胃癌組織中VEGF和ILK的表達(dá)及意義

牛蕾

[摘要] 目的 探討胃癌組織中血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）和整合素連接激酶（ILK）的表達(dá)及其與臨床病理特征的關(guān)系。 方法 應(yīng)用免疫組化SABC法檢測48例胃癌組織中VEGF和ILK的表達(dá)情況，利用SPSS 19.0統(tǒng)計(jì)軟件分析VEGF和ILK的差異性及相關(guān)性。 結(jié)果 VEGF和ILK在胃癌組織中的表達(dá)陽性率依次為56.2%（27/48）、37.5%（18/48）。隨著腫瘤浸潤深度加深及出現(xiàn)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，兩者的陽性表達(dá)率明顯升高（P<0.05）；VEGF和ILK在Ⅲ、Ⅳ期胃癌中的陽性表達(dá)率明顯高于Ⅰ、Ⅱ期（P<0.01），且與患者的性別及年齡無關(guān)（P>0.05）。VEGF和ILK在胃癌組織中的表達(dá)呈正相關(guān)（r=0.379，P<0.05）。 結(jié)論 VEGF和ILK的持續(xù)遞增式表達(dá)提示其可能參與了胃癌的生長、侵襲和轉(zhuǎn)移過程。VEGF和ILK在胃癌中的表達(dá)存在正相關(guān)，ILK可能通過信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑啟動VEGF的表達(dá)，促進(jìn)腫瘤早期的血管發(fā)生和形成。

[關(guān)鍵詞] 胃癌；血管內(nèi)皮生長因子；整合素連接激酶

[中圖分類號] R735.2 [文獻(xiàn)標(biāo)識碼] A [文章編號] 1674-4721（2015）07（b）-0047-03

[Abstract] Objective To explore the expressions of vascular endothelial growth factor （VEGF） and integrin-linked kinase （ILK） in gastric cancer tissue and their relationships with clinicopathological features. Methods Expressions of VEGF and ILK from gastric cancer tissue in 48 patients were detected by immunohistochemical strept avidin-biotin complex （SABC）.The difference and correlation between VEGF and ILK were analyzed by SPSS 19.0 statistical software. Results The positive expression rates of VEGF and ILK in gastric cancer tissue were 56.2% （27/48） and 37.5% （18/48） respectively.With deepening of depth of tumor invasion and lymphatic metastasis，the positive expression rates in the two indexes were greatly increased （P<0.05）.The positive expression rates in gastric cancer tissue at stage Ⅲ and Ⅳ were much higher than those at stage Ⅰand Ⅱ （P<0.01）.There was no relationship between positive expression rate and gender or age （P>0.05）.Expression of VEGF had a positive correlation with ILK one （r=0.379，P<0.05）. Conclusion The continuous incremental expressions of VEGF and ILK indicate that they may participate in the growth，invasion，and metastasis.VEGF has a positive correlation with ILK in the expression in gastric cancer patients.Expression of VEGF is activated by signal transduction pathway in ILK which promotes early angiogenesis and formation in tumor.

[Key words] Gastric cancer；Vascular endothelial growth factor；Integrin-linked kinase

腫瘤組織中血管的生成是腫瘤生長、發(fā)生的主要因素，而惡性腫瘤微血管網(wǎng)的早期建立及快速生長是其快速侵襲和發(fā)展的原因。血管內(nèi)皮生長因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）是迄今發(fā)現(xiàn)的最重要的促血管生成因子[1]。整合素連接激酶（integrin-linked kinase，ILK）可以介導(dǎo)細(xì)胞外基質(zhì)蛋白的信號傳遞，參與了貼壁細(xì)胞的生長、增殖、移行，在腫瘤組織中高表達(dá)，抑制其活性能減弱腫瘤的侵襲和血管生成。本文通過研究胃癌中VEGF和ILK的表達(dá)，探討它們在腫瘤的生長過程中對血管的影響及其在腫瘤轉(zhuǎn)移過程中的作用。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取阜新市中心醫(yī)院2010年3月～2014年3月期間行根治性手術(shù)的胃癌病例標(biāo)本，從中隨機(jī)選取48例。腫瘤組織標(biāo)本均經(jīng)甲醛固定、常規(guī)石蠟包埋，HE染色確診為胃癌病例。全部病例術(shù)前均未行放療及化療治療。48例患者中男29例，女19例；年齡39～78歲，平均（59.27±18.21）歲；漿膜內(nèi)20例，漿膜外28例；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移34例。根據(jù)國際抗癌聯(lián)盟（UICC）關(guān)于胃癌TNM分期方法[2]進(jìn)行臨床分期：Ⅰ期10例，Ⅱ期14例，Ⅲ期21例，Ⅳ期3例。

1.2 試劑及方法

1.2.1 主要試劑 鼠抗人ILK單克隆抗體，鼠抗人VEGF單克隆抗體，SABC免疫組化染色試劑盒，DAB顯色盒，均購自福州邁新生物技術(shù)開發(fā)有限公司。

1.2.2 方法 用免疫組織化學(xué)染色SABC法觀察VEGF和ILK在胃癌中的表達(dá)分布情況。為保證判定結(jié)果的一致性，每次染色均設(shè)有已經(jīng)證實(shí)的陽性表達(dá)的VEGF和ILK切片對照作為染色質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)。以PBS代替一抗作為陰性對照，由2名有經(jīng)驗(yàn)的病理醫(yī)師獨(dú)立觀察切片。

1.2.3 結(jié)果判定 在200倍視野下隨機(jī)選取5個視野，記數(shù)每個視野中腫瘤上皮細(xì)胞的染色情況，取平均值。VEGF和ILK陽性著色位于細(xì)胞質(zhì)中呈彌散或散在的棕黃色顆粒。根據(jù)瘤組織中陽性細(xì)胞的有無及數(shù)量，將其分為陰性（-）：未見陽性細(xì)胞；弱陽性（+）：陽性細(xì)胞少于10%；陽性（++）：陽性細(xì)胞11%～30%；強(qiáng)陽性（+++）：陽性細(xì)胞不低于30%[3]。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS 19.0軟件統(tǒng)計(jì)包分析，計(jì)數(shù)資料以率表示，采用χ2或Fisher精確概率法檢驗(yàn)。相關(guān)性分析采用Spearman相關(guān)分析法。以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 胃癌組織中VEGF與ILK的表達(dá)情況

VEGF主要表達(dá)在細(xì)胞漿，呈棕褐色顆粒狀（圖1）。ILK主要也表達(dá)在細(xì)胞漿，呈棕褐色顆粒狀（圖2）。本組中VEGF的陽性表達(dá)率為56.2%（27/48），ILK的陽性表達(dá)率為37.5%（18/48）。VEGF和ILK在胃癌組織中的表達(dá)與性別、年齡無關(guān)（P>0.05），VEGF和ILK在浸潤深度累及漿膜、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM（Ⅲ+Ⅳ）期中的組陽性表達(dá)明顯高于在浸潤深度未累及漿膜，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM（Ⅰ+Ⅱ）期中的陽性表達(dá)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）（表1）。

2.2 胃癌中VEGF與ILK之間的關(guān)系

3討論

腫瘤在早期發(fā)生時(shí)僅以一種微小的、無癥狀表現(xiàn)的腫瘤灶形式存在，腫瘤灶限制腫瘤對氧及營養(yǎng)的利用，使其處于被動限制狀態(tài)，但是當(dāng)腫瘤內(nèi)新生血管形成之后，腫瘤灶的局部被動限制狀態(tài)被打破，腫瘤病灶快速發(fā)展，新生血管網(wǎng)也迅速建立，這種變化帶來了腫瘤尤其是惡性腫瘤的侵襲性增強(qiáng)，遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移能力提高[4-5]。因此，腫瘤的血管形成以及新生血管網(wǎng)的建立在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展、侵襲及轉(zhuǎn)移中發(fā)揮著重要作用，已成為腫瘤治療的新靶點(diǎn)之一[6]，尋找到血管生成的機(jī)制，有效控制血管生成的方法就有希望控制腫瘤的生長和轉(zhuǎn)移，從而找到治療腫瘤尤其是惡性腫瘤的手段和方法。

目前已知促進(jìn)血管生成的細(xì)胞因子有VEGF、表皮細(xì)胞生長因子、轉(zhuǎn)化生長因子等，而VEGF及其受體是目前公認(rèn)的促進(jìn)新生血管形成及血管網(wǎng)建立的關(guān)鍵因素，它能夠促使血管內(nèi)皮細(xì)胞進(jìn)行有絲分化、增殖、移行并最終形成新生血管，進(jìn)一步再建立新生血管網(wǎng)，是目前已知的刺激腫瘤血管生成能力最強(qiáng)的細(xì)胞因子。有研究表明，VEGF在腫瘤組織中的高表達(dá)與腫瘤浸潤深度、惡性程度、轉(zhuǎn)移情況、患者預(yù)后不良密切相關(guān)[7]。ILK廣泛表達(dá)于黏著斑中，是磷脂酰肌醇激酶（PI3K）的作用底物，是蛋白激酶B（Pkb/Akt）和糖原合成酶激酶3（GSK-3）重要的上游激酶。在細(xì)胞基質(zhì)之間及細(xì)胞外信號傳遞具有重要的作用，可以調(diào)節(jié)諸多細(xì)胞的生長、分裂、增殖、存活、遷移和侵襲，在血管形成的化學(xué)信號傳導(dǎo)中起著重要作用[8-9]。研究表明，在VEGF的轉(zhuǎn)錄和表達(dá)上ILK參與并調(diào)控整個過程，增加血管內(nèi)皮細(xì)胞的移動性和通透性，并促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞的分裂和增殖，具有顯著促進(jìn)微血管發(fā)生和新生血管網(wǎng)建立的作用。

本研究發(fā)現(xiàn)，VEGF和ILK在胃癌組織中的表達(dá)與性別、年齡無關(guān)，在浸潤深度累及漿膜、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM（Ⅲ+Ⅳ）期中的陽性表達(dá)明顯高于浸潤深度未累及漿膜、無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM（Ⅰ+Ⅱ）期中的表達(dá)，這與李勝水等[10]的研究相符，表明VEGF和ILK在胃癌的發(fā)生發(fā)展中起重要作用，尤其是在浸潤程度高、有淋巴轉(zhuǎn)移的TNM（Ⅲ+Ⅳ）期，說明在腫瘤成熟期后，大量高表達(dá)的VEGF繼續(xù)促進(jìn)血管生成，而腫瘤內(nèi)血管網(wǎng)已經(jīng)基本充分建立，它的生長速度及擴(kuò)張程度已經(jīng)能夠達(dá)到自我調(diào)節(jié)和控制，但腫瘤的發(fā)展已經(jīng)不滿足自身血管網(wǎng)的完善，它要繼續(xù)擴(kuò)展占領(lǐng)，而人類身體已然成為腫瘤的宿主。VEGF與ILK在胃癌中的表達(dá)存在正相關(guān)，說明它們之間存在某種正反饋機(jī)制，可能由活化的ILK通過激活Pkb/Akt-473絲氨酸，使mTOR/FRAP-2448磷酸化水平增高，激活了Akt/iNOS通路，促進(jìn)HIF-1α產(chǎn)生，通過iNOS調(diào)節(jié)NO濃度、誘導(dǎo)細(xì)胞增殖，從而起到了促血管生成的作用[11-12]。Dulak等[13]和Kubo等[14]認(rèn)為，NO又可增加VEGF的合成。機(jī)制可能為通過增強(qiáng)VEGF基因啟動子的活性來增加VEGF表達(dá)。Konopha等[15]研究也表明NO在VEGF促血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖和遷移中起重要作用，而且NO還發(fā)揮參與VEGF的促血管通透性的作用。

總之，腫瘤的血管形成以及新生血管網(wǎng)的建立在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展、侵襲及轉(zhuǎn)移中發(fā)揮著重要作用，而通過細(xì)胞因子的調(diào)節(jié)可能是解決和控制腫瘤血管生成及血管網(wǎng)建立的新的手段和方法。

[參考文獻(xiàn)]

[1] 杜京濤，許新華.血管內(nèi)皮生長因子在腫瘤中的研究進(jìn)展[J].腫瘤防治研究，2009，36（2）：162-165.

[2] 陳波，孫繼元，金鋒，等.關(guān)于胃癌TNM分期系統(tǒng)中最少淋巴結(jié)檢出數(shù)目的研究[J].中華外科雜志，2005，43（11）：702-705.

[3] Feng CW，Wang LD，Jiao LH，et al.Expression of p53，inducible nitric oxide synthase and vascular endothelial growth factor in gastric precancerous and cancerous lesions：correlation with clinical features[J].BMC Cancer，2002，2：8.

[4] Harlozinska A.Progress in molecular mechanisms of tumor metastasis and angiogenesis[J].Anticancer Res，2005，25（5）：3327-3333.

[5] Bendig G，Grimmler M，Huttner IG，et al.Integrin-linked kinase，a novel component of the cardiac mechanical stretch sensor，controls contractility in the zebrafish heart[J]. Genes Dev，2006，20（17）：2361-2372.

[6] 趙軍，劉敘儀，張青云，等.晚期非小細(xì)胞肺癌患者外周血VEGF和bFGF及MMP-9水平與預(yù)后的關(guān)系[J].中華腫瘤雜志，2005，27（11）：676-679.

[7] 李容，楊純正，能冬生，等.血管內(nèi)皮生長因子與腫瘤治療[J].國外醫(yī)學(xué)：生理病理科學(xué)與臨床分冊，2002，22（5）：475-477.

[8] 王升，吳本儼，尤緯締.胃癌組織血管內(nèi)皮生長因子表達(dá)對胃癌生物學(xué)行為的影響[J].世界華人消化雜志，2005， 13（6）：716-719.

[9] Hannigan G，Troussard AA，Dedhar S.Integrin-linked kinase： a cancer therapeutic target unique among its ILK [J].Nat Rev Cancer，2005，5：51-63.

[10] 李勝水，許華，楊晶，等.p27和ILK在胃癌及癌前病變中的表達(dá)及意義[J].現(xiàn)代腫瘤醫(yī)學(xué)，2010，18（1），128-130.

[11] Tan C，Cruet-Hennequart S，Troussard A.Regulation of tumor angiogenesis by integrin-linked kinase[J].Cancer Cell，2004，5（1）：79-90.

[12] Edwards LA，Woo J，Huxham LA，et a1.Suppression of VEGF secretion and changes in glioblastoma muliforme microenvironment by inhibition of integrin-linked kinase（ILK）[J].Mol Cancer Ther，2008，7（1）：59-70.

[13] Dulak J，Jozkowicz A，Dcmbinska-Kicc A，et al.Nitric oxide induces the synthesis of vascular endothelial growth factor by rat vascular smooth muscle cells[J].Arterioscler Thromb Vasc Biol，2000，20（3）：659-666.

[14] Kubo H，F(xiàn)ujiwara T，Jussila L.Involvement of vascular endothelial growth factor receptor-3 in maintainance of integrity of endothelial cell lining during rumor angiogenesis[J].Blood，2000，96（2）：546-553.

[15] Konopha TE，Barker JE，Bamford TL，et al.Nitric oxide synthase Ⅱ gene disruption：implications for tumor growth and vascular endothelial growth factor production[J].Cancer Res，2001，61（7）：3182-3187.

（收稿日期：2015-03-02 本文編輯：衛(wèi) 軻）