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    黃芪甲苷對(duì)甲基苯丙胺依賴大鼠腦組織中NO、SOD和MDA的影響

    2014-10-23 10:20:52隋璐劉坤沈薇趙春瑩李新新
    中國(guó)當(dāng)代醫(yī)藥 2014年26期
    關(guān)鍵詞:超氧化物歧化酶甲基苯丙胺丙二醛

    隋璐+劉坤+沈薇+趙春瑩+李新新

    [摘要] 目的 探討黃芪甲苷對(duì)甲基苯丙胺慢性染毒大鼠腦組織損傷的干預(yù)與保護(hù)作用。 方法 建立甲基苯丙胺(MA)慢性染毒大鼠實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型,灌胃給予不同劑量的黃芪甲苷(10 mg/kg,20 mg/kg),觀察各組大鼠腦組織海馬區(qū)和紋狀體區(qū)一氧化氮(NO)、丙二醛(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD)含量的變化及相互關(guān)系。 結(jié)果 MA慢性染毒組腦組織海馬區(qū)NO、MDA含量顯著升高,SOD活力下降,與對(duì)照組比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01);黃芪甲苷大劑量組(20 mg/kg)與MA模型組相比,腦組織海馬區(qū)NO、MDA含量降低,SOD活力升高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。 結(jié)論 黃芪甲苷能夠降低MA慢性染毒大鼠腦組織海馬區(qū)NO、MDA含量,升高SOD活力,并通過(guò)抗氧化作用對(duì)中樞神經(jīng)系統(tǒng)的損傷有一定的干預(yù)與保護(hù)作用。

    [關(guān)鍵詞] 甲基苯丙胺;黃芪甲苷;一氧化氮;超氧化物歧化酶;丙二醛

    [中圖分類號(hào)] R965 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A [文章編號(hào)] 1674-4721(2014)09(b)-0016-03

    Influence of astragaloside Ⅳon NO,SOD and MDA in methamphetamine-dependence rat brain

    SUI Lu1 LIU Kun1 SHEN Wei1 ZHAO Chun-ying1 LI Xin-xin2

    1.College of Basic Medicine,Shenyang Medical College,Shenyang 110034,China;2.Forensic of Shenyang Medical College,Shenyang 110034,China

    [Abstract] Objective To explore the intervention and protective effects of astragaloside Ⅳ on brain tissue in chronic methamphetamine dependent rat model. Methods The chronic methamphetamine dependent rat model was established by intragastric administration of astragasloside Ⅳ.NO,MDA content and SOD activity in hippocampus were detected in different groups. Results In chronic methamphephetamine group,the expression level of NO and MDA was increased,SOD activity was decreased,compared with the control group,there was statistically significance(P<0.01).In astragaloside Ⅳ high dose group(20 mg/kg),the content level of MDA was decreased and SOD activity was increased,there was statistically significance,compared with chronic methamphephetamine group(P<0.01). Conclusion Astragaloside Ⅳ can reduce the NO and MDA content in the hippocampus MA chronic infected rats,increases SOD activity.On the central nervous system damage,Astragaloside Ⅳ has a certain role in the intervention and protection by antioxidant function,and has protective effect on brain tissue.

    [Key words] Methamphetamine;Astragaloside Ⅳ;Nitric oxide;Superoxide dimutase;Malondialdehyde

    甲基苯丙胺 (methamphetamine,MA)屬于一種苯丙胺類中樞興奮劑,可以興奮中樞神經(jīng)系統(tǒng),誘導(dǎo)產(chǎn)生興奮感和欣快感。目前濫用勢(shì)頭增長(zhǎng)迅猛。MA的中毒機(jī)制、精神依賴性以及治療藥物的研發(fā)是當(dāng)前研究的熱點(diǎn)[1]。MA能造成神經(jīng)毒性,引起中樞神經(jīng)系統(tǒng)神經(jīng)化學(xué)、神經(jīng)病理和行為的改變。大量實(shí)驗(yàn)研究表明,MA染毒可引起動(dòng)物及人類5-羥色胺系統(tǒng)或中樞邊緣多巴胺系統(tǒng)的損傷[2]。黃芪甲苷可通過(guò)抗自由基及抑制細(xì)胞凋亡對(duì)腦組織有保護(hù)作用。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)建立MA慢性染毒動(dòng)物模型,觀察在黃芪甲苷干預(yù)下大鼠腦組織中一氧化氮(nitric oxide,NO)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)和丙二醛(malondialdehyde,MDA)的含量變化及相互關(guān)系,為進(jìn)一步研究MA藥物中毒機(jī)制、藥物控制及治療效果提供可靠的理論基礎(chǔ)。

    1 材料與方法

    1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

    健康Wistar大鼠(沈醫(yī)動(dòng)物質(zhì)量合格證號(hào):0008180)80只,體重190~220 g,雌雄各半,購(gòu)自沈陽(yáng)醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物研究中心,許可證號(hào)為SCXK(遼2010-0001)。

    1.2 藥品與試劑

    甲基苯丙胺(純度70%),由丹東市公安局提供;黃芪甲苷(純度98%)購(gòu)于成都康邦生物科技有限公司(批號(hào):120802);NO檢測(cè)試劑盒(批號(hào):2011 0709)、MDA檢測(cè)試劑盒(批號(hào):20111208)和SOD檢測(cè)試劑盒(批號(hào):20110818)均購(gòu)于南京建成生物工程研究所;其余試劑為國(guó)產(chǎn)分析純?cè)噭?,?yán)格按照說(shuō)明書操作。

    1.3 動(dòng)物分組、給藥與模型的建立[3]

    取Wistar大鼠40只,體重190~220 g,隨機(jī)分為4組:空白對(duì)照組(每日腹腔注射生理鹽水)、MA依賴組、黃芪甲苷小劑量組(10 mg/kg)、黃芪甲苷大劑量組(20 mg/kg)。參照文獻(xiàn)方法[2],MA依賴組采用逐日劑量遞增法腹腔注射給藥,按照0.5、1、2、8、10、15 和20 mg/kg 的劑量逐日遞增,2次/d(8:00,20:00),從第8天開始按照維持20 mg/kg 的劑量制造MA慢性染毒大鼠動(dòng)物模型。黃芪甲苷劑量組在逐日劑量遞增造模的基礎(chǔ)上,灌胃給予不同劑量的黃芪甲苷,1次/d,用以干預(yù)性治療;連續(xù)14 d用藥結(jié)束后,斷頭處死大鼠,快速開顱取腦,按文獻(xiàn)法將所取腦組織冰上分離海馬區(qū),用以制備腦組織勻漿。

    1.4 腦組織海馬區(qū)NO、MDA和SOD含量的測(cè)定

    采用購(gòu)自南京建成生物工程研究所的試劑盒,NO含量的測(cè)定采用硝酸還原酶法測(cè)定其代謝產(chǎn)物;MDA含量的測(cè)定采用硫代巴比妥法;SOD活力的測(cè)定采用亞硝酸鹽顯色法。其中大鼠腦組織中NO和MDA含量的測(cè)定,是將大鼠腦組織制成10%的勻漿;大鼠腦中SOD活力的測(cè)定,是將大鼠腦組織制成1%的勻漿。

    1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

    采用SPSS 15.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行處理,計(jì)量資料用x±s表示,采用t檢驗(yàn),以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

    2 結(jié)果

    2.1 不同組別大鼠腦組織海馬區(qū)NO含量的比較

    MA模型組與黃芪甲苷小劑量組腦組織海馬區(qū)NO含量升高,與鹽水對(duì)照組比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01);黃芪甲苷大劑量組腦組織海馬區(qū)NO含量顯著下降,與MA模型組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01),與鹽水對(duì)照組比較,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)(表1)。

    表1 不同組別大鼠腦組織海馬區(qū)NO含量的比較(x±s)

    與鹽水對(duì)照組比較,*P<0.01;與模型組比較,#P<0.01

    2.2 不同組別大鼠腦組織海馬區(qū)SOD和MDA含量的比較

    MA模型組與黃芪甲苷小劑量組腦組織海馬區(qū)MDA含量上升,SOD含量下降,與鹽水對(duì)照組比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01);黃芪甲苷大劑量組腦組織海馬區(qū)MDA含量升高較少,SOD活性下降,與鹽水對(duì)照組水平相近,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),與MA模型組比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)(表2)。

    表2 不同組別大鼠腦組織海馬區(qū)SOD和MDA的含量比較(x±s)

    與鹽水對(duì)照組比較,*P<0.01;與模型組比較,#P<0.01

    3 討論

    NO是一種氣體自由基分子,由一氧化氮合酶催化L-精氨酸生成。過(guò)量的NO具有神經(jīng)毒性,可與其它的氧化物發(fā)生反應(yīng),生成有活性的氧氮化物,從而發(fā)揮復(fù)雜的作用,其中最常見(jiàn)的就是過(guò)氧亞硝酸酯。過(guò)氧亞硝酸酯的產(chǎn)物沒(méi)有氧化作用,卻具有硝基化的功能,可進(jìn)一步引起DNA斷裂、蛋白質(zhì)脂質(zhì)氧化、核苷酸修飾和硝基化作用而導(dǎo)致細(xì)胞死亡[4]。體內(nèi)NO含量升高可直接或間接地參與組織細(xì)胞的損傷,導(dǎo)致細(xì)胞功能紊亂,使機(jī)體的免疫功能降低。

    機(jī)體內(nèi)存在著氧化和抗氧化系統(tǒng),正常時(shí)保持動(dòng)態(tài)平衡。病理?xiàng)l件下,該系統(tǒng)失衡將導(dǎo)致大量自由基在體內(nèi)堆積,自由基攻擊生物膜中的多聚不飽和脂肪酸可引發(fā)脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng),MDA是氧化反應(yīng)后的終末產(chǎn)物,可作為氧化反應(yīng)后的標(biāo)志物,MDA可反映機(jī)體脂質(zhì)過(guò)氧化的速率及強(qiáng)度,是體內(nèi)氧自由基代謝的重要指標(biāo)[5-6]。SOD是存在于生物體內(nèi)清除氧自由基的重要抗氧化酶,其功能是催化·O2-的歧化反應(yīng),即將·O2-歧化為過(guò)氧化氫和氧氣,從而降低機(jī)體的過(guò)氧化反應(yīng),對(duì)機(jī)體起到保護(hù)作用,維持機(jī)體氧化與抗氧化的平衡[7-9]。

    本研究結(jié)果顯示,與對(duì)照組比較,MA模型組大鼠腦中海馬區(qū)NO和MDA含量增加,SOD活力降低,提示給予MA后,大鼠腦組織細(xì)胞抗氧化能力減弱,脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)升高,可見(jiàn)MA對(duì)大鼠腦細(xì)胞損傷較大。黃芪甲苷可能降低了大鼠腦組織中NO和MDA的含量,提高了SOD活力,從而減輕MA對(duì)抗氧化系統(tǒng)的損害,對(duì)MA慢性染毒組大鼠腦組織有一定的保護(hù)作用。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示大劑量的黃芪甲苷(20 mg/kg)可顯著降低大鼠腦組織中NO和MDA含量,提高SOD活力,與MA模型組相比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。黃芪甲苷是黃芪的主要活性成分,近年來(lái)對(duì)黃芪甲苷藥理作用的研究顯示,其對(duì)腦組織有保護(hù)作用[10-13],周軍等[11]深入研究了黃芪甲苷對(duì)小鼠瞬間局灶性缺血所致的大腦損傷的保護(hù)作用及其機(jī)制,推測(cè)其機(jī)制可能與抗自由基及抑制細(xì)胞凋亡有關(guān)。而本實(shí)驗(yàn)也提示,超氧化物參與了MA的神經(jīng)細(xì)胞毒性作用。當(dāng)MA劑量達(dá)到一定水平時(shí),能引起大鼠腦組織的脂質(zhì)過(guò)氧化,這可能是MA引起中樞神經(jīng)系統(tǒng)損傷的重要機(jī)制,而黃芪甲苷可以下調(diào)脂質(zhì)過(guò)氧化水平,能調(diào)節(jié)因MA導(dǎo)致的腦組織過(guò)氧化平衡失調(diào),對(duì)腦組織細(xì)胞發(fā)揮保護(hù)作用,這為進(jìn)一步深入研究MA中毒機(jī)制及治療干預(yù)提供了一定的實(shí)驗(yàn)室材料和理論基礎(chǔ)。

    [參考文獻(xiàn)]

    [1] 梁若冰,趙艷明,趙秀麗.苯丙胺類精神活性物質(zhì)依賴機(jī)制的研究進(jìn)展[J].中國(guó)藥物依賴性雜志,2009,18(6):452-456.

    [2] 李新新,楊秀麗,陳曉雷,等.Caspase-3抑制藥對(duì)甲基苯丙胺依賴大鼠腦組織中NO和SOD及MDA的影響[J].醫(yī)藥導(dǎo)報(bào),2014,33(4):426-428.

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    (收稿日期:2014-06-23 本文編輯:祁海文)

    1.3 動(dòng)物分組、給藥與模型的建立[3]

    取Wistar大鼠40只,體重190~220 g,隨機(jī)分為4組:空白對(duì)照組(每日腹腔注射生理鹽水)、MA依賴組、黃芪甲苷小劑量組(10 mg/kg)、黃芪甲苷大劑量組(20 mg/kg)。參照文獻(xiàn)方法[2],MA依賴組采用逐日劑量遞增法腹腔注射給藥,按照0.5、1、2、8、10、15 和20 mg/kg 的劑量逐日遞增,2次/d(8:00,20:00),從第8天開始按照維持20 mg/kg 的劑量制造MA慢性染毒大鼠動(dòng)物模型。黃芪甲苷劑量組在逐日劑量遞增造模的基礎(chǔ)上,灌胃給予不同劑量的黃芪甲苷,1次/d,用以干預(yù)性治療;連續(xù)14 d用藥結(jié)束后,斷頭處死大鼠,快速開顱取腦,按文獻(xiàn)法將所取腦組織冰上分離海馬區(qū),用以制備腦組織勻漿。

    1.4 腦組織海馬區(qū)NO、MDA和SOD含量的測(cè)定

    采用購(gòu)自南京建成生物工程研究所的試劑盒,NO含量的測(cè)定采用硝酸還原酶法測(cè)定其代謝產(chǎn)物;MDA含量的測(cè)定采用硫代巴比妥法;SOD活力的測(cè)定采用亞硝酸鹽顯色法。其中大鼠腦組織中NO和MDA含量的測(cè)定,是將大鼠腦組織制成10%的勻漿;大鼠腦中SOD活力的測(cè)定,是將大鼠腦組織制成1%的勻漿。

    1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

    采用SPSS 15.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行處理,計(jì)量資料用x±s表示,采用t檢驗(yàn),以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

    2 結(jié)果

    2.1 不同組別大鼠腦組織海馬區(qū)NO含量的比較

    MA模型組與黃芪甲苷小劑量組腦組織海馬區(qū)NO含量升高,與鹽水對(duì)照組比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01);黃芪甲苷大劑量組腦組織海馬區(qū)NO含量顯著下降,與MA模型組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01),與鹽水對(duì)照組比較,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)(表1)。

    表1 不同組別大鼠腦組織海馬區(qū)NO含量的比較(x±s)

    與鹽水對(duì)照組比較,*P<0.01;與模型組比較,#P<0.01

    2.2 不同組別大鼠腦組織海馬區(qū)SOD和MDA含量的比較

    MA模型組與黃芪甲苷小劑量組腦組織海馬區(qū)MDA含量上升,SOD含量下降,與鹽水對(duì)照組比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01);黃芪甲苷大劑量組腦組織海馬區(qū)MDA含量升高較少,SOD活性下降,與鹽水對(duì)照組水平相近,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),與MA模型組比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)(表2)。

    表2 不同組別大鼠腦組織海馬區(qū)SOD和MDA的含量比較(x±s)

    與鹽水對(duì)照組比較,*P<0.01;與模型組比較,#P<0.01

    3 討論

    NO是一種氣體自由基分子,由一氧化氮合酶催化L-精氨酸生成。過(guò)量的NO具有神經(jīng)毒性,可與其它的氧化物發(fā)生反應(yīng),生成有活性的氧氮化物,從而發(fā)揮復(fù)雜的作用,其中最常見(jiàn)的就是過(guò)氧亞硝酸酯。過(guò)氧亞硝酸酯的產(chǎn)物沒(méi)有氧化作用,卻具有硝基化的功能,可進(jìn)一步引起DNA斷裂、蛋白質(zhì)脂質(zhì)氧化、核苷酸修飾和硝基化作用而導(dǎo)致細(xì)胞死亡[4]。體內(nèi)NO含量升高可直接或間接地參與組織細(xì)胞的損傷,導(dǎo)致細(xì)胞功能紊亂,使機(jī)體的免疫功能降低。

    機(jī)體內(nèi)存在著氧化和抗氧化系統(tǒng),正常時(shí)保持動(dòng)態(tài)平衡。病理?xiàng)l件下,該系統(tǒng)失衡將導(dǎo)致大量自由基在體內(nèi)堆積,自由基攻擊生物膜中的多聚不飽和脂肪酸可引發(fā)脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng),MDA是氧化反應(yīng)后的終末產(chǎn)物,可作為氧化反應(yīng)后的標(biāo)志物,MDA可反映機(jī)體脂質(zhì)過(guò)氧化的速率及強(qiáng)度,是體內(nèi)氧自由基代謝的重要指標(biāo)[5-6]。SOD是存在于生物體內(nèi)清除氧自由基的重要抗氧化酶,其功能是催化·O2-的歧化反應(yīng),即將·O2-歧化為過(guò)氧化氫和氧氣,從而降低機(jī)體的過(guò)氧化反應(yīng),對(duì)機(jī)體起到保護(hù)作用,維持機(jī)體氧化與抗氧化的平衡[7-9]。

    本研究結(jié)果顯示,與對(duì)照組比較,MA模型組大鼠腦中海馬區(qū)NO和MDA含量增加,SOD活力降低,提示給予MA后,大鼠腦組織細(xì)胞抗氧化能力減弱,脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)升高,可見(jiàn)MA對(duì)大鼠腦細(xì)胞損傷較大。黃芪甲苷可能降低了大鼠腦組織中NO和MDA的含量,提高了SOD活力,從而減輕MA對(duì)抗氧化系統(tǒng)的損害,對(duì)MA慢性染毒組大鼠腦組織有一定的保護(hù)作用。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示大劑量的黃芪甲苷(20 mg/kg)可顯著降低大鼠腦組織中NO和MDA含量,提高SOD活力,與MA模型組相比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。黃芪甲苷是黃芪的主要活性成分,近年來(lái)對(duì)黃芪甲苷藥理作用的研究顯示,其對(duì)腦組織有保護(hù)作用[10-13],周軍等[11]深入研究了黃芪甲苷對(duì)小鼠瞬間局灶性缺血所致的大腦損傷的保護(hù)作用及其機(jī)制,推測(cè)其機(jī)制可能與抗自由基及抑制細(xì)胞凋亡有關(guān)。而本實(shí)驗(yàn)也提示,超氧化物參與了MA的神經(jīng)細(xì)胞毒性作用。當(dāng)MA劑量達(dá)到一定水平時(shí),能引起大鼠腦組織的脂質(zhì)過(guò)氧化,這可能是MA引起中樞神經(jīng)系統(tǒng)損傷的重要機(jī)制,而黃芪甲苷可以下調(diào)脂質(zhì)過(guò)氧化水平,能調(diào)節(jié)因MA導(dǎo)致的腦組織過(guò)氧化平衡失調(diào),對(duì)腦組織細(xì)胞發(fā)揮保護(hù)作用,這為進(jìn)一步深入研究MA中毒機(jī)制及治療干預(yù)提供了一定的實(shí)驗(yàn)室材料和理論基礎(chǔ)。

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    [3] 張麗華,張東,宣志恒,等.建立大鼠甲基苯丙胺的神經(jīng)精神毒性模型[J].中國(guó)藥物依賴性雜志,2013,22(2):95-97,106.

    [4] 陳漢,鄭世賢,席芳,等.煙酰胺對(duì)甲基苯丙胺注射后大鼠腦組織中SOD、NO和MDA表達(dá)的影響[J].西北國(guó)防醫(yī)學(xué)雜志,2009,30(6):435-437.

    [5] 周峰.煙酰胺對(duì)甲基苯丙胺注射后小鼠腦組織中脂質(zhì)過(guò)氧化的影響[J].江蘇醫(yī)藥,2014,40(1):13-15.

    [6] 高偉敏,任今今,楊永濱,等.清熱止瀉方治療急性放射性腸炎的作用機(jī)制[J].醫(yī)藥導(dǎo)報(bào),2013,32(7):878-881.

    [7] 張歆薇,劉海強(qiáng),徐勝龍,等.次聲作用對(duì)大鼠血漿SOD、MDA、NO水平的影響[J].現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進(jìn)展,2012,12(18):3416-3419.

    [8] 楊健,劉曉偉,彭樹靈,等.維胃方對(duì)實(shí)驗(yàn)性胃潰瘍大鼠血清超氧化物歧化酶活力及丙二醛含量的影響[J].時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥,2011,22(8):1837-1839.

    [9] 高健,曲曉峰,劉洋,等.川芎生物堿對(duì)腦缺血-再灌注大鼠SOD、MDA、神經(jīng)功能及腦梗死容積的影響[J].中國(guó)老年學(xué)雜志,2009,29(1):22-24.

    [10] 段立軍,孫博航.黃芪甲苷的研究進(jìn)展[J].沈陽(yáng)藥科大學(xué)學(xué)報(bào),2011,28(5):410-416.

    [11] 周軍,劉軍.黃芪甲甙對(duì)大鼠局灶性腦缺血的保護(hù)作用及機(jī)制研究[J].醫(yī)學(xué)臨床研究,2008,25(5):814-816.

    [12] 李亮,陳立峰.中藥對(duì)腦缺血再灌注損傷保護(hù)作用的研究進(jìn)展[J].中南藥學(xué),2012,10(6):459-462.

    [13] 楊永飛,黃文東,朱邦豪.丹參素配伍川芎嗪對(duì)大鼠局灶性腦缺血的保護(hù)作用[J].中南藥學(xué),2013,11(7):488-491.

    (收稿日期:2014-06-23 本文編輯:祁海文)

    1.3 動(dòng)物分組、給藥與模型的建立[3]

    取Wistar大鼠40只,體重190~220 g,隨機(jī)分為4組:空白對(duì)照組(每日腹腔注射生理鹽水)、MA依賴組、黃芪甲苷小劑量組(10 mg/kg)、黃芪甲苷大劑量組(20 mg/kg)。參照文獻(xiàn)方法[2],MA依賴組采用逐日劑量遞增法腹腔注射給藥,按照0.5、1、2、8、10、15 和20 mg/kg 的劑量逐日遞增,2次/d(8:00,20:00),從第8天開始按照維持20 mg/kg 的劑量制造MA慢性染毒大鼠動(dòng)物模型。黃芪甲苷劑量組在逐日劑量遞增造模的基礎(chǔ)上,灌胃給予不同劑量的黃芪甲苷,1次/d,用以干預(yù)性治療;連續(xù)14 d用藥結(jié)束后,斷頭處死大鼠,快速開顱取腦,按文獻(xiàn)法將所取腦組織冰上分離海馬區(qū),用以制備腦組織勻漿。

    1.4 腦組織海馬區(qū)NO、MDA和SOD含量的測(cè)定

    采用購(gòu)自南京建成生物工程研究所的試劑盒,NO含量的測(cè)定采用硝酸還原酶法測(cè)定其代謝產(chǎn)物;MDA含量的測(cè)定采用硫代巴比妥法;SOD活力的測(cè)定采用亞硝酸鹽顯色法。其中大鼠腦組織中NO和MDA含量的測(cè)定,是將大鼠腦組織制成10%的勻漿;大鼠腦中SOD活力的測(cè)定,是將大鼠腦組織制成1%的勻漿。

    1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

    采用SPSS 15.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行處理,計(jì)量資料用x±s表示,采用t檢驗(yàn),以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

    2 結(jié)果

    2.1 不同組別大鼠腦組織海馬區(qū)NO含量的比較

    MA模型組與黃芪甲苷小劑量組腦組織海馬區(qū)NO含量升高,與鹽水對(duì)照組比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01);黃芪甲苷大劑量組腦組織海馬區(qū)NO含量顯著下降,與MA模型組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01),與鹽水對(duì)照組比較,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)(表1)。

    表1 不同組別大鼠腦組織海馬區(qū)NO含量的比較(x±s)

    與鹽水對(duì)照組比較,*P<0.01;與模型組比較,#P<0.01

    2.2 不同組別大鼠腦組織海馬區(qū)SOD和MDA含量的比較

    MA模型組與黃芪甲苷小劑量組腦組織海馬區(qū)MDA含量上升,SOD含量下降,與鹽水對(duì)照組比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01);黃芪甲苷大劑量組腦組織海馬區(qū)MDA含量升高較少,SOD活性下降,與鹽水對(duì)照組水平相近,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),與MA模型組比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)(表2)。

    表2 不同組別大鼠腦組織海馬區(qū)SOD和MDA的含量比較(x±s)

    與鹽水對(duì)照組比較,*P<0.01;與模型組比較,#P<0.01

    3 討論

    NO是一種氣體自由基分子,由一氧化氮合酶催化L-精氨酸生成。過(guò)量的NO具有神經(jīng)毒性,可與其它的氧化物發(fā)生反應(yīng),生成有活性的氧氮化物,從而發(fā)揮復(fù)雜的作用,其中最常見(jiàn)的就是過(guò)氧亞硝酸酯。過(guò)氧亞硝酸酯的產(chǎn)物沒(méi)有氧化作用,卻具有硝基化的功能,可進(jìn)一步引起DNA斷裂、蛋白質(zhì)脂質(zhì)氧化、核苷酸修飾和硝基化作用而導(dǎo)致細(xì)胞死亡[4]。體內(nèi)NO含量升高可直接或間接地參與組織細(xì)胞的損傷,導(dǎo)致細(xì)胞功能紊亂,使機(jī)體的免疫功能降低。

    機(jī)體內(nèi)存在著氧化和抗氧化系統(tǒng),正常時(shí)保持動(dòng)態(tài)平衡。病理?xiàng)l件下,該系統(tǒng)失衡將導(dǎo)致大量自由基在體內(nèi)堆積,自由基攻擊生物膜中的多聚不飽和脂肪酸可引發(fā)脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng),MDA是氧化反應(yīng)后的終末產(chǎn)物,可作為氧化反應(yīng)后的標(biāo)志物,MDA可反映機(jī)體脂質(zhì)過(guò)氧化的速率及強(qiáng)度,是體內(nèi)氧自由基代謝的重要指標(biāo)[5-6]。SOD是存在于生物體內(nèi)清除氧自由基的重要抗氧化酶,其功能是催化·O2-的歧化反應(yīng),即將·O2-歧化為過(guò)氧化氫和氧氣,從而降低機(jī)體的過(guò)氧化反應(yīng),對(duì)機(jī)體起到保護(hù)作用,維持機(jī)體氧化與抗氧化的平衡[7-9]。

    本研究結(jié)果顯示,與對(duì)照組比較,MA模型組大鼠腦中海馬區(qū)NO和MDA含量增加,SOD活力降低,提示給予MA后,大鼠腦組織細(xì)胞抗氧化能力減弱,脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)升高,可見(jiàn)MA對(duì)大鼠腦細(xì)胞損傷較大。黃芪甲苷可能降低了大鼠腦組織中NO和MDA的含量,提高了SOD活力,從而減輕MA對(duì)抗氧化系統(tǒng)的損害,對(duì)MA慢性染毒組大鼠腦組織有一定的保護(hù)作用。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示大劑量的黃芪甲苷(20 mg/kg)可顯著降低大鼠腦組織中NO和MDA含量,提高SOD活力,與MA模型組相比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。黃芪甲苷是黃芪的主要活性成分,近年來(lái)對(duì)黃芪甲苷藥理作用的研究顯示,其對(duì)腦組織有保護(hù)作用[10-13],周軍等[11]深入研究了黃芪甲苷對(duì)小鼠瞬間局灶性缺血所致的大腦損傷的保護(hù)作用及其機(jī)制,推測(cè)其機(jī)制可能與抗自由基及抑制細(xì)胞凋亡有關(guān)。而本實(shí)驗(yàn)也提示,超氧化物參與了MA的神經(jīng)細(xì)胞毒性作用。當(dāng)MA劑量達(dá)到一定水平時(shí),能引起大鼠腦組織的脂質(zhì)過(guò)氧化,這可能是MA引起中樞神經(jīng)系統(tǒng)損傷的重要機(jī)制,而黃芪甲苷可以下調(diào)脂質(zhì)過(guò)氧化水平,能調(diào)節(jié)因MA導(dǎo)致的腦組織過(guò)氧化平衡失調(diào),對(duì)腦組織細(xì)胞發(fā)揮保護(hù)作用,這為進(jìn)一步深入研究MA中毒機(jī)制及治療干預(yù)提供了一定的實(shí)驗(yàn)室材料和理論基礎(chǔ)。

    [參考文獻(xiàn)]

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    (收稿日期:2014-06-23 本文編輯:祁海文)

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