取5張切片，分別做HE染色、免疫組化染色。

1.4HE染色采用常規(guī)HE染色，協(xié)助免疫組織化學(xué)染色觀察脊髓組織損傷后組織形態(tài)學(xué)的改變。

1.5免疫組化染色常規(guī)脫蠟后，3%H2O2處理10 min,蒸餾水洗3次，每次2 min。將切片放入盛有枸櫞酸鹽緩沖液的容器中，微波爐內(nèi)加熱使容器內(nèi)液體溫度保持在92℃～98℃ 10～15 min進(jìn)行抗原修復(fù)，取出室溫冷卻。PBS沖洗，按免疫組化試劑盒說(shuō)明書SP法進(jìn)行染色。以PBS和加入生物素化山羊抗兔IgG代替一抗對(duì)照，37℃ 20 min,PBS沖洗，DAB染色，蘇木精復(fù)染，脫水封片。

1.6顯微圖像分析計(jì)算機(jī)病理圖像分析系統(tǒng)進(jìn)行免疫組化染色半定量化分析免疫染色陽(yáng)性神經(jīng)細(xì)胞的光密度值(optical density，OD)，代表TNF- α、VEGF所發(fā)生的免疫反應(yīng)強(qiáng)度。400倍視野下，每張切片選取3個(gè)典型陽(yáng)性染色區(qū)域并測(cè)定其光密度值，取其平均值，進(jìn)行半定量化分析。

2結(jié)果

2.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物行為觀察實(shí)驗(yàn)組及對(duì)照組各時(shí)間點(diǎn)動(dòng)物后肢感覺、運(yùn)動(dòng)及反射功能均受損，雙后肢肌張力下降，大小便失禁。

2.2組織病理學(xué)改變

2.2.1脊髓大體形態(tài)觀察兩組脊髓打擊處及相鄰部位均不同程度的充血及水腫改變，但水腫高峰出現(xiàn)不一致。致傷1小時(shí)兩組脊髓組織大體形態(tài)相似，均出現(xiàn)明顯腫脹、充血，脊髓表面色澤暗淡，淺靜脈充血擴(kuò)張，損傷局部充血程度差異不明顯。6小時(shí)對(duì)照組脊髓受打擊的部位充血范圍明星大于實(shí)驗(yàn)組，12小時(shí)對(duì)照組脊髓充血范圍未見明顯擴(kuò)大，而實(shí)驗(yàn)組脊髓組織充血范圍顯著增大，并較對(duì)照組嚴(yán)重。對(duì)照組傷后6小時(shí)脊髓水腫達(dá)高峰，實(shí)驗(yàn)組于致傷后12小時(shí)達(dá)水腫高峰。24、48小時(shí)兩組脊髓組織損傷未出現(xiàn)加重趨勢(shì)。

2.2.2HE染色致傷1小時(shí)實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組損傷區(qū)域均出現(xiàn)散在出血灶，神經(jīng)細(xì)胞形態(tài)結(jié)構(gòu)基本正常，胞漿及細(xì)胞核仍清晰可見，神經(jīng)細(xì)胞輕度水腫。6小時(shí)脊髓神經(jīng)細(xì)胞出現(xiàn)明顯腫脹，部分脊髓前腳多角細(xì)胞胞體明顯腫脹，對(duì)照組脊髓水腫程度明顯重于實(shí)驗(yàn)組。傷后12小時(shí)脊髓灰質(zhì)中神經(jīng)細(xì)胞明顯減少，多數(shù)神經(jīng)元細(xì)胞出現(xiàn)胞漿空泡和核固縮現(xiàn)象，白質(zhì)出現(xiàn)軸突水腫、空泡變性，并有較多的炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，實(shí)驗(yàn)組脊髓組織的損傷程度顯著重于對(duì)照組，并且在傷后24小時(shí)繼續(xù)加重，48小時(shí)灰質(zhì)和白質(zhì)中出現(xiàn)多量空泡，零星可見神經(jīng)細(xì)胞。詳見圖1。

圖1海水浸泡組HE染色結(jié)果

①海水浸泡結(jié)束后1小時(shí)神經(jīng)元細(xì)胞基本正常；②海水浸泡結(jié)束后6小時(shí)神經(jīng)細(xì)胞輕度腫脹；③海水浸泡結(jié)束后12小時(shí)神經(jīng)細(xì)胞出現(xiàn)包漿空泡及核固縮現(xiàn)象；④海水浸泡結(jié)束后24小時(shí)包漿空泡及核固縮現(xiàn)象增加；⑤海水浸泡結(jié)束后48小時(shí)脊髓灰質(zhì)中出現(xiàn)多量空泡，零星可見神經(jīng)細(xì)胞

2.3免疫組化染色TNF-α主要位于神經(jīng)元胞漿及突起中，細(xì)胞核不著色。兩組致傷后1小時(shí)即可見TNF-α陽(yáng)性表達(dá)，此后表達(dá)逐漸增強(qiáng)，對(duì)照組TNF-α的陽(yáng)性表達(dá)光密度值于6小時(shí)達(dá)高峰，此后逐漸下降，24、48小時(shí)仍有表達(dá)。實(shí)驗(yàn)組于12小時(shí)達(dá)峰值，除1、6小時(shí)TNF-α表達(dá)強(qiáng)度低于對(duì)照組，其他各時(shí)間點(diǎn)表達(dá)強(qiáng)度均較對(duì)照組高,且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。脊髓神經(jīng)元細(xì)胞及神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞均可表達(dá)VEGF，兩組于致傷后1小時(shí)即可見VEGF陽(yáng)性表達(dá)，此后表達(dá)逐漸增強(qiáng)，實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組VEGF陽(yáng)性表達(dá)光密度值分別于24小時(shí)、12小時(shí)達(dá)高峰，48小時(shí)仍有較高表達(dá)。各時(shí)間點(diǎn)表達(dá)強(qiáng)度實(shí)驗(yàn)組均較對(duì)照組有差異(P<0.05)。對(duì)照組各時(shí)間點(diǎn)脊髓組織TNF-α免疫組化染色見圖2，實(shí)驗(yàn)組各時(shí)間點(diǎn)脊髓組織TNF-α免疫組化染色見圖3，對(duì)照組各時(shí)間點(diǎn)脊髓組織VEGF免疫組化染色見圖4，實(shí)驗(yàn)組各時(shí)間點(diǎn)脊髓組織VEGF免疫組化染色見圖5，兩組TNF-α、VEGF陽(yáng)性表達(dá)光密度值見表1。

表1兩組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物脊髓損傷各時(shí)間點(diǎn)TNF-α、

①脊髓損傷后1小時(shí)TNF-α表達(dá)強(qiáng)度較低；②脊髓損傷后6小時(shí)TNF-α表達(dá)強(qiáng)度明顯增強(qiáng)并達(dá)高峰；③脊髓損傷后12小時(shí)TNF-α表達(dá)開始下降；④⑤脊髓損傷后24小時(shí)及48小時(shí)TNF-α仍有一定的表達(dá)，強(qiáng)度均較前下降

①脊髓損傷后1小時(shí)TNF-α表達(dá)強(qiáng)度較低；②脊髓損傷后6小時(shí)TNF-α表達(dá)強(qiáng)度明顯增強(qiáng)；③脊髓損傷后12小時(shí)TNF-α表達(dá)強(qiáng)度達(dá)高峰；④⑤脊髓損傷后24小時(shí)及48小時(shí)TNF-α仍有一定的表達(dá)，強(qiáng)度均較前下降

①脊髓損傷后1小時(shí)VEGF表達(dá)強(qiáng)度較低；②脊髓損傷后6小時(shí)VEGF表達(dá)強(qiáng)度較前增強(qiáng)；③脊髓損傷后12小時(shí)VEGF表達(dá)強(qiáng)度達(dá)高峰；④⑤脊髓損傷后24小時(shí)及48小時(shí)VEGF仍有一定的表達(dá)，強(qiáng)度均較前下降

①脊髓損傷后1小時(shí)VEGF表達(dá)強(qiáng)度較低；②③脊髓損傷后6小時(shí)及12小時(shí)VEGF表達(dá)強(qiáng)度均較前增強(qiáng)；④脊髓損傷后24小時(shí)VEGF表達(dá)強(qiáng)度達(dá)高峰，以神經(jīng)元細(xì)胞表達(dá)較為明顯；⑤脊髓損傷后48小時(shí)VEGF仍有一定的表達(dá)，強(qiáng)度均較前下降

3討論

脊髓損傷是外界直接或間接因素導(dǎo)致的一種較為嚴(yán)重的中樞神經(jīng)損傷。脊髓損傷包括原發(fā)性和繼發(fā)性損傷，其中繼發(fā)性損傷是脊髓損傷急性及亞急性期的重要組成部分。炎癥反應(yīng)是脊髓繼發(fā)性損傷病理生理中的重要組成部分，是導(dǎo)致脊髓損傷加重的主要因素之一[2]。TNF-α是體內(nèi)具有多種生物活性的炎性細(xì)胞因子,在炎癥反應(yīng)及免疫調(diào)節(jié)等方面起重要作用。TNF-α也是參與SCI炎癥反應(yīng)的重要細(xì)胞因子，在脊髓損傷的早期即有表達(dá)，并介導(dǎo)相應(yīng)的炎性細(xì)胞侵入受損脊髓局部產(chǎn)生炎性反應(yīng)，從而加重脊髓的損傷[3]。有研究[1]表明，TNF-α是在中樞神經(jīng)系統(tǒng)損傷最早出現(xiàn)增高的細(xì)胞因子，可上調(diào)其他細(xì)胞因子，可能是眾多細(xì)胞因子的重要啟動(dòng)因子。VEGF是一種糖蛋白，通過與其受體作用促進(jìn)脊髓微血管形成，發(fā)揮神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)和神經(jīng)保護(hù)作用。VEGF改善受損脊髓微循環(huán)主要是通過激活血管內(nèi)皮細(xì)胞釋放NO，增加損傷脊髓的局部血流量，促進(jìn)新生毛細(xì)血管的形成[4]。VEGF作為脊髓損傷后的一種保護(hù)因子，還能促進(jìn)軸突再生，對(duì)脊髓殘存神經(jīng)元的存活及損傷修復(fù)起到重要作用[5]。

海水具有低溫、高滲透壓、高電解質(zhì)濃度以及含有微生物等特性[6]。本實(shí)驗(yàn)在脊髓損傷的基礎(chǔ)上引入了海水這一特殊理化因素，目前國(guó)內(nèi)外已經(jīng)對(duì)海水合并胸腹部、四肢、顱腦、皮膚等損傷進(jìn)行了相關(guān)研究，從各個(gè)方面、不同角度闡述了海水對(duì)各部位原發(fā)傷的影響機(jī)制[7-10]。但海水合并脊髓損傷的相關(guān)研究在國(guó)內(nèi)外均尚少見。

本實(shí)驗(yàn)在脊髓損傷的基礎(chǔ)上進(jìn)行了人工海水的浸泡處理，結(jié)合免疫組化染色觀察脊髓組織創(chuàng)傷部位炎癥因子TNF-α、VEGF的表達(dá)情況。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，對(duì)照組TNF-α的陽(yáng)性表達(dá)光密度值于6小時(shí)達(dá)高峰，此后逐漸下降，24、48小時(shí)仍有表達(dá)。海水浸泡組于12小時(shí)達(dá)峰值，除1、6小時(shí)TNF-α表達(dá)強(qiáng)度低于對(duì)照組，其他各時(shí)間點(diǎn)表達(dá)強(qiáng)度均較對(duì)照組高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。這一結(jié)果提示海水浸泡對(duì)脊髓損傷早期病理變化有一定的抑制作用，但后期造成的損傷更為嚴(yán)重。脊髓繼發(fā)性損傷是多種細(xì)胞因子參與并調(diào)節(jié)誘導(dǎo)的炎癥反應(yīng)過程，脊髓損傷后局部缺血缺氧，炎性細(xì)胞因子表達(dá)增加，介導(dǎo)炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，造成組織壞死。TNF-α是脊髓損傷早期表達(dá)的炎癥因子之一，不但促進(jìn)白細(xì)胞在缺血區(qū)的聚集和浸潤(rùn)，還可誘導(dǎo)脂質(zhì)過氧化物、氧自由基等的產(chǎn)生，這些有害毒素進(jìn)一步刺激單核巨噬細(xì)胞TNF-α的表達(dá)，造成炎癥的放大效應(yīng)，從而加重脊髓組織的損傷[11]。由于海水低溫、高滲、低堿性的特點(diǎn)，對(duì)開放性脊髓損傷局部的血流、電解質(zhì)造成顯著影響。低溫可以降低脊髓組織代謝需求及氧耗量, 減少乳酸蓄積，還能抑制內(nèi)源性毒性產(chǎn)物對(duì)神經(jīng)組織的毒害[12]。在海水浸泡組早期可能是因?yàn)楹Ｋ牡蜏靥匦詴簳r(shí)抑制了損傷的加重，故實(shí)驗(yàn)組1、6小時(shí)TNF-α表達(dá)強(qiáng)度低于對(duì)照組。胡勇等[13]研究也表明低溫對(duì)脊髓損傷后炎癥細(xì)胞因子TNF-α分泌有一定的抑制作用。在海水浸泡組后期脊髓損傷局部的微循環(huán)障礙，組織缺血缺氧，血管通透性增強(qiáng)，血管內(nèi)微血栓形成等加劇了炎癥反應(yīng)。同時(shí)海水的高離子濃度直接刺激傷區(qū)的組織細(xì)胞釋放IL-8、腫瘤壞死因子、NO等炎性介質(zhì)，海水的堿性成分也能增加細(xì)胞的損傷, 促使細(xì)胞崩解和磷脂釋放, 發(fā)生脂質(zhì)過氧化。這些影響因素可能是導(dǎo)致海水浸泡組脊髓組織中TNF-α表達(dá)顯著增高的原因。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示兩組于致傷后1小時(shí)即可見VEGF陽(yáng)性表達(dá)，此后表達(dá)逐漸增強(qiáng)，實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組VEGF陽(yáng)性表達(dá)光密度值分別于24小時(shí)、12小時(shí)達(dá)高峰，48小時(shí)仍有較高表達(dá)。有研究[14]顯示，VEGF通過促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞分裂、增殖及新生血管形成，清除壞死組織，有利于損傷組織的重建和修復(fù)，是對(duì)組織缺氧的保護(hù)性反應(yīng)。

本實(shí)驗(yàn)海水浸泡組各時(shí)間點(diǎn)VEGF的表達(dá)強(qiáng)度均高于對(duì)照組，在一定程度上說(shuō)明海水加重了脊髓局部組織缺氧。這可能是由于血管及損傷組織處于海水的高滲環(huán)境中，組織細(xì)胞脫水，海水的高滲、堿性特點(diǎn)干擾了細(xì)胞膜的物質(zhì)運(yùn)輸和能量轉(zhuǎn)換，促進(jìn)炎性介質(zhì)釋放，細(xì)胞功能受損，細(xì)胞缺氧更加嚴(yán)重，誘導(dǎo)VEGF表達(dá)上調(diào)。海水的低溫特性可引起供給脊髓的血管痙攣收縮，局部的血流量下降，組織缺血缺氧加重，這可能是導(dǎo)致VEGF升高的另一原因。兩組中TNF-α與VEGF表達(dá)高峰呈一前一后態(tài)勢(shì)(對(duì)照組TNF-α于6小時(shí)達(dá)高峰，VEGF于12小時(shí)達(dá)高峰；實(shí)驗(yàn)組TNF-α于12小時(shí)達(dá)高峰，VEGF于24小時(shí)達(dá)高峰)，這也是脊髓損傷過程中損傷因子與修復(fù)因子的相互制約、相互影響的病理生理現(xiàn)象。

海水獨(dú)特的理化性質(zhì)對(duì)脊髓損傷早期的病理改變有一定的抑制作用，延遲了脊髓損傷后創(chuàng)傷性水腫以及抑制了相關(guān)炎性因子的表達(dá)，但最終海水浸泡加重了脊髓繼發(fā)性損傷。通過本實(shí)驗(yàn)我們可以看出海水浸泡對(duì)脊髓損傷的病理過程的影響。TNF-α高表達(dá)所導(dǎo)致的過度炎癥反應(yīng)，和VEGF的保護(hù)性反應(yīng)貫穿整個(gè)過程。這兩種細(xì)胞因子可作為海水浸泡脊髓損傷預(yù)后判斷、傷情評(píng)估的指標(biāo)。脊髓損傷早期干預(yù)措施(如免疫炎癥抑制劑、高壓氧、大劑量激素、VEGF等)多是在傷后6～8 h內(nèi)，而對(duì)于合并海水浸泡脊髓損傷的治療時(shí)間窗要延遲至傷后12小時(shí)才可能較有力地改善此類傷者的預(yù)后。

參考文獻(xiàn)

[1]Mc Coy MX，Tansey MG．TNF signaling inhibition in the CNS：implications for normal brain function and neurodegenerative disease[J]．J Neuroinflam，2008，5(1)：45.

[2]王波，方以群，張存海. 高壓氧對(duì)大鼠脊髓損傷后局部炎癥因子的影響[J]. 中國(guó)應(yīng)用生理學(xué)雜志, 2012, 28(5):388-389.

[3]Yang L，Blumbergs PC，Jones NR，et al. Early expression and cellular localization of proinflammatory cytokines interleukin-1 beta interleukin-6 and tumor necrosis factor-alpha in human traumatic spinal cord injury[J].Spine，2004，29(9)：966-971.

[4]Gupta K, Kshirsagar S, Li W, et al. VEGF prevented apoptosis of human microvascular endothelial cells via opposing effects on MAPK/ERK and SAPK/JNK signaling[J].Exp Cell Res,1999,247(2):495-504.

[5]Hobson MI, Green CJ, Terenghi G, et al. VEGF enhances intraneural angiogenesis after axotomy[J]. J Anat,2000,197(4):591-605.

[6]馬建國(guó)，張志凌，曾國(guó)慶.66例海水浸泡后開放性骨折治療體會(huì)[J].中華航海醫(yī)學(xué)與高氣壓醫(yī)學(xué)雜志，2006,13(6)：377.

[7]姜濤,霍焱,王大鵬，等. 海水浸泡對(duì)腹部開放傷大鼠TGF-β1 VEGF蛋白及mRNA表達(dá)的影響[J].解放軍醫(yī)學(xué)雜志，2007,32(8):883-885.

[8]袁邦清,王守森,林川凎. 海水浸泡兔腦挫傷后細(xì)胞凋亡相關(guān)因子表達(dá)的研究[J].實(shí)用醫(yī)學(xué)雜志，2009,25(2):197-199.

[9]賴西南,王麗,陳蕾，等. 海水浸泡肢體火器傷骨骼肌一氧化氮水平的變化及意義[J].創(chuàng)傷外科雜志，1999,1(1):26-28.

[10]潘敏鴻,姜少軍,吳波，等. 海水浸泡對(duì)表皮細(xì)胞凋亡和增殖的影響[J]. 醫(yī)學(xué)研究生學(xué)報(bào)，2007,20(9):916-919.

[11]苗巍巍,楊有庚,程杰平. 腫瘤壞死因子α在大鼠急性脊髓損傷中的表達(dá)[J].中國(guó)老年學(xué)雜志，2009,29(5):535-537.

[12]李明,代小秋,程愛國(guó). 低溫預(yù)處理對(duì)大鼠脊髓損傷早期病理形態(tài)學(xué)的影響[J]. 中國(guó)煤炭工業(yè)醫(yī)學(xué)雜志，2010,13(6):920-921.

[13]胡勇, 黃巍, 李德寶. 亞低溫對(duì)急性脊髓損傷后腫瘤壞死因子-α表達(dá)及運(yùn)動(dòng)功能恢復(fù)的影響[J].中國(guó)醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)，2012,10(7)：47-48.

[14]姜濤,霍焱,王大鵬，等. 海水浸泡對(duì)腹部開放傷大鼠T G F- β1 VEGF 蛋白及m R N A 表達(dá)的影響[J].解放軍醫(yī)學(xué)雜志，2007,32(8):883-885.

(2014-10-15收稿2015-01-20修回)

Influence on the neural cell expression of TNF-α and VEGF of spinal cord injury with seawater immersion

HuFeng,ZhuJie,ZhangDi,etal

DepartmentofOrthopedics,thePLAClinicalCollegeofAnhuiMedicalUniversity(PLA105thHospital) ,Hefei230031,China

[Abstract]ObjectiveTo establish model of spinal cord injury with seawater immersion,observe the influence on neural cell expression of TNF-α and VEGF.MethodsThe rabbit model of spinal cord injury were built based on modified Allensmethod.According to random digital table,60 rabbits were randomly divided into two groups, experimental group: cut vertebral plate and damaged spinal cord with seawater immersion(n=30,and the immersion time is 60 minutes). Control group:cut off vertebral plate and damaged spinal cord without seawater immersion(n=30).Two groups randomly divided into five groups based on 1 hour,6 hours,12 hours,24 hours,48 hours after immersion. The animals were sacrificed at every timepoint,and pathological of spinal cord was studied by light microscopy, immunohistochemistry was used to test the expression of TNF-α and VEGF.ResultThe traumatic spinal cord edemous peak of control group at the timepoint of 6 hours,but the peak of experimental group was postponded to the 12 hours. Immunohistochemistry showed positive expression of TNF-α, VEGF are in two groups,but the expression strength of two groups has notable diffence in each timepoint(P<0.05). And the expression peak of TNF-α, VEGF is diffrent in two groups. ConclusionSeawater immersion delayed traumatic spinal cord injury in early stage, but it aggravated spinal cord injury finally. The high expression of TNF-α, VEGF indicated a close relationship with injury, these two kind of proteins can be used as judgement of prognosis and injury assessment of spinal cord injury with seawater immersion.

[Keywords]Seawater immersion; Spinal cord injury; Tumor necrosis factor-α(TNF-α); Vascular endothelial growth factor(VEGF)

doi:10.3969/j.issn.1000-0399.2015.11.001

通信作者：方健，fj105yy@163.com