食管鱗癌中核轉(zhuǎn)錄因子-κB和CXCR4的表達(dá)及意義

王永霞 趙 迪 湯 政 李道明 (新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院病理學(xué)教研室，河南 新鄉(xiāng) 4500)

食管鱗癌中核轉(zhuǎn)錄因子-κB和CXCR4的表達(dá)及意義

王永霞 趙 迪1湯 政2李道明3(新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院病理學(xué)教研室，河南 新鄉(xiāng) 453003)

目的 探討核轉(zhuǎn)錄因子-κB(NF-κB)和CXCR4在食管鱗癌發(fā)生、發(fā)展中的作用。方法 應(yīng)用免疫組化SP法檢測(cè)124例食管鱗癌組織、62例癌旁不典型增生組織及62例正常食管組織中NF-κB和CXCR4蛋白的表達(dá)情況。結(jié)果 NF-κB和CXCR4蛋白在正常食管黏膜、癌旁不典型增生組織和食管鱗癌組織中的陽(yáng)性表達(dá)率逐漸增高(P＜0.05)。NF-κB和CXCR4蛋白的表達(dá)與食管鱗癌的浸潤(rùn)深度和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況均密切相關(guān)(P＜0.05)，而與患者的性別、年齡無(wú)顯著相關(guān)性(P＞0.05)，同時(shí)NF-κB和CXCR4蛋白表達(dá)間呈正相關(guān)關(guān)系(P＜0.05)。結(jié)論 NF-κB和CXCR4的高表達(dá)與食管鱗癌的發(fā)生及浸潤(rùn)、轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，二者可能協(xié)同促進(jìn)了食管鱗癌的轉(zhuǎn)移。

食管鱗癌;核轉(zhuǎn)錄因子-κB;趨化因子受體CXCR4;癌變;浸潤(rùn);轉(zhuǎn)移

食管癌是我國(guó)常見(jiàn)的惡性腫瘤之一，特別是豫北地區(qū)，其發(fā)病率居世界第一位，而癌組織的浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移是導(dǎo)致患者死亡主要原因〔1〕。目前有關(guān)食管癌浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移機(jī)制的研究已成為熱點(diǎn)。本研究采用免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)食管鱗癌、癌旁正常組織及不典型增生組織中NF-κB和CXCR4的表達(dá)情況，并分析二者與食管鱗癌臨床病理參數(shù)關(guān)系及兩者之間相關(guān)性的分析，探討它們的表達(dá)在食管鱗癌發(fā)生、浸潤(rùn)及轉(zhuǎn)移中的作用，為患者的預(yù)后判斷提供有價(jià)值的分子生物學(xué)指標(biāo)。

1 材料與方法

1.1 一般資料 收集新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院第三附屬醫(yī)院2008年1月至2012年3月食管癌手術(shù)切除標(biāo)本存檔蠟塊，患者術(shù)前均無(wú)化療、放療及免疫治療史。共納入124例食管癌患者，男66例，女58例，年齡38～75〔平均(60.6±9.5)〕歲。HE染色已證實(shí)124例食管癌標(biāo)本均為鱗狀細(xì)胞癌，其中，Ⅰ級(jí)30例，Ⅱ級(jí)50例，Ⅲ級(jí)44例;有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組84例，無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組40例。淺層浸潤(rùn)組18例，腫瘤浸潤(rùn)深度在黏膜層或黏膜下層;深層浸潤(rùn)組106例，腫瘤浸潤(rùn)深度在肌層或外膜層。62例癌旁組織及切端正常組織已證實(shí)為不典型增生及正常食管黏膜組織。

1.2 主要試劑及方法 免疫組織化學(xué)SP法，鼠抗人NF-κBp65單克隆抗體濃縮液為美國(guó)Santa Cruz公司產(chǎn)品，購(gòu)自北京中杉金橋生物有限公司，工作濃度為1∶50。兔抗人CXCR4多克隆抗體濃縮液艾美捷科技有限公司，工作濃度為1∶50。SP試劑盒及DAB顯色劑均購(gòu)自福州邁新生物有限公司。實(shí)驗(yàn)參照試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行，PBS代替一抗作陰性對(duì)照。

1.3 結(jié)果判斷標(biāo)準(zhǔn) NF-κB蛋白以胞核著棕黃、棕褐色為陽(yáng)性表達(dá)。CXCR4陽(yáng)性著色主要位于胞質(zhì)。每張切片取10個(gè)高倍視野，計(jì)算陽(yáng)性細(xì)胞百分?jǐn)?shù)，陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)＜10%者為陰性病例，≥10%者為陽(yáng)性病例。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 利用SPSS10.0軟件進(jìn)行χ2檢驗(yàn);相關(guān)性檢驗(yàn)用Spearman相關(guān)分析。

2 結(jié)果

2.1 NF-κB和CXCR4蛋白在不同食管病變組織中的表達(dá)食管鱗癌組織中NF-κB蛋白的陽(yáng)性表達(dá)主要定位于胞質(zhì)和胞核，CXCR4蛋白的陽(yáng)性表達(dá)主要位于胞質(zhì)，二者的陽(yáng)性細(xì)胞均以彌散分布為主(圖1)。正常食管黏膜組織中的陽(yáng)性表達(dá)主要位于基底層細(xì)胞。NF-κB和CXCR4蛋白在正常黏膜組織(17.7%，3.2%)、癌旁不典型增生組織(38.7%，41.9%)及鱗癌組織(53.2%，65.3%)中的陽(yáng)性表達(dá)率依次增高，組間比較有明顯差異(χ2=21.690，χ2=64.863，P＜0.05)。

圖1 NF-κB及CXCR4蛋白在食管鱗癌中的表達(dá)(DAB，×400)

2.2 NF-κB和CXCR4蛋白在食管鱗癌中的表達(dá)及與臨床生物學(xué)行為的關(guān)系 NF-κB和CXCR4蛋白與食管鱗癌的浸潤(rùn)深度及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)(P＜0.05)，而與患者的年齡和性別無(wú)關(guān)(P＞0.05)(表1)。

2.3 食管鱗癌中 NF-κB和 CXCR4蛋白表達(dá)間的關(guān)系Spearman相關(guān)分析結(jié)果表明，食管鱗癌中NF-κB和CXCR4蛋白表達(dá)呈正相關(guān)(r=0.302，P＜0.05)。

表1 食管鱗癌中NF-κB和CXCR4蛋白陽(yáng)性表達(dá)及與臨床生物學(xué)行為的關(guān)系(n)

3 討論

良、惡性腫瘤的主要區(qū)別是后者具有局部浸潤(rùn)和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的能力。而惡性腫瘤的局部浸潤(rùn)和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移情況也是判斷腫瘤患者預(yù)后的重要因素，惡性腫瘤一旦發(fā)生轉(zhuǎn)移，其生存率將明顯低于未發(fā)生轉(zhuǎn)移者。腫瘤的轉(zhuǎn)移是一個(gè)復(fù)雜的過(guò)程，并表現(xiàn)出高度的組織特異性，即腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移并不是隨機(jī)的而是由其所表達(dá)的趨化因子受體所決定的〔2〕。

趨化因子受體CXCR4為一種G蛋白耦聯(lián)受體，是目前發(fā)現(xiàn)表達(dá)最為廣泛的細(xì)胞因子受體之一，參與機(jī)體內(nèi)多種生理和病理過(guò)程且對(duì)多種惡性腫瘤的生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移都有重要作用。CXCR4在許多惡性腫瘤組織中表達(dá)水平明顯增高，且高表達(dá)CXCR4的腫瘤細(xì)胞有更高的轉(zhuǎn)移潛能〔3〕。Sun等〔4〕研究發(fā)現(xiàn)CXCR4抗體可以顯著抑制胰腺癌細(xì)胞株的侵襲和轉(zhuǎn)移。Chu等〔5〕通過(guò)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)，CXCR4在前列腺癌的轉(zhuǎn)移中具有重要作用。Sutton等〔6，7〕研究也顯示CXCR4的表達(dá)與肝癌的侵襲和轉(zhuǎn)移以及TNM分期、3年存活率等均密切相關(guān)。

本研究結(jié)果顯示，CXCR4在食管鱗癌中的表達(dá)明顯高于正常組織，且其表達(dá)與食管鱗癌的分化程度及浸潤(rùn)深度和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況密切相關(guān)，而與患者的年齡及性別無(wú)關(guān)，說(shuō)明CXCR4與食管鱗癌的發(fā)生、浸潤(rùn)及轉(zhuǎn)移過(guò)程發(fā)揮著重要作用。

NF-κB是最重要的轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子之一，其家族包括五個(gè)成員，目前研究最多的是p50/p65與抑制蛋白IκB結(jié)合形成的三聚體非活化狀態(tài)，p65是其重要的調(diào)節(jié)亞單位，也是其活化的主要形式。NF-κB的持續(xù)活化可促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的增殖、抑制腫瘤細(xì)胞的凋亡、促進(jìn)血管新生、提高腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移能力，在腫瘤發(fā)生、浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移等多個(gè)環(huán)節(jié)均起重要的作用〔8～10〕。

研究結(jié)果顯示，NF-κB與食管鱗癌的發(fā)生、浸潤(rùn)及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況密切相關(guān)。另有學(xué)者在肺癌和口腔鱗癌中的研究中發(fā)現(xiàn)SDF-1與CXCR4結(jié)合后通過(guò)ERK激活NF-KB，進(jìn)而細(xì)胞分泌更多的整合素、MMP等，由此促進(jìn)腫瘤的進(jìn)展〔11，12〕。本研究中，食管鱗癌中二者的表達(dá)間也存在正相關(guān)關(guān)系。提示在食管鱗癌中可能也存在著這樣的機(jī)制。

綜上，NF-κB與CXCR4在食管鱗癌高表達(dá)并協(xié)同促進(jìn)了癌細(xì)胞的浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移，這為未來(lái)食管鱗癌的臨床治療及治療靶點(diǎn)的選擇提供了一定的理論依據(jù)。

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R730.23

A

1005-9202(2015)09-2427-03;

10.3969/j.issn.1005-9202.2015.09.053

河南省自然科學(xué)基金項(xiàng)目(No.0411043200)

1 新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院第三附屬醫(yī)院 2 新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院法醫(yī)學(xué)教研室

3 鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院

李道明(1963-)，男，博士，教授，碩士生導(dǎo)師，主任醫(yī)師，主要從事腫瘤病理研究。

王永霞(1978-)，女，碩士，講師，主要從事腫瘤病理研究。

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〔2014-06-24修回〕

(編輯 安冉冉/曹夢(mèng)園)