p38 MAPK在重癥胰腺炎炎癥反應(yīng)中的作用研究

郭海峰，李華洋，李鐵炅

（牡丹江紅旗醫(yī)院 內(nèi)一科，黑龍江 牡丹江 157011）

p38 MAPK在重癥胰腺炎炎癥反應(yīng)中的作用研究

郭海峰，李華洋，李鐵炅

（牡丹江紅旗醫(yī)院 內(nèi)一科，黑龍江 牡丹江 157011）

目的研究重癥胰腺炎患者p38 MAPK基因和蛋白的表達(dá)量，探討p38 MAPK在重癥胰腺炎炎癥反應(yīng)的作用。方法選取2012年1月～2013年12月牡丹江紅旗醫(yī)院收治的48例重癥胰腺炎患者作為實(shí)驗(yàn)組，同期在本院進(jìn)行體檢的48例健康人為對(duì)照組。采用熒光實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)2組受試者p38 MAPK的mRNA表達(dá)；Western Blot檢測(cè)p38 MAPK蛋白及P-p38 MAPK蛋白的表達(dá)。結(jié)果RT-PCR結(jié)果顯示實(shí)驗(yàn)組重癥胰腺炎患者的p38 MAPK基因的表達(dá)量明顯高于對(duì)照組48例健康體檢者的p38 MAPK基因表達(dá)量，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；Western結(jié)果表明實(shí)驗(yàn)組重癥胰腺炎患者的p38 MAPK和P-p38 MAPK蛋白表達(dá)量均明顯高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。結(jié)論重癥胰腺炎患者p38 MAPK基因和蛋白表達(dá)量均明顯升高，表明p38 MAPK在重癥胰腺炎炎癥反應(yīng)可能扮演重要角色。

p38絲裂原活化蛋白激酶；重癥胰腺炎；炎癥反應(yīng)

1.2 實(shí)驗(yàn)材料 肝素鈉購(gòu)自成都市海通藥業(yè)有限公司；胎牛血清購(gòu)自上海偉進(jìn)生物科技有限公司；Trizol試劑購(gòu)自杭州新景生物試劑開(kāi)發(fā)有限公司；p38 MAPK多克隆抗體和兔抗人P-p38 MAPK多克隆抗體均購(gòu)自上海榮圣生物科技有限公司。主要儀器為Mx3005P熒光實(shí)時(shí)定量PCR儀（卡尤迪生物科技有限公司）。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法 實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組受試者均在空腹?fàn)顟B(tài)下采集靜脈血5mL，肝素抗凝，并在采集的靜脈血液中加入含胎牛血清的 PBS溶液，2000 r／min離心 20 min后取核細(xì)胞層得PBMC。采用Trizol試劑提取分離得到的PBMC中的總mRNA，利用熒光實(shí)時(shí)定量PCR逆轉(zhuǎn)錄合成cDNA，通過(guò)計(jì)算增殖的cDNA含量測(cè)定p38 MAPK mRNA表達(dá)的量。

采用蛋白質(zhì)印跡（Western Blot）檢測(cè)p38 MAPK蛋白表達(dá)的量及P-p38 MAPK蛋白表達(dá)的量。用細(xì)胞裂解液將分離得到的PBMC充分裂解，將裂解產(chǎn)物在12000 r／min離心，收集上清液，應(yīng)用BCA法測(cè)定蛋白總量。取適量蛋白樣品，用SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳檢測(cè)蛋白表達(dá)，利用灰度比值進(jìn)行計(jì)算。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 計(jì)數(shù)資料的檢驗(yàn)采用率表示，行χ2檢驗(yàn)，正態(tài)計(jì)量資料的檢驗(yàn)采用“x±s”表示，行 t檢驗(yàn)，以 P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 2組受試者p38 MAPK基因表達(dá)對(duì)比 2組受試者p38 MAPK基因的表達(dá)結(jié)果見(jiàn)圖1。實(shí)驗(yàn)組重癥胰腺炎患者的p38 MAPK基因的表達(dá)量明顯高于對(duì)照組，2組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05，見(jiàn)表2）。

圖1 熒光實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)2組p38 MAPK基因的表達(dá)Fig.1 The determination of p38 MAPK gene by RT-PCR

2.2 2組受試者p38 MAPK蛋白表達(dá)對(duì)比 2組受試者p38 MAPK和P-p38 MAPK蛋白表達(dá)結(jié)果見(jiàn)圖2。實(shí)驗(yàn)組重癥胰腺炎患者的p38 MAPK和P-p38 MAPK蛋白的表達(dá)量均明顯高于對(duì)照組，2組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）

圖2 Western Blot檢測(cè)2組p38 MAPK和P-p38 MAPK蛋白表達(dá)的量Fig.2 The determination of p38 MAPK and P-p38 MAPK by Western Blot

3 討論

絲裂原活化蛋白激酶（MAPK）信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路能夠傳遞細(xì)胞內(nèi)外的信號(hào)，該信號(hào)通路廣泛存在于真核細(xì)胞。研究表明MAPK能夠參與細(xì)胞增殖、分化及炎癥反應(yīng)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)及調(diào)控，在重癥胰腺炎炎癥反應(yīng)起著重要的作用［10-11］。p38 MAPK是細(xì)胞內(nèi)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的重要樞紐，參與各種生理機(jī)能的調(diào)控，有研究表明p38 MAPK能夠調(diào)節(jié)炎癥因子的轉(zhuǎn)導(dǎo)及調(diào)控；在重癥胰腺炎炎癥反應(yīng)起到重要作用［12］。本研究通過(guò)比較重癥胰腺炎患者和健康體檢者p38MAPK基因和蛋白表達(dá)的量，研究p38MAPK在重癥胰腺炎炎癥反應(yīng)的作用。

本研究結(jié)果表明2組受試者性別、年齡等一般資料差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。實(shí)驗(yàn)組48例重癥胰腺炎患者p38 MAPK基因的表達(dá)量平均為0.42±0.10，明顯高于對(duì)照組的0.31±0.06，2組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），這與文獻(xiàn)報(bào)道的重癥胰腺炎患者的p38 MAPK基因表達(dá)升高結(jié)果相符［13］；實(shí)驗(yàn)組48例重癥胰腺炎患者p38 MAPK蛋白的表達(dá)量平均為0.59±0.15，明顯高于對(duì)照組的0.44±0.11，2組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；實(shí)驗(yàn)組48例重癥胰腺炎患者P-p38 MAPK蛋白的表達(dá)量平均為0.48±0.12，明顯高于對(duì)照組的0.11±0.03，2組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），這與文獻(xiàn)報(bào)道重癥胰腺炎大鼠模型p38 MAPK蛋白及磷酸化P-p38 MAPK蛋白表達(dá)量升高等結(jié)果相符［14-15］。以上結(jié)果表明，p38 MAPK在重癥胰腺炎炎癥反應(yīng)中起到重要作用。重癥胰腺炎患者的p38 MAPK基因表達(dá)量、p38 MAPK蛋白表達(dá)量以及磷酸化P-p38 MAPK蛋白的表達(dá)量較健康人明顯升高，因此抑制p38 MAPK的活性，至少能夠在一定程度上抑制不斷放大的胰腺炎炎癥反應(yīng)，減少促炎因子的釋放，是早期發(fā)現(xiàn)和控制胰腺炎的重要途徑。

綜上所述，重癥胰腺炎患者p38 MAPK基因和蛋白的表達(dá)量均明顯升高，表明p38 MAPK在重癥胰腺炎炎癥反應(yīng)可能起重要作用。

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（編校：吳茜）

Effects of p38 MAPK in inflammation reaction of severe acute pancreatitis

GUO Hai-feng，LIHua-yang，LITie-ling
（First Department of Medical，Mudanjiang Red Flag Hospital，Mudanjiang 157011，China）

ObjectiveTo investigate the expression of p38 MAPK gene and p38 MAPK protein，and explore the effect of p38 MAPK in inflammation reaction of severe acute pancreatitis.Methods48 cases with severe acute pancreatitis were chosen as research group，and another 48 healthy cases as control group.The expression of p38 MAPK gene were investigated by RT-PCR，and the expression of p38 MAPK and P-p38 MAPK protein were investigated by western blot.ResultsThe expression of p38 MAPKmRNA，p38 MAPK protein and P-p38 MAPK protein in research group were higher than that in control group，the differenceswere all statistically significant（P＜0.05）.ConclusionThe expression of p38 MAPK gene and p38 MAPK protein were significantly increased in patients with severe acute pancreatitis，which showed that p38 MAPK played an important role in inflammation reaction.

p38 MAPK；severe acute pancreatitis；inflammation reaction

R446.1

A

1005－1678（2014）03－0019－03

臨床重癥胰腺炎具有發(fā)病迅速，病情急等特點(diǎn)，且重癥胰腺炎早期合并有肺水腫等，表現(xiàn)為急性肺損傷［1-4］。其主要原因?yàn)榧毙砸认傺讜r(shí)炎癥介質(zhì)和炎癥反應(yīng)相關(guān)的細(xì)胞因子過(guò)量釋放，損壞了肺組織毛細(xì)血管的屏障，從而引起全身炎癥反應(yīng)［5-6］。p38絲裂原活化蛋白激酶（p38 mitogen-activated protein kinase，p38 MAPK）是重癥胰腺炎炎癥反應(yīng)時(shí)相關(guān)炎癥介質(zhì)和細(xì)胞因子信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的主要通路，近年來(lái)在臨床上受到廣泛關(guān)注［7-9］。本研究通過(guò)對(duì)比重癥胰腺炎患者和健康體檢者之間的p-38MAPK基因和相關(guān)蛋白的表達(dá)量，探索p38MAPK在重癥胰腺炎炎癥反應(yīng)的作用。

1 材料與方法

1.1 一般資料 選取2012年1月～2013年12月間牡丹江紅旗醫(yī)院收治的重癥胰腺炎患者48例，年齡26～55歲，平均（42.1±10.1）歲，其中男性患者26例，女性患者22例；選取同期在本院進(jìn)行體檢的健康人48例，年齡25～55歲，平均（41.8±10.2）歲，其中男性25例，女性23例。2組受試者均不合并慢性疾病，在性別、年齡等一般資料上比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。所有受試者均簽署知情同意書(shū)配合實(shí)驗(yàn)。本實(shí)驗(yàn)得到醫(yī)院倫理委員批準(zhǔn)。

黑龍江省自然科學(xué)基金項(xiàng)目（D2007-103）

郭海峰，男，博士，副主任醫(yī)師，研究方向：重癥胰腺炎，E-mail：13555006398＠163.com。