一株病原性變形桿菌的分離鑒定及藥敏試驗

張超穎　姜正前

摘要：從浙江省某規(guī)模豬場病死仔豬肝臟中分離到1株病原菌，通過細菌形態(tài)和培養(yǎng)特性觀察、動物攻毒試驗、生化鑒定表明該分離菌株為變形桿菌。藥敏試驗表明，該分離菌株對頭孢曲松敏感，對大多數抗菌藥物不敏感。

關鍵詞：變形桿菌；分離鑒定；藥敏試驗

中圖分類號：S852.61 文獻標識碼：A 文章編號：1007-273X（2014）10-0026-02

變形桿菌廣泛存在于環(huán)境中，是一種條件致病菌，可引起人和多種動物發(fā)病。變形桿菌屬于腸桿菌科，包括普通變形桿菌、奇異變形桿菌、莫根變形桿菌、雷極變形桿菌和無恒變形桿菌[1]。其中豬的變形桿菌病主要是由奇異變形桿菌引起的。該菌為革蘭氏陰性短桿菌，形態(tài)多樣，有時呈球形或絲狀，該菌對營養(yǎng)要求不高，生長速度較快，在固體培養(yǎng)基上呈遷徙性、擴散性生長，形成鋪滿整個平板、厚薄交替的層層波狀菌苔。近年來，我國對人和豬、雞、牛發(fā)生變形桿菌的報道逐漸增多。作為規(guī)模化豬場環(huán)境中的優(yōu)勢細菌[2]，變形桿菌已成為危害我國養(yǎng)豬業(yè)的一種新的細菌。對變形桿菌進行分離鑒定，明確變形桿菌所引起的疾病在規(guī)模豬場中的流行情況，對疾病的防治具有重要意義。

2014年9月，浙江省某規(guī)模豬場的部分初生仔豬相繼發(fā)病并死亡，臨床癥狀以拉稀為主，糞便黃、綠色，稀糊狀或水樣，部分病豬關節(jié)有膿胞。曾用多種藥物進行治療，效果均不理想。經流行病學、細菌學、病理學綜合診斷，確診為仔豬變形桿菌病?，F將其報道如下。

1 材料與方法

1.1 樣品的采集

病料來源于浙江某規(guī)?；i場，無菌采取某病死仔豬的肝臟作為待檢材料。

1.2 試驗動物

20 g左右的普通級成年昆明小鼠，購自金華市藥監(jiān)所。

1.3 培養(yǎng)基

試驗所用培養(yǎng)基（普通營養(yǎng)肉湯、普通營養(yǎng)瓊脂平板、麥康凱瓊脂平板、鮮血瓊脂平板等）購自青島百博生物有限公司。

1.4 藥敏試紙及試劑

慶大霉素等22種常用抗生素藥敏試紙片，購自杭州微生物試劑有限公司；細菌微量生化反應管，購自杭州天和微生物試劑有限公司，批號20131120。

1.5 細菌的分離培養(yǎng)及形態(tài)觀察

無菌操作，用接種環(huán)挑取病死仔豬肝臟內部組織劃線接種于鮮血瓊脂平板上，于37 ℃培養(yǎng)24 h后，挑取優(yōu)勢菌落再分別接種于鮮血瓊脂平板和麥康凱瓊脂平板，37 ℃條件下培養(yǎng)24 h，觀察細菌生長情況。挑取純培養(yǎng)物進行革蘭氏染色和鏡檢。

1.6 生化鑒定

挑取純培養(yǎng)物按常規(guī)方法[3]進行生化試驗，觀察并記錄結果。

1.7 動物攻毒試驗

取分離菌接種于普通營養(yǎng)肉湯，37 ℃培養(yǎng)24 h，腹腔接種5只小白鼠，0.2 mL/只，對照組注射等量的普通營養(yǎng)肉湯，觀察其精神狀態(tài)、食欲等，記錄小白鼠的死亡時間。

1.8 藥敏試驗

用K-B紙片擴散法進行藥敏試驗[4]，用滅菌棉簽將菌液均勻涂布于培養(yǎng)基表面，至菌液被完全吸收后，將不同的藥敏紙片貼在培養(yǎng)基的適當位置。37 ℃培養(yǎng)24 h，觀察并記錄抑菌情況。

2 結果與分析

2.1 細菌的培養(yǎng)特性

分離到的細菌在普通營養(yǎng)肉湯、麥康凱瓊脂平板、鮮血瓊脂平板上均能生長。在鮮血瓊脂平板上，血瓊脂顏色變暗紅，有一股特殊臭味，細菌遷徙性生長覆蓋整個平皿，呈半透明波紋狀菌苔，無溶血現象。在麥康凱瓊脂平板上無遷徙性、擴散性生長現象，呈均勻圓形、半透明的單個無色菌落；在普通營養(yǎng)肉湯中，呈均勻混濁樣，管底可見少量沉淀。

2.2 細菌的形態(tài)特點

該分離菌革蘭氏染色呈陰性，在顯微鏡下可見粉紅色短桿菌，多形態(tài)，但較為一致。

2.3 細菌的生化特性

由表1可見，該分離菌符合變形桿菌的生化特征。

注：“+”表示阻性，“-”表示陰性。

2.4 動物攻毒試驗

腹腔注射菌液4 h后，試驗組小白鼠精神不振，活動能力下降；24 h后試驗組小白鼠死亡2只；48 h后試驗組小白鼠全部死亡。對照組小白鼠未出現任何異常。檢查死亡小白鼠，可見肛門處有稀便粘著、肝臟、心臟具細小出血點。從死亡小白鼠的肝、脾中分離到的細菌，其培養(yǎng)特性、形態(tài)特征與之前死亡仔豬肝臟分離到的細菌一致。

2.5 細菌的藥敏試驗

分離菌株對頭孢曲松最敏感，其次為多黏菌素B，對環(huán)丙沙星、氧氟沙星、氟哌酸、慶大霉素、丁胺卡那霉素、強力霉素、卡那霉素、氯霉素、林可霉素、先鋒5號、痢特靈、磺胺等藥物均不敏感。

3 小結與討論

目前，規(guī)模豬場中仔豬腹瀉很普遍，是引起仔豬死亡的一個重要原因。應對關鍵在于能夠盡快查清病原，選擇合適的藥物進行及時準確的治療。但是現在很多豬場對疾病的治療多是憑經驗自行選藥，用藥不夠規(guī)范，抗生素濫用情況非常嚴重，容易產生耐藥性，給細菌病的治療帶來困難，豬場損失嚴重。從本試驗中可以看到，分離到的變形桿菌對大多數藥物均不敏感，如果不在藥敏試驗的結果指導下合理選擇治療藥物，將會非常盲目。變形桿菌作為條件性致病菌廣泛存在于豬場環(huán)境中，當豬只抵抗力低時可以通過消化道、呼吸道等途徑傳播。該病已經成為危害養(yǎng)豬業(yè)的一種新的細菌性傳染病，變形桿菌耐藥性強，且其作為人畜共患傳染病病原，應當引起豬場的高度重視。

參考文獻：

[1] 陸承平.獸醫(yī)微生物學[M].第三版.北京：中國農業(yè)出版社，2012.

[2] 李金良，李旭廷，聶 建，等. 2008～2009年西南地區(qū)規(guī)?；i場病原菌耐藥性流行情況調查[J].中國獸醫(yī)雜志，2010，46（11）：15-18.

[3] 姚火春.獸醫(yī)微生物實驗指導[M].第二版.北京： 中國農業(yè)出版社，2010.

[4] 韓文瑜.病原細菌檢驗技術[M].長春： 吉林科學技術出版社，1992.

摘要：從浙江省某規(guī)模豬場病死仔豬肝臟中分離到1株病原菌，通過細菌形態(tài)和培養(yǎng)特性觀察、動物攻毒試驗、生化鑒定表明該分離菌株為變形桿菌。藥敏試驗表明，該分離菌株對頭孢曲松敏感，對大多數抗菌藥物不敏感。

關鍵詞：變形桿菌；分離鑒定；藥敏試驗

中圖分類號：S852.61 文獻標識碼：A 文章編號：1007-273X（2014）10-0026-02

變形桿菌廣泛存在于環(huán)境中，是一種條件致病菌，可引起人和多種動物發(fā)病。變形桿菌屬于腸桿菌科，包括普通變形桿菌、奇異變形桿菌、莫根變形桿菌、雷極變形桿菌和無恒變形桿菌[1]。其中豬的變形桿菌病主要是由奇異變形桿菌引起的。該菌為革蘭氏陰性短桿菌，形態(tài)多樣，有時呈球形或絲狀，該菌對營養(yǎng)要求不高，生長速度較快，在固體培養(yǎng)基上呈遷徙性、擴散性生長，形成鋪滿整個平板、厚薄交替的層層波狀菌苔。近年來，我國對人和豬、雞、牛發(fā)生變形桿菌的報道逐漸增多。作為規(guī)?；i場環(huán)境中的優(yōu)勢細菌[2]，變形桿菌已成為危害我國養(yǎng)豬業(yè)的一種新的細菌。對變形桿菌進行分離鑒定，明確變形桿菌所引起的疾病在規(guī)模豬場中的流行情況，對疾病的防治具有重要意義。

2014年9月，浙江省某規(guī)模豬場的部分初生仔豬相繼發(fā)病并死亡，臨床癥狀以拉稀為主，糞便黃、綠色，稀糊狀或水樣，部分病豬關節(jié)有膿胞。曾用多種藥物進行治療，效果均不理想。經流行病學、細菌學、病理學綜合診斷，確診為仔豬變形桿菌病。現將其報道如下。

1 材料與方法

1.1 樣品的采集

病料來源于浙江某規(guī)模化豬場，無菌采取某病死仔豬的肝臟作為待檢材料。

1.2 試驗動物

20 g左右的普通級成年昆明小鼠，購自金華市藥監(jiān)所。

1.3 培養(yǎng)基

試驗所用培養(yǎng)基（普通營養(yǎng)肉湯、普通營養(yǎng)瓊脂平板、麥康凱瓊脂平板、鮮血瓊脂平板等）購自青島百博生物有限公司。

1.4 藥敏試紙及試劑

慶大霉素等22種常用抗生素藥敏試紙片，購自杭州微生物試劑有限公司；細菌微量生化反應管，購自杭州天和微生物試劑有限公司，批號20131120。

1.5 細菌的分離培養(yǎng)及形態(tài)觀察

無菌操作，用接種環(huán)挑取病死仔豬肝臟內部組織劃線接種于鮮血瓊脂平板上，于37 ℃培養(yǎng)24 h后，挑取優(yōu)勢菌落再分別接種于鮮血瓊脂平板和麥康凱瓊脂平板，37 ℃條件下培養(yǎng)24 h，觀察細菌生長情況。挑取純培養(yǎng)物進行革蘭氏染色和鏡檢。

1.6 生化鑒定

挑取純培養(yǎng)物按常規(guī)方法[3]進行生化試驗，觀察并記錄結果。

1.7 動物攻毒試驗

取分離菌接種于普通營養(yǎng)肉湯，37 ℃培養(yǎng)24 h，腹腔接種5只小白鼠，0.2 mL/只，對照組注射等量的普通營養(yǎng)肉湯，觀察其精神狀態(tài)、食欲等，記錄小白鼠的死亡時間。

1.8 藥敏試驗

用K-B紙片擴散法進行藥敏試驗[4]，用滅菌棉簽將菌液均勻涂布于培養(yǎng)基表面，至菌液被完全吸收后，將不同的藥敏紙片貼在培養(yǎng)基的適當位置。37 ℃培養(yǎng)24 h，觀察并記錄抑菌情況。

2 結果與分析

2.1 細菌的培養(yǎng)特性

分離到的細菌在普通營養(yǎng)肉湯、麥康凱瓊脂平板、鮮血瓊脂平板上均能生長。在鮮血瓊脂平板上，血瓊脂顏色變暗紅，有一股特殊臭味，細菌遷徙性生長覆蓋整個平皿，呈半透明波紋狀菌苔，無溶血現象。在麥康凱瓊脂平板上無遷徙性、擴散性生長現象，呈均勻圓形、半透明的單個無色菌落；在普通營養(yǎng)肉湯中，呈均勻混濁樣，管底可見少量沉淀。

2.2 細菌的形態(tài)特點

該分離菌革蘭氏染色呈陰性，在顯微鏡下可見粉紅色短桿菌，多形態(tài)，但較為一致。

2.3 細菌的生化特性

由表1可見，該分離菌符合變形桿菌的生化特征。

注：“+”表示阻性，“-”表示陰性。

2.4 動物攻毒試驗

腹腔注射菌液4 h后，試驗組小白鼠精神不振，活動能力下降；24 h后試驗組小白鼠死亡2只；48 h后試驗組小白鼠全部死亡。對照組小白鼠未出現任何異常。檢查死亡小白鼠，可見肛門處有稀便粘著、肝臟、心臟具細小出血點。從死亡小白鼠的肝、脾中分離到的細菌，其培養(yǎng)特性、形態(tài)特征與之前死亡仔豬肝臟分離到的細菌一致。

2.5 細菌的藥敏試驗

分離菌株對頭孢曲松最敏感，其次為多黏菌素B，對環(huán)丙沙星、氧氟沙星、氟哌酸、慶大霉素、丁胺卡那霉素、強力霉素、卡那霉素、氯霉素、林可霉素、先鋒5號、痢特靈、磺胺等藥物均不敏感。

3 小結與討論

目前，規(guī)模豬場中仔豬腹瀉很普遍，是引起仔豬死亡的一個重要原因。應對關鍵在于能夠盡快查清病原，選擇合適的藥物進行及時準確的治療。但是現在很多豬場對疾病的治療多是憑經驗自行選藥，用藥不夠規(guī)范，抗生素濫用情況非常嚴重，容易產生耐藥性，給細菌病的治療帶來困難，豬場損失嚴重。從本試驗中可以看到，分離到的變形桿菌對大多數藥物均不敏感，如果不在藥敏試驗的結果指導下合理選擇治療藥物，將會非常盲目。變形桿菌作為條件性致病菌廣泛存在于豬場環(huán)境中，當豬只抵抗力低時可以通過消化道、呼吸道等途徑傳播。該病已經成為危害養(yǎng)豬業(yè)的一種新的細菌性傳染病，變形桿菌耐藥性強，且其作為人畜共患傳染病病原，應當引起豬場的高度重視。

參考文獻：

[1] 陸承平.獸醫(yī)微生物學[M].第三版.北京：中國農業(yè)出版社，2012.

[2] 李金良，李旭廷，聶 建，等. 2008～2009年西南地區(qū)規(guī)模化豬場病原菌耐藥性流行情況調查[J].中國獸醫(yī)雜志，2010，46（11）：15-18.

[3] 姚火春.獸醫(yī)微生物實驗指導[M].第二版.北京： 中國農業(yè)出版社，2010.

[4] 韓文瑜.病原細菌檢驗技術[M].長春： 吉林科學技術出版社，1992.

摘要：從浙江省某規(guī)模豬場病死仔豬肝臟中分離到1株病原菌，通過細菌形態(tài)和培養(yǎng)特性觀察、動物攻毒試驗、生化鑒定表明該分離菌株為變形桿菌。藥敏試驗表明，該分離菌株對頭孢曲松敏感，對大多數抗菌藥物不敏感。

關鍵詞：變形桿菌；分離鑒定；藥敏試驗

中圖分類號：S852.61 文獻標識碼：A 文章編號：1007-273X（2014）10-0026-02

變形桿菌廣泛存在于環(huán)境中，是一種條件致病菌，可引起人和多種動物發(fā)病。變形桿菌屬于腸桿菌科，包括普通變形桿菌、奇異變形桿菌、莫根變形桿菌、雷極變形桿菌和無恒變形桿菌[1]。其中豬的變形桿菌病主要是由奇異變形桿菌引起的。該菌為革蘭氏陰性短桿菌，形態(tài)多樣，有時呈球形或絲狀，該菌對營養(yǎng)要求不高，生長速度較快，在固體培養(yǎng)基上呈遷徙性、擴散性生長，形成鋪滿整個平板、厚薄交替的層層波狀菌苔。近年來，我國對人和豬、雞、牛發(fā)生變形桿菌的報道逐漸增多。作為規(guī)模化豬場環(huán)境中的優(yōu)勢細菌[2]，變形桿菌已成為危害我國養(yǎng)豬業(yè)的一種新的細菌。對變形桿菌進行分離鑒定，明確變形桿菌所引起的疾病在規(guī)模豬場中的流行情況，對疾病的防治具有重要意義。

2014年9月，浙江省某規(guī)模豬場的部分初生仔豬相繼發(fā)病并死亡，臨床癥狀以拉稀為主，糞便黃、綠色，稀糊狀或水樣，部分病豬關節(jié)有膿胞。曾用多種藥物進行治療，效果均不理想。經流行病學、細菌學、病理學綜合診斷，確診為仔豬變形桿菌病。現將其報道如下。

1 材料與方法

1.1 樣品的采集

病料來源于浙江某規(guī)?；i場，無菌采取某病死仔豬的肝臟作為待檢材料。

1.2 試驗動物

20 g左右的普通級成年昆明小鼠，購自金華市藥監(jiān)所。

1.3 培養(yǎng)基

試驗所用培養(yǎng)基（普通營養(yǎng)肉湯、普通營養(yǎng)瓊脂平板、麥康凱瓊脂平板、鮮血瓊脂平板等）購自青島百博生物有限公司。

1.4 藥敏試紙及試劑

慶大霉素等22種常用抗生素藥敏試紙片，購自杭州微生物試劑有限公司；細菌微量生化反應管，購自杭州天和微生物試劑有限公司，批號20131120。

1.5 細菌的分離培養(yǎng)及形態(tài)觀察

無菌操作，用接種環(huán)挑取病死仔豬肝臟內部組織劃線接種于鮮血瓊脂平板上，于37 ℃培養(yǎng)24 h后，挑取優(yōu)勢菌落再分別接種于鮮血瓊脂平板和麥康凱瓊脂平板，37 ℃條件下培養(yǎng)24 h，觀察細菌生長情況。挑取純培養(yǎng)物進行革蘭氏染色和鏡檢。

1.6 生化鑒定

挑取純培養(yǎng)物按常規(guī)方法[3]進行生化試驗，觀察并記錄結果。

1.7 動物攻毒試驗

取分離菌接種于普通營養(yǎng)肉湯，37 ℃培養(yǎng)24 h，腹腔接種5只小白鼠，0.2 mL/只，對照組注射等量的普通營養(yǎng)肉湯，觀察其精神狀態(tài)、食欲等，記錄小白鼠的死亡時間。

1.8 藥敏試驗

用K-B紙片擴散法進行藥敏試驗[4]，用滅菌棉簽將菌液均勻涂布于培養(yǎng)基表面，至菌液被完全吸收后，將不同的藥敏紙片貼在培養(yǎng)基的適當位置。37 ℃培養(yǎng)24 h，觀察并記錄抑菌情況。

2 結果與分析

2.1 細菌的培養(yǎng)特性

分離到的細菌在普通營養(yǎng)肉湯、麥康凱瓊脂平板、鮮血瓊脂平板上均能生長。在鮮血瓊脂平板上，血瓊脂顏色變暗紅，有一股特殊臭味，細菌遷徙性生長覆蓋整個平皿，呈半透明波紋狀菌苔，無溶血現象。在麥康凱瓊脂平板上無遷徙性、擴散性生長現象，呈均勻圓形、半透明的單個無色菌落；在普通營養(yǎng)肉湯中，呈均勻混濁樣，管底可見少量沉淀。

2.2 細菌的形態(tài)特點

該分離菌革蘭氏染色呈陰性，在顯微鏡下可見粉紅色短桿菌，多形態(tài)，但較為一致。

2.3 細菌的生化特性

由表1可見，該分離菌符合變形桿菌的生化特征。

注：“+”表示阻性，“-”表示陰性。

2.4 動物攻毒試驗

腹腔注射菌液4 h后，試驗組小白鼠精神不振，活動能力下降；24 h后試驗組小白鼠死亡2只；48 h后試驗組小白鼠全部死亡。對照組小白鼠未出現任何異常。檢查死亡小白鼠，可見肛門處有稀便粘著、肝臟、心臟具細小出血點。從死亡小白鼠的肝、脾中分離到的細菌，其培養(yǎng)特性、形態(tài)特征與之前死亡仔豬肝臟分離到的細菌一致。

2.5 細菌的藥敏試驗

分離菌株對頭孢曲松最敏感，其次為多黏菌素B，對環(huán)丙沙星、氧氟沙星、氟哌酸、慶大霉素、丁胺卡那霉素、強力霉素、卡那霉素、氯霉素、林可霉素、先鋒5號、痢特靈、磺胺等藥物均不敏感。

3 小結與討論

目前，規(guī)模豬場中仔豬腹瀉很普遍，是引起仔豬死亡的一個重要原因。應對關鍵在于能夠盡快查清病原，選擇合適的藥物進行及時準確的治療。但是現在很多豬場對疾病的治療多是憑經驗自行選藥，用藥不夠規(guī)范，抗生素濫用情況非常嚴重，容易產生耐藥性，給細菌病的治療帶來困難，豬場損失嚴重。從本試驗中可以看到，分離到的變形桿菌對大多數藥物均不敏感，如果不在藥敏試驗的結果指導下合理選擇治療藥物，將會非常盲目。變形桿菌作為條件性致病菌廣泛存在于豬場環(huán)境中，當豬只抵抗力低時可以通過消化道、呼吸道等途徑傳播。該病已經成為危害養(yǎng)豬業(yè)的一種新的細菌性傳染病，變形桿菌耐藥性強，且其作為人畜共患傳染病病原，應當引起豬場的高度重視。

參考文獻：

[1] 陸承平.獸醫(yī)微生物學[M].第三版.北京：中國農業(yè)出版社，2012.

[2] 李金良，李旭廷，聶 建，等. 2008～2009年西南地區(qū)規(guī)?；i場病原菌耐藥性流行情況調查[J].中國獸醫(yī)雜志，2010，46（11）：15-18.

[3] 姚火春.獸醫(yī)微生物實驗指導[M].第二版.北京： 中國農業(yè)出版社，2010.

[4] 韓文瑜.病原細菌檢驗技術[M].長春： 吉林科學技術出版社，1992.