氟尿嘧啶和奧沙利鉑對(duì)消化道腫瘤的協(xié)同抑制作用

聶 磊，柏 帥，劉 衛(wèi)，張志國(guó)

5－氟尿嘧啶(5－FU)和奧沙利鉑(L－OHP)在消化道腫瘤的化療中應(yīng)用最為廣泛，大部分的化療方案中均有這兩種藥物。雖然消化道的胚胎來(lái)源和組織結(jié)構(gòu)相同并且大部分都是腺癌(除食管癌)，但5－FU和L－OHP對(duì)胃癌、結(jié)腸癌、直腸癌的抑制作用以及聯(lián)合用藥是否優(yōu)于單藥，各文獻(xiàn)報(bào)道相差較大［1－3］。因此，筆者收集了消化道腫瘤患者的腫瘤細(xì)胞進(jìn)行體外培養(yǎng)，采用MTT法檢測(cè)并計(jì)算各化療藥物對(duì)腫瘤細(xì)胞的抑制率，為臨床醫(yī)師選擇化療方案，實(shí)現(xiàn)個(gè)體化治療提供依據(jù)。

1 資料與方法

1．1 儀器與試劑 超凈工作臺(tái)(蘇凈集團(tuán)安泰公司);CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱(Forma Scientific);倒置顯微鏡(上海長(zhǎng)方光學(xué)儀器有限公司);MB－580多功能酶標(biāo)分析儀(深圳市匯松科技發(fā)展有限公司);壓力蒸汽滅菌器(沈陽(yáng)利港凈化設(shè)備有限公司);胎牛血清(Gibico);DMEM培養(yǎng)基(Hyclone);雙抗(Hyclone);MTT(Sigma);二甲基亞砜(天津市廣成化學(xué)試劑有限公司)。

1．2 標(biāo)本 自2011－01—2011－10，筆者所在科消化道腫瘤患者58例，未經(jīng)放化療。術(shù)中切取新鮮消化道腫瘤標(biāo)本，胃癌31例，結(jié)腸癌15例，直腸癌12例;男38例，女20例;年齡29～83歲，平均54歲。

1．3 化療藥物 奧沙利鉑(浙江海正藥業(yè)股份有限公司，批號(hào)120503)，5－FU(天津金耀氨基酸有限公司，批號(hào)1201131)。所用化療藥物均用培養(yǎng)基配成10倍血漿藥物峰濃度的溶液，具體藥物濃度為奧沙利鉑51 μg/ml，氟尿嘧啶1000 μg/ml。

1．4 標(biāo)本處理 手術(shù)室無(wú)菌操作取得癌組織，放入裝有培養(yǎng)液的培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)，超凈工作臺(tái)內(nèi)取出腫瘤組織，于盛有DMEM的平皿清洗并修剪去除非腫瘤組織，用眼科剪剪成約1 mm3碎塊，加入約2 ml 0．2%膠原酶，置于37℃培養(yǎng)箱內(nèi)進(jìn)行消化，1次/h取出吹打組織，使組織塊盡量分散，用200目篩網(wǎng)過(guò)濾，濾液1500 r/min離心10 min，棄上清用完全培養(yǎng)液重懸制成單細(xì)胞懸液，活細(xì)胞計(jì)數(shù)并調(diào)整細(xì)胞濃度約為5×105個(gè)/ml。接種細(xì)胞于 96 孔板中，每孔 180 μl，5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h。取出培養(yǎng)板，設(shè)空白對(duì)照組(培養(yǎng)液)、細(xì)胞對(duì)照組(腫瘤細(xì)胞)以及化療藥物組(腫瘤細(xì)胞+化療藥)，各組設(shè)4個(gè)復(fù)孔，試驗(yàn)組分別加入各種抗腫瘤藥物20 μl，對(duì)照組加20 μl培養(yǎng)基，將培養(yǎng)板置37 ℃，5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，24 h后，取出培養(yǎng)板，每孔加入5 mg/ml的MTT 20 μl，培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng) 6 h。棄上清后，每孔加入100 μl DMSO，使紫藍(lán)色甲瓚沉淀完全溶解，用酶標(biāo)儀在570 nm波長(zhǎng)處檢測(cè)各孔的OD值計(jì)算抑制率，抑制率(IR)=(細(xì)胞對(duì)照孔平均OD值－加藥孔平均OD值)/(細(xì)胞對(duì)照孔平均OD值－空白對(duì)照孔平均OD值)×100%。抑制率≥50%為高度敏感，30%≤抑制率＜50%為中度敏感，抑制率＜30%為耐藥。

1．5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 抑制率以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示。采用SPSS12．0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)方統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，組間計(jì)量資料比較采用t檢驗(yàn)。采用金正均法判斷兩種藥物的相互作用［4］，該分析方法的公式為:q=IR(A+B)/(IRA+IRB－IRA×IRB)。其中，IR為藥物對(duì)腫瘤細(xì)胞的抑制率，A和B分別指5－FU和LOHP，IRA和IRB分別是單用藥的抑制率，IR(A+B)為聯(lián)合用藥的抑制率。q≥1．15表示兩藥合用時(shí)產(chǎn)生協(xié)同作用;q≤0．85表示兩藥合用產(chǎn)生拮抗作用。

2 結(jié)果

5－FU和L－OHP以及兩藥聯(lián)用對(duì)腫瘤細(xì)胞的抑制率見表1。結(jié)果表明，5－FU和L－OHP聯(lián)用對(duì)三種腫瘤細(xì)胞的抑瘤作用優(yōu)于單一用藥，兩藥具有協(xié)同作用。

表1 5－FU和L－OHP體外腫瘤細(xì)胞抑制率(±s，%)

表1 5－FU和L－OHP體外腫瘤細(xì)胞抑制率(±s，%)

注:與5－FU組比較，aP"0．05;與 L－OHP組比較，bP"0．05。

腫瘤名稱n 腫瘤細(xì)胞抑制率5－FU L－OHP 5－FU+L－OHP q胃癌 31 39．8 ±13．6 14．4 ±3．4 55．1 ±12．0a，b 1．16結(jié)腸癌 15 40．7 ±15．4 13．6 ±3．1 61．25 ±16．4a，b 1．23直腸癌 12 59．6 ±14．5 45．6 ±19．4 67．2 ±19．4a，b 1．28

3 討論

化療在綜合治療消化道腫瘤中占有重要的地位，尤其在防止其復(fù)發(fā)方面作用顯著。但腫瘤是一個(gè)異質(zhì)性、多態(tài)性、分化不均勻的細(xì)胞群體，腫瘤對(duì)各種化療藥物的敏感性存在著明顯的個(gè)體差異，這些都會(huì)影響消化道腫瘤化療效果［5］。目前臨床抗腫瘤藥的應(yīng)用都是經(jīng)驗(yàn)用藥，或者參照指南用藥，存在很大的盲目性，療效也不確切，因此，為了提高療效、避免耐藥性的產(chǎn)生和減少不良反應(yīng)，化療藥物敏感性檢測(cè)已成為提高療效的重要手段。

5－FU是細(xì)胞S期特異性藥物，是一種嘧啶類似物，在細(xì)胞內(nèi)轉(zhuǎn)化成不同的細(xì)胞毒性代謝產(chǎn)物，與DNA和RNA結(jié)合，最終通過(guò)抑制DNA合成導(dǎo)致細(xì)胞周期停滯和細(xì)胞死亡。L－OHP為第3代鉑類抗腫瘤藥物，以DNA為靶作用部位，阻斷其復(fù)制和轉(zhuǎn)錄。在臨床消化道腫瘤治療藥物的選擇上，5－FU和L－OHP常作為一線用藥，或聯(lián)用或單用。MTT法簡(jiǎn)單、快速、處理樣本量大、結(jié)果與臨床化療敏感和耐藥具有高一致性高等優(yōu)點(diǎn)，自20世紀(jì)90年代以來(lái)被用于大部分臨床腫瘤細(xì)胞化療藥敏試驗(yàn)［6－8］。因此，筆者選擇了5－FU和L－OHP兩種化療藥物，采用MTT法進(jìn)行了腫瘤細(xì)胞藥物敏感性測(cè)定。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，直腸癌細(xì)胞對(duì)5－FU和L－OHP都敏感，而胃癌和結(jié)腸癌細(xì)胞對(duì)5－FU敏感，但對(duì)L－OHP不敏感。聯(lián)合用藥后三種腫瘤細(xì)胞對(duì)藥物都高度敏感，兩藥聯(lián)用具有協(xié)同作用。

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