棉纖維特異基因及其特異啟動(dòng)子的研究進(jìn)展

呂少溥， 王旭靜， 唐巧玲， 王志興

中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院生物技術(shù)研究所，北京 100081

棉花是世界上的重要經(jīng)濟(jì)作物之一，為紡織業(yè)及其相關(guān)產(chǎn)業(yè)提供主要原材料。我國(guó)是世界上最大的紡織品生產(chǎn)國(guó)和消費(fèi)國(guó)，棉花產(chǎn)業(yè)在我國(guó)的國(guó)民經(jīng)濟(jì)中占有舉足輕重的地位［1］?！笆晃濉逼陂g，農(nóng)業(yè)部對(duì)我國(guó)主產(chǎn)棉省主栽的白色棉花品種纖維的抽查結(jié)果表明：纖維長(zhǎng)度主要分布在28～30mm，屬于中絨檔次；纖維整齊度指數(shù)高在83%～85%；斷裂比強(qiáng)度處于中等偏上水平，主要分布在26～28cN／tex和29～31cN／tex；馬克隆值主要分布在4.3～4.9左右，以B1和C2為主，處于A級(jí)最佳范圍的樣品則偏少［2］。由于長(zhǎng)度在31mm以上、斷裂比強(qiáng)度大于31cN／tex，以及馬克隆值在A級(jí)最佳范圍的纖維比較缺乏，導(dǎo)致我國(guó)棉花纖維質(zhì)量只能滿足紡織工業(yè)中、低檔棉紗（32～40支紗）的紡織要求，可紡高支紗（60～80支）的原棉纖維所占比例較少［2］。

棉花產(chǎn)量和纖維質(zhì)量呈負(fù)相關(guān)關(guān)系，因此利用常規(guī)育種手段很難同時(shí)提高棉花產(chǎn)量和品質(zhì)。隨著生物技術(shù)的飛速發(fā)展，基因工程手段已經(jīng)廣泛應(yīng)用于農(nóng)作物的品種改良中。棉花的分子育種已成為國(guó)內(nèi)外棉花研究的重點(diǎn)［3］?？寺∨c棉花纖維發(fā)育相關(guān)的基因及其特異表達(dá)啟動(dòng)子可以實(shí)現(xiàn)定向改良棉花纖維品質(zhì)的目的，本文綜述了棉纖維的發(fā)育過(guò)程及相關(guān)基因與特異性啟動(dòng)子的研究進(jìn)展，以期為改良棉花纖維品質(zhì)提供研究參考。

1 棉花纖維的發(fā)育過(guò)程

棉纖維是由棉花胚珠外珠被表皮層的單細(xì)胞發(fā)育而成，其分化和發(fā)育過(guò)程可分為四個(gè)時(shí)期［4］。

1.1 纖維原始細(xì)胞分化期

棉纖維發(fā)育初期，由胚珠表皮細(xì)胞分化形成纖維原始細(xì)胞，并進(jìn)一步擴(kuò)展為球狀或半球狀突起。纖維細(xì)胞的分化時(shí)間與成熟纖維的長(zhǎng)度相關(guān)，如果在開花前3d到開花當(dāng)天分化，則纖維細(xì)胞通常形成長(zhǎng)纖維（Lint，一般長(zhǎng)度為20～30 mm）；而在開花后5～10d分化的細(xì)胞則發(fā)育為短絨（Fuzz，一般長(zhǎng)度為2～5mm）［5］。

1.2 纖維細(xì)胞伸長(zhǎng)期

棉纖維細(xì)胞的伸長(zhǎng)始于開花當(dāng)天，一般持續(xù)20d左右。在伸長(zhǎng)期，纖維細(xì)胞中部形成大液泡，液泡膨脹使細(xì)胞快速伸長(zhǎng)，并伴隨合成纖維細(xì)胞的初生壁［6］。伸長(zhǎng)期主要影響棉纖維的長(zhǎng)度［7］。

1.3 次生壁加厚期

在開花后16～19d，進(jìn)入纖維細(xì)胞次生壁增厚期，一直持續(xù)到開花后40～50d［8］，與伸長(zhǎng)期有5～10d的重疊［9］。此期間，細(xì)胞合成大量的纖維素沉積在次生壁上，使次生壁不斷增厚。次生壁加厚期與纖維細(xì)度、成熟度以及纖維強(qiáng)度相關(guān)。

1.4 成熟期

開花后45～60d進(jìn)入棉纖維細(xì)胞成熟期。成熟期間，棉鈴開裂、吐絮，纖維失水、扭曲，最終發(fā)育成熟。成熟期主要影響纖維的扭曲數(shù)［10］。

2 棉花纖維特異基因的研究

雖然對(duì)棉花纖維的分子發(fā)育過(guò)程已較為清楚，但與棉花纖維發(fā)育相關(guān)基因的研究相對(duì)滯后。隨著分子生物學(xué)的發(fā)展，采用cDNA文庫(kù)差示篩選技術(shù)、cDNA代表性差異分析技術(shù)、抑制差減雜交技術(shù)和mRNA差異顯示技術(shù)等，現(xiàn)已克隆得到數(shù)十個(gè)棉花纖維特異或優(yōu)勢(shì)表達(dá)的基因（見表1）［11～43］，近年來(lái)基因芯片技術(shù)、高通量測(cè)序技術(shù)［44］為棉花纖維特異基因的獲得提供了更為高效的手段。

雖然已經(jīng)克隆得到許多棉纖維特異或優(yōu)勢(shì)表達(dá)的基因，但是大部分基因多是在煙草或擬南芥中進(jìn)行驗(yàn)證，很少一部分是直接在棉花中進(jìn)行驗(yàn)證的，所以得到的大部分基因在棉花纖維中的具體作用尚不清楚，只能作為棉纖維品質(zhì)改良的候選基因。在棉纖維中功能研究的比較清楚的有E6、SS3、GaMYB2 等。

2.1 E6 基因

1992年，John等［11］通過(guò)cDNA文庫(kù)的差示篩選技術(shù)發(fā)現(xiàn)了E6基因。它是發(fā)現(xiàn)最早的棉纖維優(yōu)勢(shì)表達(dá)的基因，主要在棉纖維伸長(zhǎng)階段表達(dá)，在開花后5～28d都有表達(dá)。E6基因具有714bp的開放讀碼框，編碼238個(gè)氨基酸。1996年，John等［45］通過(guò)35S啟動(dòng)子連接E6的反義基因轉(zhuǎn)化棉花，發(fā)現(xiàn)E6蛋白表達(dá)下降了60%～98%，但是在纖維的發(fā)育中沒發(fā)現(xiàn)明顯的表型變化，對(duì)纖維的品質(zhì)沒有影響，說(shuō)明E6對(duì)棉纖維的發(fā)育作用不大，或者棉纖維發(fā)育過(guò)程需要的E6蛋白量極低。

2.2 SS3 基因

1997年，Ruan等［22］發(fā)現(xiàn)了編碼蔗糖合成酶的基因SS3，該基因在開花后0～35d表達(dá)，決定分配進(jìn)入纖維細(xì)胞的碳素，參與纖維素合成。2003年，Ruan等［46］構(gòu)建了棉花蔗糖合成酶反義基因載體轉(zhuǎn)化棉花，以非轉(zhuǎn)反義基因的棉花為對(duì)照，觀察不同時(shí)期棉花胚珠，發(fā)現(xiàn)相對(duì)于對(duì)照組，轉(zhuǎn)基因植株的胚珠大小不變，但是在開花0d的胚珠表面有很少的突起，還伴隨著塌陷與皺縮，開花后3d轉(zhuǎn)基因植株的的棉纖維很短。上述結(jié)果說(shuō)明，蔗糖合成酶基因在棉纖維起始和伸長(zhǎng)中發(fā)揮重要作用。

2.3 GhMYB2 基因

GhMYB2是棉纖維發(fā)育過(guò)程中優(yōu)勢(shì)表達(dá)的一個(gè)蛋白。2004年，Wang等［37］通過(guò)轉(zhuǎn)化擬南芥，證明GhMYB2基因的第一個(gè)內(nèi)含子在擬南芥的表皮毛發(fā)育過(guò)程中發(fā)揮重要作用。研究表明，該基因是表皮毛發(fā)育基因的增強(qiáng)子，而不是表皮毛基因的抑制因子。第一個(gè)內(nèi)含子中保守的MYB結(jié)構(gòu)的缺失將影響表皮毛的發(fā)育。2008年，Shangguan等［47］用過(guò)量表達(dá)和RNA干擾的方式構(gòu)建了植物表達(dá)載體轉(zhuǎn)化棉花，發(fā)現(xiàn)降低實(shí)驗(yàn)組陸地棉GhMYB2基因的表達(dá)會(huì)導(dǎo)致開花當(dāng)天纖維分化突起數(shù)量相對(duì)于對(duì)照組明顯減少，而且3-DPA的纖維伸長(zhǎng)明顯短于對(duì)照組，最終成熟后實(shí)驗(yàn)組的成熟纖維也比對(duì)照組短。棉花種子的發(fā)育也受到GhMYB2基因表達(dá)的較大影響，相對(duì)于對(duì)照組，降低GhMYB2基因表達(dá)的棉花種子變小，成熟率降低；而過(guò)量表達(dá)GhMYB2基因的實(shí)驗(yàn)組其成熟棉纖維變長(zhǎng)，種子也變大。另外，無(wú)論是降

低GhMYB2基因的表達(dá)還是過(guò)量表達(dá)GhMYB2基因都能在轉(zhuǎn)基因棉花后代中穩(wěn)定的遺傳。所以Shangguan等認(rèn)為GhMYB2基因是對(duì)棉花纖維的伸長(zhǎng)有重要調(diào)控作用，而且還會(huì)影響種子的發(fā)育。

表1 已克隆的棉花纖維特異表達(dá)基因 Table 1 Cotton fiber specific gene.

3 棉花纖維特異表達(dá)啟動(dòng)子的研究

早期，研究人員多用組成型啟動(dòng)子表達(dá)棉纖維特異基因，以研究基因功能。而隨著研究的進(jìn)一步發(fā)展，發(fā)現(xiàn)組成型啟動(dòng)子具有一定的缺陷，即組成型啟動(dòng)子可以驅(qū)動(dòng)目的基因在各個(gè)時(shí)期都表達(dá)，不僅會(huì)消耗棉花體內(nèi)大量能量物質(zhì)，而且會(huì)影響了植物的生長(zhǎng)發(fā)育［48］。為了解決這個(gè)問(wèn)題，研究人員采用染色體步移等技術(shù)克隆了棉纖維的特異啟動(dòng)子，目前已經(jīng)克隆得到數(shù)十個(gè)棉花纖維優(yōu)勢(shì)表達(dá)的啟動(dòng)子（表2）［11，14，19，30，37，49～61］。

表2 棉花纖維優(yōu)勢(shì)啟動(dòng)子 Table 2 Cotton fiber advantage promoter.

克隆得到的棉纖維啟動(dòng)子由于具有應(yīng)用前景，大多已經(jīng)申請(qǐng)專利，有一部分已應(yīng)用到棉花纖維改良中。1996年，John等［61］用E6啟動(dòng)子和FbL2A啟動(dòng)子分別連接乙酰CoA還原酶基因和PHB合酶基因，導(dǎo)入棉花提高了棉花纖維的熱絕緣性能；2002年，李文彬等［62］利用LTP12啟動(dòng)子連接表達(dá)靛藍(lán)色素BCE基因和表達(dá)紅色花色素合成酶DFR基因，轉(zhuǎn)化棉花后獲得了靛藍(lán)色和和紅色的棉纖維；2004年，張震林等［63］將E6啟動(dòng)子連接兔角蛋白基因轉(zhuǎn)入棉花，改良了棉花纖維的強(qiáng)度，與對(duì)照相比，平均提高了6.3cN／tex；2007年，Xu等［64］用LTP3啟動(dòng)子連接TYRA和ORF38黑色素合成酶基因并導(dǎo)入棉花，獲得了褐色表型的棉纖維；2010年，孟亞雄等［65］將LTP12棉纖維特異啟動(dòng)子連接表達(dá)PHB合成酶的基因?qū)朊藁?，改良了棉纖維的保暖性和抗皺性。

4 展望

隨著分子生物學(xué)技術(shù)日新月異的發(fā)展，特別是高通量技術(shù)的出現(xiàn)，為特異基因的克隆提供了極大的便利；隨著染色體步移技術(shù)的改進(jìn)，對(duì)特異基因上游啟動(dòng)子的查找提供了越來(lái)越多的辦法，這些都為用基因工程方法改進(jìn)棉纖維品質(zhì)提供了參考方案。但是，棉纖維的發(fā)育過(guò)程是一個(gè)復(fù)雜的多基因參與的過(guò)程，基因工程改良棉纖維品質(zhì)的研究存在很大的難度。第一，增加或者刪除某一個(gè)基因并不一定能對(duì)棉纖維品質(zhì)的改變?cè)斐芍卮笥绊?，如反義表達(dá)E6基因，E6蛋白表達(dá)下降了60%～98%，但對(duì)纖維發(fā)育沒有明顯影響；第二，棉花基因工程研究中，棉花的轉(zhuǎn)化效率很低，目前棉花轉(zhuǎn)化多采用農(nóng)桿菌介導(dǎo)法，由于種植棉多為異源四倍體植株，農(nóng)桿菌所攜帶的目的基因隨機(jī)整合，其轉(zhuǎn)化效率很低?？寺∶蘩w維特異基因及其啟動(dòng)子為棉纖維品質(zhì)的改良確定了一條路徑，隨著生物技術(shù)的發(fā)展以及對(duì)棉花發(fā)育的深入研究，分子育種和常規(guī)育種結(jié)合將成為以后改良棉花纖維品質(zhì)的趨勢(shì)。

［1］ 劉金海.我國(guó)棉種產(chǎn)業(yè)化現(xiàn)狀與前景展望［J］.棉花學(xué)報(bào)，2007，19（5）：411-416.

［2］ 楊偉華，唐淑榮.“十一五”期間我國(guó)生產(chǎn)領(lǐng)域棉花纖維品質(zhì)分析［J］.中國(guó)化纖，2011，8（上）：18-22.

［3］ 劉進(jìn)元，趙廣榮，李 驥.棉花纖維品質(zhì)改良的分子工程［J］.植物學(xué)報(bào)，2000，42（10）：991-995.

［4］ 徐楚年，余炳義，張 儀.棉花四個(gè)栽培種纖維發(fā)育的比較研究［J］.北京農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，1988，14（2）：113-119.

［5］ Andrawis A，Solomon M，Delmer D P.Cotton fiber annexins：a potential role in the regulation of callose synthase［J］.The Plant J.，1993，36（2）：763-772.

［6］ Seagull R.Growth mechanisms in developing cotton fiber：where is the fiber expanding ［A］.In：Nijmegen，The Netherlands：Abstract from the Sixth Cell Wall Meeting［C］.1992，62.

［7］ Delanghe E A L.Lint development［A］.In：Mauney J R，Stewart J M （eds）.Cotton Physiology［M］.Memphis，T N：Cotton Foundation，1986，325-349.

［8］ Meinert M C，Delmer D P.Changes in biochemical composition of the cell wall of the cotton fiber during development［J］.Plant Physiol.，1977，59（6）：1088-1097.

［9］ Ryser U.Cell wall biosynthesis in differentiating cotton fibers［J］.Euro.J.Cell Biol.，1985，39：236-256.

［10］ Schubert A M，Benedict C R，Berlin J D，et al..Cotton fiber development kinetics of cell elongation and secondary wall thickening［J］.Crop Sci.，1973，13（6）：704-709.

［11］ John M E，Crow L J.Gene expression in cotton（Gossypium hirsutumL.）fiber：cloning of the mRNAs［J］.Proc.Natl.Acad.Sci.USA，1992，89（13）：5769-5773.

［12］ John M E.Characterization of a cotton（Gossypium hirsutumL.）fiber mRNA（Fb-B6）［J］.Plant Physiol.，1995，107（4）：1477-1478.

［13］ Delmer D P，Pear J R，Andrawis A，et al..Genes encoding small GTP binding proteins analogous to mammalian Rac are preferentially expressed in developing cotton fibers［J］.Mol.Gen.Genet.，1995，248（1）：43-51.

［14］ Rinehart J A，Petersen M W，John M E.Tissue specific and developmental regulation of cotton gene FbL2A.Demonstration of promoter activity in transgenic plants［J］.Plant Physiol.，1996，112（3）：1331-1341.

［15］ Orford S J，Timmis J N.Abundant mRNAs specific to the developing cotton fiber［J］.Theor.Appl.Genet.，1997，94（6-7）：909-918.

［16］ Orfold S J， Carney T J，Olesnicky N S， et al..Characterization of a cotton gene expressed latein fiber cell elongation［J］.Theor.Appl.Genet.，1999，98（5）：757-764.

［17］ Orford S J，Timmis J N.Specific expression of an expansin gene during elongation of cottonfibers［J］.Biochim.Biophys.Acta，1998，1398：342-346.

［18］ Ma D P，Tan H，Si Y，et al..Differential expression of a lipid transfer proteingene in cotton fiber［J］.Biochim.Biophys.Acta，1995，1257：81-84.

［19］ Liu H C，Greech R G，Jenkins J N，et al..Cloning and promoter analysis of the cotton lipid transfer protein gene ltp3［J］.Biochim.Biophys.Acta，2000，1487（1）：106-111.

［20］ Pear J R，Kawagoe Y，Schreckengost W E，et al..Higher plants contain homologs of the bacterial celA genes encoding the catalytic subunit of cellulose synthase［J］.Proc.Natl.Acad.Sci.USA，1996，93（22）：12637-12642.

［21］ Song P，Allen R D.Identification of a cotton fiber-specific acyl carrier protein cDNA by differential display［J］.Biochim.Biophys.Acta，1997，1351：305-312.

［22］ Ruan Y L，Chourey P S，Delmer D P，et al..The differential expression of sucrose synthase in relation to diverse patterns of carbon portioning in developing cotton seed［J］.Plant.Physiol，1997，115（2）：375-385.

［23］ Kawai M，Aotsuka S，Uchimiya H.Isolation of a cotton CAPgene：homologue of adenylyl cyclase associated protein highly expressed during fiber elongation ［J］.Plant Cell Physiol.，1998，39（12）：1380-1383.

［24］ Shin H S，Brown R M.GTPase activity and biochemical characterization of a recombinant cotton fiber annexin ［J］.Plant Physiol.，1999，119（3）：925-934.

［25］ Tan H，Creech R G，Jenkins J N，et a1..Cloning and expression analysis of two cotton（Gossypium hirsutumL.）genes encoding cell wall proline-rich proteins［J］.DNA Seq.，2001，12（5-6）：367-380.

［26］ Cui X，Shin H，Song C，et al..A putative plant homolog of the yeast beta-1，3-glucan synthase subunit FKS1from cotton（Gossypium hirsutumL.）fibers［J］.Planta，2001，213（2）：223-230.

［27］ Zhao G R，Liu J Y，Du X M.Molecular cloning and charaterization of cotton cDNAs expressed in developing fiber cells［J］.Biosci.Biotechnol.Biochem.，2001，65（12）：2789-2793.

［28］ Zhao G R，Liu J Y.Isolation of a cotton RGP gene：a homolog of reversibly glycosylated polypeptide highly expressed during fiber development［J］.Biochim.Biophys.Acta，2002，1574（3）：370-374.

［29］ Li X B，Cai L，Cheng N H，et al.. Molecular characterization of the cotton GhTUB1 gene that is prefer entially expressed in fiber［J］.Plant Physiol.，2002，130（2）：666-674.

［30］ Li X B，F(xiàn)an X P，Wang X L，et al..The cotton ACTIN1 gene is functionally expressed in fibers and participates in fiber elongation［J］.Plant Cell，2005，17（3）：859-875.

［31］ Ji S J，Lu Y C，Li J，et al..Aβ-tubulin-like cDNA expressed specifically in elongating cotton fibers induces longitudinal growth of fissionyeast［J］.Biochem.Biophys.Res.Comm.，2002，296：1245-1250.

［32］ Xiao Y H，Luo M，Zheng S Y，et al..Cloning and charaeterization of polyphosphoinositide binding protein（Ghsh2）gene from cotton ［J］. Cotton Sci.，2002，14（Supl.）：66.

［33］ Zhu Y Q，Xu K X，Luo B，et al..An ATP-binding cassette transporter GhWBC1from elongating cotton fibers［J］.Plant Physiol.，2003，133（2）：580-588.

［34］ Preuss M L，Delmer D P，Liu B.The cotton kinesin-like calmodulin-binding protein associates with cortical microtubules in cotton fibers［J］.Plant Physiol.，2003，132（1）：154-160.

［35］ Ji S J，Lu Y C，F(xiàn)eng J X，et al..Isolation and analyses of genes preferentially expressed during early cotton fiber development by subtractive PDR and cDNA array ［J］.Nucl.Acids Res.，2003，31（10）：2534-2543.

［36］ Kim H J，Triplett B A.Cotton fiber germin-like protein.I.molecular cloning and gene expression［J］.Planta，2004，218（4）：516-524.

［37］ Wang S W，Wang J W，Yu N，et al..Control of plant trichome development by a cotton fiber MYB gene［J］.Plant Cell，2004，16（9）：2323-2334.

［38］ Wang H Y， Yu Y， Chen Z L， et al.. Functional characterization of Gossypium hirsutum profilin1gene（GHPEN1）in tobacco suspension cells［J］.Planta，2005，222（4）：594-603.

［39］ 孫 杰，李艷軍，李園莉，等.棉花纖維特異表達(dá)基因GhF1的分離及鑒定［J］.棉花學(xué)報(bào)，2005，17（5）：259-263.

［40］ Li X，Shi H，Wang X.Molecular characterization of cotton 14-3-3Lgene preferentially expressed during fiber elongation［J］.J.Genet.Genomics，2007，34（2）：151-159.

［41］ Liu D Q，Tu L L，Li Y J，et al..Genes encoding fasciclinlike arabinogalactan proteins are specifically expressed during cotton fiber development［J］.Plant Mol.Biol.Rep.，2008，26（2）：98-113.

［42］ 田 琴，李艷軍，孫 杰，等.棉纖維特異表達(dá)藍(lán)銅蛋白基因（GhBCP1）的克隆與鑒定［J］.中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)，2010，43（3）：612-617

［43］ Huang G Q，Gong S Y，Li X B，et al..A fasciclin-like arabinogalactan protein，GhFLA1，is involved in fiber initiation and elongation of cotton［J］.Plant Physiol.，2013，161（3）：1278-1290.

［44］ 周 華，張 新，劉騰云，等.高通量轉(zhuǎn)錄組測(cè)序的數(shù)據(jù)分析與基因發(fā)掘［J］.江西科學(xué)，2012，（5）：607-610.

［45］ John M E. Structural characterization of genescorresponding to cotton fiber mRNA，E6：reduced E6protein in transgenic plants by antisense gene［J］.Plant Mol.Biol.，1996，30（2）：297-306.

［46］ Ruan Y L，Llewellyn D J，F(xiàn)urbank R T.Suppression of sucrose synthase gene expression represses cotton fiber cell initiation，elongation，and seed development ［J］.Plant Cell，2003，15（4）：952-964.

［47］ Shangguan X X，Xu B，Yu Z X，et al..Promoter of a cotton fibre MYB gene functional in trichomes of Arabidopsis and glandular trichomes of tobacco［J］.J.Exp.Bot.，2008，59（13）：3533-3542.

［48］ 劉進(jìn)元，趙廣榮，李 驥，等.棉花纖維品質(zhì)改良的分子工程［J］.植物學(xué)報(bào)，2000，42（10）：991-995.

［49］ 李學(xué)寶，蔡 林，程寧輝，等.來(lái)自棉花的纖維特異性肌動(dòng)蛋白啟動(dòng)子的分離和鑒定［P］.新加坡，00813722，2000-08-01.

［50］ 蔡 林，李學(xué)寶，程寧輝，等.來(lái)自棉花的纖維特異性β-微管蛋白啟動(dòng)子的分離和鑒定［P］.新加坡，00813724，2000-08-01.

［51］ 于曉紅，朱 勇，清林芝，等.亞洲棉GAE6-3A上游序列的分離及其在煙草中的表達(dá)［J］.科學(xué)通報(bào)，2000，26（2）：143-147.

［52］ Kim H J，Murai N，F(xiàn)ang D D，et al..Functional analysis of Gossypium hirsutum cellulose synthase catalytic subunit 4 promoter in transgenic Arabidopsis and cotton tissues［J］.Plant Sci.，2011，180（2）：323-332.

［53］ 侯磊，劉灝，裴炎，等.一個(gè)具有棉花纖維細(xì)胞特異性的啟動(dòng)子SCFP［J］.科學(xué)通報(bào)，2008，53（14）：1650-1656.

［54］ 李學(xué)寶，黃耿青，許文亮，等.一個(gè)棉纖維特異性啟動(dòng)子GhFLA1的鑒定［P］.中國(guó)，200910273465.3，2009-12-29.

［55］ 李學(xué)寶，李登弟，王秀蘭，等.棉花纖維特異表達(dá)的水孔蛋白家族基因GhPIP2［P］.中國(guó)，200910273363.1，2009-12-23.

［56］ 李學(xué)寶，許文亮，黃耿青，等.一個(gè)棉纖維特異表達(dá)基因GhPRP5及其啟動(dòng)子［P］.中國(guó)，200910273296.3，2009-12-16.

［57］ 涂禮莉，李 陽(yáng)，張獻(xiàn)龍，等.兩個(gè)棉花纖維伸長(zhǎng)期優(yōu)勢(shì)表達(dá)的啟動(dòng)子及應(yīng)用 ［P］.中國(guó)，201010582387.8，2010-12-06.

［58］ 朱玉賢，秦詠梅，柳皋雋.棉花KCS12基因的啟動(dòng)子及其應(yīng)用［P］.中國(guó)，201010540932，2010-11-10.

［59］ 朱玉賢，秦詠梅，柳皋雋.棉花FDH基因的啟動(dòng)子及其應(yīng)用［P］.中國(guó)，201010291850，2010-09-26.

［60］ Deng F L，Tu L L，Zhang X L.GbPDF1（protodermal factor 1）is involved in cotton fiber initiation via the core cis-element HDZIP2ATATHB 2［J］.Plant Physiol.，2012，158：890-904.

［61］ John M E，Kell G.Metabolic pathway engineering in cotton biosynthesis of polydroxybutyrate in fiber cells［J］.Proc.Natl.Acad.Sci.USA，1996，93（23）：12768-12773.

［62］ 李文彬，宋 晶，孫勇如，等.bec基因棉花纖維特異性表達(dá)載體［P］.中國(guó)CN1446916，2002-03-25.

［63］ 張震林，劉正鑾，周寶良，等.轉(zhuǎn)兔角蛋白基因改良棉纖維品質(zhì)研究［J］.棉花學(xué)報(bào)，2004，16（2）：72-76.

［64］ Xu X Q，Wu M G，Zhao Q，et al..Designing and transgenic expression of melanin gene in tobacco trichome and cotton fiber［J］.Plant Biol.，2007，9（1）：41-48.

［65］ 孟亞雄，張金文，馬小樂，等.棉纖維特異啟動(dòng)子LTP12驅(qū)動(dòng)的基因phaB、phaC雙價(jià)載體構(gòu)建［J］.草業(yè)科學(xué)，2010，19（3）：170-176.