覆盆子活性部位化學(xué)成分的分離與鑒定△

劉文琴，龔嘉華，王燕霞，練波，黃麗萍，謝一輝

(江西中醫(yī)藥大學(xué)，江西 南昌 330006)

國家自然科學(xué)基金(30960496)

*

謝一輝，教授，碩士生導(dǎo)師，研究方向：中藥活性成分分析，E-mail：243619851@qq.com；

黃麗萍，教授，碩士生導(dǎo)師，研究方向：中藥藥理學(xué)，E-mail：jxnchlp@163.com

覆盆子活性部位化學(xué)成分的分離與鑒定△

劉文琴，龔嘉華，王燕霞，練波，黃麗萍*，謝一輝*

(江西中醫(yī)藥大學(xué)，江西 南昌 330006)

目的分離鑒定覆盆子活性部位的化學(xué)成分。方法利用各種色譜技術(shù)進(jìn)行分離，根據(jù)化合物的光譜數(shù)據(jù)(IR，MS，1H-NMR，13C-NMR)和物理化學(xué)方法鑒定其結(jié)構(gòu)。結(jié)果分離并鑒定了6個化合物，分別為β-谷甾醇(1)，十六烷酸(2)，棕櫚油酸(3)，β-谷甾醇棕櫚油酸酯(4)，薔薇酸(5)，山柰酚(6)。結(jié)論其中棕櫚油酸和β-谷甾醇棕櫚油酸酯為首次從覆盆子中得到。

覆盆子；化學(xué)成分

覆盆子為薔薇科植物華東覆盆子RubuschingiiHu的干燥果實，性溫，味酸、甘，歸肝、腎、膀胱經(jīng)。具有益腎固精縮尿，養(yǎng)肝明目的功能，用于遺精滑精，遺尿尿頻，陽痿早泄，目暗昏花[1]。許多抗衰老古方中均含有覆盆子[2]。近年來有關(guān)藥理研究表明覆盆子具有抗誘變[3]、提高免疫[4]、延緩衰老、改善學(xué)習(xí)記憶能力等作用。本課題組在前期進(jìn)行的藥效實驗表明，覆盆子具有較強的改善腎陽虛型衰老動物學(xué)習(xí)記憶的作用，其中三氯甲烷部位和乙酸乙酯部位的活性較強。為了進(jìn)一步探索覆盆子的活性成分，本課題從三氯甲烷部位和乙酸乙酯部位分離出8個化合物，鑒定了其中6個化合物，分別為β-谷甾醇(β-sitosterol，1)，十六烷酸(Sixteen Carbinate，2)，棕櫚油酸(Gaidic acid，3)，β-谷甾醇棕櫚油酸酯(β-Sitosterol gaidic acid ester，4)，薔薇酸(Euscaphic acid，5)，山柰酚(Kaempferol，6)。藥效實驗證實，3～6為覆盆子防治老年癡呆的活性成分。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

INOVA-500型核磁共振儀(內(nèi)標(biāo)TMS)，VGZAB-HS型質(zhì)譜儀，X4型顯微熔點測定儀(北京泰克儀器有限公司)，IR紅外，DU-650紫外可見光譜儀(美國貝克曼公司)。

1.2 試藥

硅膠(青島海洋化工廠)，聚酰胺(浙江臺州路橋四甲生化塑料廠)，SephadexLH-20凝膠(Pharmacia公司)，其他試劑均為分析純。覆盆子藥材購于樟樹，經(jīng)江西中醫(yī)藥大學(xué)劉慶華老師鑒定為懸鉤子屬植物華東覆盆子RubuschingiiHu的果實。

2 提取與分離

覆盆子藥材粉碎后，用80%乙醇滲漉，直至藥液基本無色，回收乙醇得浸膏。浸膏用水混懸，分別用三氯甲烷、乙酸乙酯、正丁醇萃取。

2.1 三氯甲烷部分的分離與精制

取三氯甲烷部分上硅膠柱，三氯甲烷-甲酸乙酯梯度洗脫。用紫外檢測器監(jiān)測流出峰，每個峰為1個流分，共收集洗脫液40個流分。濃縮各流分，用TLC比較，合并相似組分。流分18～22回收溶劑后重結(jié)晶得化合物1。流分6～17回收溶劑后，再用硅膠柱細(xì)分，三氯甲烷-甲酸乙酯梯度洗脫得化合物2。流分23～26回收溶劑后，再用硅膠柱細(xì)分，甲苯-甲酸乙酯梯度洗脫，分別得化合物3、化合物4。

2.2 乙酸乙酯部分的分離與精制

取乙酸乙酯部分上硅膠柱，分別用三氯甲烷-甲酸乙酯梯度和甲酸乙酯-丙酮梯度洗脫。用紫外檢測器監(jiān)測流出峰，每個峰為1個流分，共收集洗脫液30份。濃縮各流分，用TLC比較，合并相似組分。流分17～27回收溶劑后，再用C18柱細(xì)分，甲醇-水梯度洗脫，流分3～4回收溶劑后得化合物5，流分6～8再過SephadexLH-20凝膠柱20%甲醇-水洗脫得化合物6。

3 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1：白色針狀結(jié)晶(乙酸乙酯)，mp 136～138 ℃，Liebermann-Burchard 反應(yīng)顯綠色，Molish反應(yīng)陰性，表示有甾類化合物。將化合物與已知對照品混合，測熔點不下降，經(jīng)已知對照品共薄層，在3種溶劑系統(tǒng)下展開，Rf值一致。13C-NMR所得數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[5-6]中報道β-谷甾醇基本一致。所以化合物1鑒定為β-谷甾醇(β-sitosterol)。

化合物2：白色粉末(三氯甲烷)，mp 68～70 ℃。易溶于三氯甲烷、乙醚，微溶于甲醇。從1H-NMR可看出，1個活潑氫δ 11.95，1個甲基δ 0.84，14個亞甲基1.22和δ 2.16。13C-NMR顯示16個碳信號，δ 179.803為羧基，δ 14.143為甲基，其他碳信號依次為34.046，31.966，29.732，29.721，29.706，29.693，29.628，29.267，29.397，29.277，29.105，24.727，22.728。將其13C-NMR的數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報道的十六烷酸數(shù)據(jù)一致[7]。因此化合物2為十六烷酸(Exadecanioc acid)。

化合物3：白色無定型粉末(三氯甲烷)，mp 45～47 ℃?？扇苡谝颐?、三氯甲烷、乙酸乙酯，微溶于甲醇。從1H-NMR可以看出，3個活潑氫，1個甲基，12個亞甲基。將其13C-NMR的數(shù)據(jù)跟十六烷酸比較，除顯示有雙鍵外，其他基本一致。IR 1 660 cm-1顯示有烯烴雙鍵峰，IR 650 cm-1顯示有烯氫。將該物質(zhì)的碳譜數(shù)據(jù)與油酸(十八碳-順-9-烯酸)的碳譜數(shù)據(jù)比較，除少了2個碳信號外，其他信號皆一致。綜上所述，推斷化合物3為棕櫚油酸(Gadic acid)，為首次從覆盆子中得到。

化合物4：為白色無定型粉末(三氯甲烷)，mp 52～54 ℃。易溶于三氯甲烷、乙醚，微溶于甲醇，乙酸乙酯，不溶于丙酮。Liebermann-Burchard反應(yīng)顯陽性，Molish反應(yīng)陰性，表示有甾類化合物。IR 1 738 cm-1處顯示有酯基，推斷該物質(zhì)為酯類。碳譜數(shù)據(jù)顯示有45個碳原子，分別為179.87，34.17，29.88，29.47，29.58，29.66，29.66，32.15，130.23，129.94，32.15，29.82，29.88，29.82，24.79，14.34，140.9，121.97，72.10，56.99，56.28，50.35，46.06，42.54，42.37，40.00，37.46，36.72，36.37，34.26，32.13，29.92，29.88，29.82，28.47，26.30，24.79，24.79，22.91，21.31，19.61，19.26，19.00，14.34，12.08。該化合物碳譜信息為β-谷甾醇和棕櫚油酸碳譜信息的疊加。所以推斷化合物4為β-谷甾醇與棕櫚油酸所成的酯，即β-谷甾醇棕櫚油酸酯(β-Sitosterol gaidic acid ester)，為首次從覆盆子中得到。該化合物的結(jié)構(gòu)如圖1所示。

圖1 β-谷甾醇棕櫚油酸酯化學(xué)結(jié)構(gòu)

化合物5：為黃色粉末(甲醇)，mp 275～277 ℃?？扇苡诩状迹}酸鎂粉反應(yīng)陽性，示為黃酮類化合物：三氯化鐵-鐵氰化鉀反應(yīng)陽性，示有酚羥基存在。該物質(zhì)在甲醇溶液中的紫外最大吸收波長λmax為：209，254(帶II)，373(帶I)。根據(jù)帶I波長位置，提示可能為黃酮醇類物質(zhì)。加入診斷劑AlCl3/HCl后帶I紅移56 nm提示有3位和5位羥基。將化合物與已知對照品混合，測熔點不下降，經(jīng)已知對照品共薄層，在3種溶劑系統(tǒng)下展開，Rf值一致。1H-NMR和13C-NMR所得數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報道的山柰酚數(shù)據(jù)基本一致[8]。所以推斷化合物5為山柰酚(KaemPefrol)。

化合物6：為白色無定型粉末(甲醇)，mp 268～270 ℃?？扇苡谶拎?、三氯甲烷-甲醇、丙酮。在預(yù)制硅膠G板上點樣展開，30%硫酸加熱后顯紅色。1H-NMR、13C-NMR數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報道的薔薇酸一致[9-10]，數(shù)據(jù)如下：41.75，65.49，78.74，38.18，48.15，17.99，32.91，39.98，47.02，38.06，23.47，127.39，139.34，42.27，28.63，26.311，47.66，53.98，72.08，41.57，26.33，37.88，28.83，22.261，16.831，16.66，24.02，180.04，26.47，16.02。故推斷化合物6為薔薇酸(Euscaphic acid)。

[1] 國家藥典委員會.中國藥典[S].一部.北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010：359.

[2] 王淑玲，馮曉東，劉長安.補腎填精與延緩衰老[J].河南中醫(yī)藥學(xué)刊，1994，9(6)：1.

[3] 付潤德，鐘成民，郭偉，等．覆盆子抗誘變作用的實驗研究[J].中國全科醫(yī)學(xué)雜志，1998，1(1)：35-37.

[4] 陳坤華，方軍，宮斌，等.覆盆子提取成分促進(jìn)淋巴細(xì)胞增殖作用及環(huán)核苷酸的關(guān)系[J].上海免疫雜志，1995，15(5)：302-304.

[5] 李海濱.青藤非生物堿化學(xué)成分的研究[J].貴陽醫(yī)學(xué)院學(xué)報，2006，31(2)：154-155.

[6] 孫紅祥，葉益萍，楊可.落新婦化學(xué)成分研究[J].中國中藥雜志，2002，27(10)：751-754.

[7] 魏友霞，陳立，王軍憲.狹葉米口袋化學(xué)成分研究[J].中藥材，2007，30(8)：954-956.

[8] 中國科學(xué)院上海藥物研究所植化教研室.黃酮化合物鑒定手冊[M].北京：科學(xué)出版社，1981：639.

[9] 程科軍.覆盆子活性成分研究[D].上海：復(fù)旦大學(xué)，2008.

[10] Liang Guang-Yi，Alexander I Gray，Peter G.Waterman.Pentacyclic Triterpenes from the Fruits of Rosa sterilis[J].Jourmal of Natural Products，1989，52(1)：162-166.

IsolationandIdentificationofChemicalConstituentsfromtheActiveSiteofRubuschingiiHu

LIUWenqin，GONGJiahua，WANGYanxia，LIANBo，HUANGLiping*，XIEYihui*

(JiangxiUniversityofTraditionalChineseMedicine，Nanchang33004，China)

Objective：To isolate and identify the active chemical constituents ofRubuschingiiHu.MethodsVarious chromatographic techniques were used to isolate the chemical constituents，and their structures were identified by IR，MS，1HNMR，13CNMR，physical and chemical method.ResultsSix compouds were islolated fromR.chingiiand their structures were identified asβ-sitosterol(1)，Sixteen carbinate(2)，Gaidic acid(3)，β-Sitosterol gaidic acid ester(4)，Euscaphic acid(5)，Kaempferol(6).ConclusionCompound3and6were isolated fromR.chingiifor the first time。

Raspherry；RubuschingiiHu；Chemical constituents

10.13313/j.issn.1673-4890.2014.05.006

2013-11-02)