植物生長調(diào)節(jié)劑對川麥冬總皂苷和總多糖含量的影響研究△

林秋霞，李敏，周海玉，劉聰，任敏，趙春艷

(成都中醫(yī)藥大學(xué) 中藥材標(biāo)準(zhǔn)化教育部重點實驗室，中藥資源系統(tǒng)研究與開發(fā)利用國家重點實驗室，四川 成都 611137)

2013年度國家科技惠民計劃，四川省三臺縣涪城麥冬集成技術(shù)推廣與應(yīng)用科技惠民工程(S2013GMF000009)；中央支持地方高校發(fā)展，2011年四川省“高等教育質(zhì)量工程”建設(shè)項目，膨大素對川麥冬質(zhì)量的影響研究(196136)

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李敏，教授，研究方向：中藥品種、質(zhì)量及資源研究；Tel：13980038316，E-mail：028limin@163.com

植物生長調(diào)節(jié)劑對川麥冬總皂苷和總多糖含量的影響研究△

林秋霞，李敏*，周海玉，劉聰，任敏，趙春艷

(成都中醫(yī)藥大學(xué) 中藥材標(biāo)準(zhǔn)化教育部重點實驗室，中藥資源系統(tǒng)研究與開發(fā)利用國家重點實驗室，四川 成都 611137)

目的研究植物生長調(diào)節(jié)劑對川麥冬藥材總皂苷和總多糖含量的影響，為川麥冬規(guī)范化栽培提供理論依據(jù)。方法應(yīng)用紫外可見分光光度法對施用不同植物生長調(diào)節(jié)劑的川麥冬藥材進行總皂苷和總多糖含量的測定。結(jié)果低、中劑量膨大素對川麥冬總皂苷的積累有明顯的促進作用；多效唑單用或與膨大素合用對總皂苷的積累均表現(xiàn)出與劑量呈正相關(guān)的不同程度的抑制作用。膨大素對川麥冬總多糖的生成與積累有顯著的抑制作用；多效唑?qū)Υ湺偠嗵堑纳膳c積累有顯著的促進作用，作用與劑量呈負相關(guān)；兩藥合用時，產(chǎn)生不對稱的拮抗作用，分段施用比混合施用的拮抗作用更明顯。結(jié)論植物生長調(diào)節(jié)劑對川麥冬總皂苷和總多糖含量有一定的影響，在川麥冬生產(chǎn)過程中，應(yīng)嚴格控制植物生長調(diào)節(jié)劑的使用，以保證藥材的臨床療效。

多效唑；膨大素；川麥冬；總皂苷；總多糖

麥冬為百合科沿階草屬植物麥冬Ophiopogonjaponicus(L.f)Ker-Gawl.的干燥塊根[1]，為著名川產(chǎn)道地藥材，主要含多糖類、甾體皂苷類、高異黃酮類及多種氨基酸和維生素等化合物，具有潤肺養(yǎng)陰、益胃生津、清心除煩、美顏益膚等功效。

多效唑(PP333)是一種三唑類植物生長調(diào)節(jié)劑，能改變作物的內(nèi)源激素水平，提高植株的抗逆性[2]。膨大素(CPPU)是一種新型的植物生長調(diào)節(jié)劑，能提高產(chǎn)量，增強作物的抗病、抗逆能力[3]。調(diào)研發(fā)現(xiàn)，藥材產(chǎn)區(qū)農(nóng)戶普遍使用多效唑[4]、膨大素[5]等植物生長調(diào)節(jié)劑來提高川麥冬產(chǎn)量，增加收益。

前期實驗研究表明，植物生長調(diào)節(jié)劑能顯著提高川麥冬藥材產(chǎn)量，最高可增產(chǎn)2倍之多。該實驗在前期研究的基礎(chǔ)上，進一步對施用了不同植物生長調(diào)節(jié)劑的川麥冬化學(xué)成分[6]進行跟蹤研究，旨在為川麥冬的規(guī)范化栽培提供一定的理論依據(jù)。

1 實驗材料

1.1 儀器與試藥

UV-1000紫外可見分光光度計、KQ-500DB數(shù)控超聲波清洗器，1/1萬電子天平，電子恒溫水浴鍋；魯斯可皂苷元(中國食品藥品檢定研究院，批號：111909-201103)，D-無水葡萄糖(中國食品藥品檢定研究院，批號：110833-201205)；塊根塊莖膨大素(山東金標(biāo)生化科技有限公司，批號：201102281629)，多效唑15%可濕性粉劑(江蘇建農(nóng)農(nóng)藥化工有限公司，批號：20120804003)。

無水乙醇、正丁醇、高氯酸、硫酸等均為分析純。

1.2 材料

試驗田選在綿陽市三臺縣新德鎮(zhèn)馬脊村，前作油菜，地勢平坦，排灌方便，肥力中等，土壤為沙質(zhì)土。試驗小區(qū)面積1 m2，小區(qū)間隔離帶為30 cm。除多效唑、膨大素的施用量和施用方式不同外，其它田間管理與當(dāng)?shù)爻Ｒ?guī)方法一致。

采用隨機區(qū)組試驗設(shè)計，3次重復(fù)，分組如表 1所示。多效唑和膨大素在川麥冬果期均采用葉面噴施，2012年10月22日施藥，2013年3月6日采挖。

供試品麥冬經(jīng)成都中醫(yī)藥大學(xué)中藥鑒定教研室李敏教授鑒定為Ophiopogonjaponicus(L.f)Ker-Gawl.，是當(dāng)?shù)亻L期栽培品種。

表1 實驗材料

2 方法與結(jié)果

2.1 川麥冬總皂苷含量測定

按照2010年版《中國藥典》“麥冬”項下含量測定方法測定，標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程為Y=0.014 7X+0.019 1，r=0.999 8。樣品測定結(jié)果見表2。

2.2 川麥冬總多糖含量測定

2.2.1 對照品溶液的制備 精確稱取D-無水葡萄糖對照品適量，加水制成濃度為0.100 mg·mL-1的對照品溶液。

2.2.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備 精密吸取對照品溶液0、0.8、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0 mL分別置于25 mL 容量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻。精密吸取溶液1.0 mL置于25 mL具塞試管中，加入新鮮配制的蒽酮試劑(0.2%蒽酮的80%硫酸溶液)8.0 mL，沸水浴加熱10 min，迅速置冰水浴冷卻10 min后，以首管為空白，在波長623 nm處測定吸光度[7]。以對照品濃度X(μg·mL-1)對吸光度Y進行線性回歸，得回歸方程Y=0.060 4X-0.047 5，r=0.999 5。結(jié)果表明，葡萄糖濃度在3.17～11.88 μg·mL-1范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.2.3 總多糖測定方法 取本品細粉3.0 g，精密稱定，加入25 mL 95%乙醇，回流提取2次，每次60 min，殘渣揮干溶劑后加水25 mL回流提取3次，每次60 min。合并提取液，抽濾，濾液加入0.2%活性炭脫色，抽濾后減壓濃縮至1/10體積，加入無水乙醇至含醇量80%以上，冰箱靜置過夜，濾過，得麥冬多糖粗品，無水乙醇洗滌數(shù)次，600C烘干，即得麥冬多糖精制品[8-9]。精密稱取麥冬多糖2 mg于25 mL容量瓶中，加水溶解至刻度，精密吸取溶液1 mL置于25 mL具塞試管中，照標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備項下的方法，自“加入新鮮配制的蒽酮試劑”起，依法測定吸光度，代入線性回歸方程計算多糖含量。

2.2.4 回收率試驗 精密稱取已知麥冬多糖含量的樣品5份，分別加入與樣品含量相當(dāng)?shù)膶φ掌啡芤?，?.2.3項下方法操作，623 nm處測定吸光度，計算出平均回收率為98.3%，RSD為2.48%。

2.2.5 穩(wěn)定性試驗 取同一份供試品溶液按2.2.2項下方法操作，間隔0 min、15 min、30 min、60 min、90 min、120 min、150 min、180 min測定吸光度，結(jié)果顯示RSD為1.43%，表明供試品溶液室溫下放置3 h穩(wěn)定。

2.2.6 精密度試驗 從同一份川麥冬樣品制備溶液中量取相同量溶液5份，按2.2.2項下方法操作，623 nm處測定吸光度，代入回歸方程，計算出川麥冬多糖的平均含量為67.36%， RSD為3.22%，表明該儀器精密性良好。

2.2.7 重復(fù)性試驗 取同一份川麥冬樣品細粉，連續(xù)稱取5次，平行進行實驗，結(jié)果表明5次測得川麥冬多糖的平均含量為47.63%，RSD為4.13%，表明該方法重復(fù)性良好。

2.3 樣品含量測定

按上述含量測定方法測得川麥冬藥材樣品中的總皂苷和總多糖含量及軟件分析結(jié)果見表2。

表2 川麥冬藥材總皂苷和總多糖含量測定結(jié)果

注：同一列不同小寫字母表示差異達到5%顯著水平，不同大寫字母表示差異達到1%極顯著水平。

分析表明，川麥冬總皂苷含量均在0.25%～0.39%之間，符合2010年版《中國藥典》麥冬項下不得低于0.12%的規(guī)定。低、中劑量膨大素處理后的川麥冬總皂苷含量比對照分別增加了0.18%、0.03%；多效唑單用或與膨大素合用均不同程度上降低了川麥冬總皂苷的含量，并隨著劑量的增加，降低作用越明顯。

膨大素對川麥冬總多糖的生成與積累有顯著的抑制作用，隨著劑量的增加，作用呈逐漸增強的趨勢；多效唑?qū)Υ湺偠嗵堑纳膳c積累有顯著的促進作用，作用與劑量呈負相關(guān)。兩藥合用時，產(chǎn)生不對稱的拮抗作用，分段施用比混合施用的拮抗作用更明顯。

3 結(jié)論與討論

皂苷和多糖類成分是川麥冬主要有效成分，本實驗以川麥冬中總多糖和總皂苷的含量作為指標(biāo)對川麥冬進行質(zhì)量評價。研究表明，植物生長調(diào)節(jié)劑對川麥冬總皂苷和總多糖含量有一定的影響，膨大素能促進川麥冬總皂苷的生成與積累，而不利于總多糖的積累；多效唑能促進川麥冬總多糖的生成與積累，而不利于總皂苷的積累。

產(chǎn)地調(diào)研發(fā)現(xiàn)，長期使用膨大素、多效唑等植物生長調(diào)節(jié)劑，可能導(dǎo)致藥材畸形、空心、不耐儲藏、環(huán)境污染及土壤微生物環(huán)境改變等嚴重負效應(yīng)。此外，據(jù)報道長期食用含有植物生長調(diào)節(jié)劑的水果或藥材，會影響人們身體健康，如引起兒童提前發(fā)育、過早成熟等癥狀的出現(xiàn)[10]。使用植物生長調(diào)節(jié)劑在增加川麥冬藥材產(chǎn)量的同時，對藥材化學(xué)成分的積累量和組成比有明顯的影響，進而可能影響藥材的藥效。因此，在川麥冬栽培過程中應(yīng)嚴格控制植物生長調(diào)節(jié)劑的使用，以保證藥材的臨床療效。

[1] 國家藥典委員會.中國藥典.[S].一部.北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010：144.

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StudyoftheinfluenceofPlantGrowthRegulatorsonOphiopogonjaponicus’sTotalSaponinsandTotalPolysaccharideContent

LINQiuxia，LIMin*，ZHOUHaiyu，LIUCong，RENMin，ZHAOChunyan

(CollegeofPharmacy，MOEKeyLaboratoryofstandardizationofChineseherbalmedicine，KeyLaboratoryofMinistryforresearchanddevelopmentoftraditionalChinesemedicineresources,ChengduUniversityofTCM，Chengdu，611137)

Objective：To provide a theoretical basis for standardized cultivation forOphiopogonjaponicus，we studied the influence of plant growth regulators onO.japonicus’stotal saponins and total polysaccharide content.MethodUse the UV-visible spectrophotometric to determine the total saponins and total polysaccharide content in different plant growth regulators conducted onO.japonicus.ResultLow and medium dose of CPPU significantly promotes the accumulation of total saponins inO.japonicus；MET alone or in combination with the CPPU shows different degrees of inhibition which is positive correlated with dose.CPPU shows a significant inhibition effect onO.japonicus’stotal polysaccharides generation and accumulation；MET shows a significant promoting effect onO.japonicus’stotal polysaccharides generation and accumulation which is negative correlated with dose；the combined use of CPPU and MET results in asymmetry antagonism.The antagonism is more notable in segmented administration than in the hybrid administration.ConclusionPlant growth regulators influence the total saponins and total polysaccharides content.In theO.japonicusproduction process，the use of plant growth regulators should be strictly controlled to ensure the clinical efficacy of medicines.

MET；CPPU；Ophiopogonjaponicus；Total saponin；Total polysaccharides

10.13313/j.issn.1673-4890.2014.05.013

2013-11-27)