薄荷藥材的提取與含量測定

胡春蘭++++++耿榕徽++++++楊冬麗+++++王春民++++++張東閣++++++張歡++++裴有志

[摘要] 目的 探討建立薄荷藥材的提取和含量測定方法。 方法 以薄荷腦為指標(biāo)成分，采用DM-FFAP彈性石英毛細(xì)管柱，初始柱溫為120℃，以2℃/min升溫至140℃，然后以15℃/min升溫至220℃，保持5 min。比較索氏提取、加熱回流、超聲提取法的差異，并優(yōu)選最佳提取方法。 結(jié)果 最佳提取工藝：加10倍量無水乙醇溶液85℃回流提取1 h。薄荷腦在34.034~343.04 μg/ml濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，平均回收率為99.00%，RSD=1.87%（n=6）。 結(jié)論 本文所建立的提取和含量測定方法快速簡便、結(jié)果可靠，可為薄荷藥材質(zhì)量控制提供科學(xué)依據(jù)。

[關(guān)鍵詞] 提??；含量測定；薄荷腦；薄荷

[中圖分類號] R284.1[文獻(xiàn)標(biāo)識碼] A[文章編號] 1674-4721（2014）06（b）-0008-04

The extraction and content determination on Mentha hsplocalyx Briq

HU Chun-lan1,2 GENG Rong-hui1,2 YANG Dong-li2,3 WANG Chun-min2,3▲ ZHANG Dong-ge2 ZHANG Huan2PEI You-zhi2

1.Institute of Traditional Chinese Medicine,Chengde Medical University,Chengde 067000,China;2Jingfukang Pharmaceutical Group,Chengde City in Hebei Province,Chengde 067000,China;3.The New Excipients of Traditional Chinese Medicine Engineering Research Center of Hebei Province,Chengde 067000,China

[Abstract] Objective To explore the methods for extraction and content determination on Mentha haplocalyx Briq. Methods Menthol was as the index components.DM-FFAP chromatographic column was applied,with initial temperature set at 120℃,then heated up to 140℃ at the speed of 2℃/min,then heated up to 220℃ at the speed of 15℃/min,then maintained the temperature at 220℃ for 5 minutes.The optimal extraction method was selected based on comparison of Soxhlet extraction,heat reflux extraction and ultrasonic extraction. Results The study identified the optimal extraction process: adding 10 times amount of anhydrous ethanol solution then heat reflux extraction under 85℃ water bath for 1 hour.Menthol had good linear relation at the concentration of 34.034-343.04 μg/ml,with average recovery rate of99.00%，RSD=1.87% (n=6). Conclusion The extraction and content determination methods developed in the study are quick,simply,conveninent and reliable,providing scientific basis for quality control of Mentha haplocalyx Briq.

[Key words] Extraction;Content determination;Menthol;Mentha haplocalyx Briq

薄荷為唇形科植物薄荷（Mentha haplocalyx Briq）的干燥地上部分[1]，其藥用歷史悠久，廣泛應(yīng)用于食品、香料、化妝品、煙草工業(yè)等。研究報(bào)道，薄荷中含有薄荷腦、薄荷酮、檸檬烯等揮發(fā)性成分，還有黃酮類、有機(jī)酸、氨基酸等其他成分[2-6]。薄荷腦應(yīng)用于皮膚或黏膜表面時(shí)主要有清涼作用，促滲透作用，抗刺激作用，止癢作用；薄荷醇可作用于口腔和鼻腔黏膜、呼吸系統(tǒng)、胃腸道、膀胱或中樞神經(jīng)系統(tǒng)[7-8]?！吨袊幍洹?005年版一部中，僅收載了以揮發(fā)油總量為指標(biāo)對其含量進(jìn)行控制，缺乏代表性成分薄荷腦的含量測定項(xiàng)。很多文獻(xiàn)通過提取薄荷藥材中揮發(fā)油，再檢測揮發(fā)油中的薄荷腦[9-15]，本研究采用加熱回流法直接提取薄荷藥材中的薄荷腦，并采用氣相色譜法對薄荷腦的含量進(jìn)行測定，以期為薄荷藥材的進(jìn)一步開發(fā)提供科學(xué)依據(jù)。

1 儀器與材料

Agilent7890A氣相色譜儀。薄荷腦對照品（批號：110728-200506，供含量測定用，中國生物制品檢定所），薄荷藥材由頸復(fù)康藥業(yè)集團(tuán)有限公司提供（批號：Y444-110901-1），其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱：DM-FFAP彈性石英毛細(xì)管柱（30 m×0.25 mm×0.25 μm）；FID檢測器；載氣：N2；流速：1 ml/min；進(jìn)樣口和檢測器溫度：250℃；柱溫：初始溫度120℃，然后以2℃/min持續(xù)升溫至140℃，再以15℃/min持續(xù)升溫至220℃，保持5 min；進(jìn)樣量：1 μl；分流比：10∶1。

2.2 對照品溶液的制備

取薄荷腦對照品約35 mg，精密稱定，加無水乙醇定容至10 ml，搖勻，制成濃度為3.371 mg/ml的對照品溶液，備用。

2.3 提取條件的建立

2.3.1 提取方法的考察

2.3.1.1 索式提取法取薄荷藥材粉末（過二號篩）8 g，精密稱定，置于索氏提取器中，于圓底燒瓶中精密加入100 ml正己烷，稱重，85℃回流提取2 h，冷卻，稱重，補(bǔ)足減失重量，微孔濾膜過濾，取續(xù)濾液進(jìn)樣。

2.3.1.2 加熱回流提取法取薄荷藥材粉末（過二號篩）4 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入50 ml正己烷，85℃回流提取2 h，冷卻，稱重，補(bǔ)足減失重量，微孔濾膜過濾，取續(xù)濾液進(jìn)樣。

2.3.1.3 超聲提取法取薄荷藥材粉末（過二號篩）4 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入正己烷50 ml，稱重，冰水浴超聲（280 kW，50 kHz），提取30 min，冷卻，稱重，補(bǔ)足減失的重量，微孔濾膜過濾，取續(xù)濾液進(jìn)樣。

3種方法比較，結(jié)果見表1，表明加熱回流提取效率最高。

表 1 不同提取方法薄荷腦的含量（n=3）

2.3.2 提取溶劑的考察

取薄荷藥材粉末（過二號篩）4 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，分別精密加入三氯甲烷、正己烷、無水乙醇50 ml，稱重，85℃回流2 h，冷卻，稱重，補(bǔ)足減失重量，微孔濾膜過濾，取續(xù)濾液進(jìn)樣。結(jié)果見表2，表明無水乙醇提取效率最高。

表 2 不同提取溶劑薄荷腦的含量（n=3）

2.3.3 提取時(shí)間的考察

取薄荷藥材粉末（過二號篩）4 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，共3份，分別精密加入無水乙醇50 ml，稱重，于85℃水浴鍋中，提取時(shí)間分別為1、2、3 h，冷卻，稱重，補(bǔ)足減失重量，微孔濾膜過濾，取續(xù)濾液進(jìn)樣。結(jié)果見表3，表明1 h已基本提取完全。

表 3 不同提取時(shí)間薄荷腦的含量（n=3）

2.3.4 提取溫度的考察

取薄荷藥材粉末（過二號篩）4 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入無水乙醇50 ml，共3份，稱重，分別于85、90、95℃水浴鍋中，回流提取1 h，冷卻，稱重，補(bǔ)足減失重量，微孔濾膜過濾，取續(xù)濾液進(jìn)樣。結(jié)果見表4，表明85℃的水浴溫度足以提取充分。

表 4 不同提取溫度薄荷腦的含量（n=3）

2.3.5 提取溶劑用量的考察

取薄荷藥材粉末（過二號篩）4 g，精密稱定，共3份，分別精密加入40、50、60 ml的無水乙醇，稱重，回流提取1 h，冷卻，稱重，補(bǔ)足減失重量，微孔濾膜過濾，取續(xù)濾液進(jìn)樣。結(jié)果見表5，表明不同提取劑量對薄荷藥材中薄荷腦的提取效率影響不大。

表5 不同提取溶劑用量薄荷腦的含量（n=3）

綜上所述，通過單因素循環(huán)法對提取方法、提取溶劑、提取時(shí)間、提取溫度及提取溶劑用量的考察，確定最佳提取工藝為加10倍的無水乙醇溶液85℃加熱回流提取1 h。

2.4 含量測定方法的建立

2.4.1 供試品溶液的制備

取薄荷藥材粉末（過二號篩）4 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入40 ml無水乙醇溶劑，稱重，85℃加熱回流提取1 h，冷卻，稱重，補(bǔ)足減失重量，微孔濾膜過濾，取續(xù)濾液進(jìn)樣。

2.4.2 線性范圍

分別精密量取上述薄荷腦對照品溶液0.1、0.15、0.2、0.5、0.75、1 ml，于5 ml容量瓶中，無水乙醇定容，配置成6個(gè)不同濃度的對照品溶液，按本文色譜條件測定。以濃度（mg/ml）為橫坐標(biāo)，對照品峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線得到回歸方程：Y=1.0393X+0.0082，r=0.9999（n=6）。

2.4.3 精密度試驗(yàn)

取同一對照品溶液，連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄薄荷腦的峰面積，RSD為0.97%。

2.4.4 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取供試品溶液，分別于0、2、4、6、24 h測定，記錄薄荷腦的峰面積，RSD=0.77%，結(jié)果表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.4.5 回收率試驗(yàn)

采用加樣回收法。取薄荷藥材粉末（過二號篩）2 g，精密稱定，分別精密加入對照品溶液2.6 ml，共6份。精密加入無水乙醇40 ml，稱重85℃加熱回流提取1 h，冷卻，稱重，補(bǔ)足減失重量，微孔濾膜過濾，取續(xù)濾液進(jìn)樣。按上述色譜條件測定，平均回收率為99.00%，RSD=1.83%，結(jié)果見表6。

表6 薄荷腦含量測定的回收率結(jié)果（n=6）

2.4.6 藥材的測定

取承德市不同藥房的薄荷藥材粉末（過二號篩）4 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入40 ml無水乙醇溶液，稱重，85℃加熱回流提取1 h，冷卻，稱重，補(bǔ)足減失重量，微孔濾膜過濾，取續(xù)濾液進(jìn)樣。結(jié)果見表7、圖1。

表7 不同藥房藥材中薄荷腦的含量（n=6）

2.4.7 提取方法的比較

用上述最佳提取方法和水蒸氣蒸餾法（2010年版《中國藥典》一部）提取揮發(fā)油，比較兩者中薄荷腦含量大小。結(jié)果見表8，表明加熱回流法能提取出比傳統(tǒng)方法更多的薄荷腦。

表8 不同提取方法薄荷腦的含量（n=2）

3 討論

本試驗(yàn)用三氯甲烷、正己烷、無水乙醇溶劑提取，無水乙醇提取效率最高，而且無水乙醇價(jià)格便宜，無毒，三氯甲烷、正己烷有一定毒性，但是無水乙醇提取出大量的葉綠素，可能會污染柱子，葉綠素的去除方法有待研究。

通過對承德市6個(gè)不同藥房的薄荷藥材中薄荷腦含量測定，結(jié)果表明，不同藥材中薄荷腦的含量差別很大，其中三家藥房的藥材中沒有薄荷腦，可能藥材質(zhì)量不同，也可能是藥材存放不當(dāng)導(dǎo)致含量損失?！吨袊幍洹?010版一部中只對薄荷中揮發(fā)油含量進(jìn)行了限定，所以建立薄荷藥材中薄荷腦的含量測定方法對評價(jià)藥材質(zhì)量以及藥材的使用有重大意義。

經(jīng)典的水蒸氣蒸餾法往往由于高溫可能造成部分成分損失，或改變其組分，使薄荷腦的提取率相對降低。本文采用加熱回流法直接從薄荷藥材中提取薄荷腦，使用溶劑量和藥材量減少，溫度低，損失量少，提取率相對提高。

本試驗(yàn)提取方法不能全部提取薄荷藥材的薄荷腦，提取出的薄荷腦也不一定全是薄荷藥材中原有的，可能是提取過程中轉(zhuǎn)化來的，薄荷腦也有可能在提取過程中轉(zhuǎn)化成了其他成分，具體情況有待研究。

[參考文獻(xiàn)]

[1]國家藥典委員會.中國藥典（一部）[M].北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010.

[2]梁呈元，李維林，張涵慶，等.薄荷化學(xué)成分及其藥理作用研究進(jìn)展[J].中國野生植物資源，2003，22（3）：9-10.

[3]劉玉萍，蘇旭.青藏高原野薄荷揮發(fā)油成分的氣相色譜-質(zhì)譜分析[J].江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué)，2012，40（1）：256-258.

[4]祝祎瑋，懷悅，何翠翠.吳藥薄荷揮發(fā)油成分的GC-MS分析與薄荷醇含量測定[J].南京中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2011， 27（1）：73-76.

[5]徐玉婷.湖北栽培薄荷揮發(fā)油化學(xué)成分氣相色譜-質(zhì)譜分析[J].湖北中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2011，13（1）：26-29.

[6]陳在敏.薄荷素油特征圖譜的研究及多組分含量測定[J].藥物分析雜志，2011，31（10）：1957-1960.

[7]程闊菊，王暉，陳墾.薄荷醇的安全性研究進(jìn)展[J].遼寧中醫(yī)雜志，2010，37（2）：377-380.

[8]王二豪，趙怡，郭延壘，等.氣相色譜法快速測定含薄荷產(chǎn)品中薄荷腦的含量[J].食品科技，2013，38（1）：318-321.

[9]王成港，王春龍，劉衡，等.氣相色譜法測定薄荷油中薄荷腦的含量[J].中草藥，2004，35（11）：1252-1253.

[10]江周虹，高向波，王玉梅.GC-MS法測定薄荷油中薄荷腦、L-薄荷酮和胡薄荷酮的含量[J].中藥材，2009，32（6）：906-908.

[11]蘇越，王呈仲，郭寅龍.基于準(zhǔn)確質(zhì)量測定和保留指數(shù)的GC-MS分析薄荷揮發(fā)性成分[J].化學(xué)學(xué)報(bào)，2009，67（6）：546-554.

[12]劉東輝，黃月純，張子龍，等.薄荷飲片揮發(fā)油氣相色譜指紋圖譜研究[J].中國藥業(yè)，2011，20（4）：28-30.

[13]謝治森.薄荷飲片揮發(fā)油氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用分析[J].海峽藥學(xué)，2010，22（12）：82-83.

[14]魏興國，董巖，崔慶新，等.野生薄荷揮發(fā)油化學(xué)成分的GC-MS分析[J].煙臺師范學(xué)院學(xué)報(bào)（自然科學(xué)版），2003， 19（2）：116-118.

[15]顏永剛，郭曉恒，鄧翀.云南產(chǎn)野生和栽培薄荷中揮發(fā)油的GC-MS比較分析[J].中草藥，2011，42（6）：1090-1092.

（收稿日期：2014-03-26本文編輯：郭靜娟）

3種方法比較，結(jié)果見表1，表明加熱回流提取效率最高。

表 1 不同提取方法薄荷腦的含量（n=3）

2.3.2 提取溶劑的考察

取薄荷藥材粉末（過二號篩）4 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，分別精密加入三氯甲烷、正己烷、無水乙醇50 ml，稱重，85℃回流2 h，冷卻，稱重，補(bǔ)足減失重量，微孔濾膜過濾，取續(xù)濾液進(jìn)樣。結(jié)果見表2，表明無水乙醇提取效率最高。

表 2 不同提取溶劑薄荷腦的含量（n=3）

2.3.3 提取時(shí)間的考察

取薄荷藥材粉末（過二號篩）4 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，共3份，分別精密加入無水乙醇50 ml，稱重，于85℃水浴鍋中，提取時(shí)間分別為1、2、3 h，冷卻，稱重，補(bǔ)足減失重量，微孔濾膜過濾，取續(xù)濾液進(jìn)樣。結(jié)果見表3，表明1 h已基本提取完全。

表 3 不同提取時(shí)間薄荷腦的含量（n=3）

2.3.4 提取溫度的考察

取薄荷藥材粉末（過二號篩）4 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入無水乙醇50 ml，共3份，稱重，分別于85、90、95℃水浴鍋中，回流提取1 h，冷卻，稱重，補(bǔ)足減失重量，微孔濾膜過濾，取續(xù)濾液進(jìn)樣。結(jié)果見表4，表明85℃的水浴溫度足以提取充分。

表 4 不同提取溫度薄荷腦的含量（n=3）

2.3.5 提取溶劑用量的考察

取薄荷藥材粉末（過二號篩）4 g，精密稱定，共3份，分別精密加入40、50、60 ml的無水乙醇，稱重，回流提取1 h，冷卻，稱重，補(bǔ)足減失重量，微孔濾膜過濾，取續(xù)濾液進(jìn)樣。結(jié)果見表5，表明不同提取劑量對薄荷藥材中薄荷腦的提取效率影響不大。

表5 不同提取溶劑用量薄荷腦的含量（n=3）

綜上所述，通過單因素循環(huán)法對提取方法、提取溶劑、提取時(shí)間、提取溫度及提取溶劑用量的考察，確定最佳提取工藝為加10倍的無水乙醇溶液85℃加熱回流提取1 h。

2.4 含量測定方法的建立

2.4.1 供試品溶液的制備

取薄荷藥材粉末（過二號篩）4 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入40 ml無水乙醇溶劑，稱重，85℃加熱回流提取1 h，冷卻，稱重，補(bǔ)足減失重量，微孔濾膜過濾，取續(xù)濾液進(jìn)樣。

2.4.2 線性范圍

分別精密量取上述薄荷腦對照品溶液0.1、0.15、0.2、0.5、0.75、1 ml，于5 ml容量瓶中，無水乙醇定容，配置成6個(gè)不同濃度的對照品溶液，按本文色譜條件測定。以濃度（mg/ml）為橫坐標(biāo)，對照品峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線得到回歸方程：Y=1.0393X+0.0082，r=0.9999（n=6）。

2.4.3 精密度試驗(yàn)

取同一對照品溶液，連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄薄荷腦的峰面積，RSD為0.97%。

2.4.4 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取供試品溶液，分別于0、2、4、6、24 h測定，記錄薄荷腦的峰面積，RSD=0.77%，結(jié)果表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.4.5 回收率試驗(yàn)

采用加樣回收法。取薄荷藥材粉末（過二號篩）2 g，精密稱定，分別精密加入對照品溶液2.6 ml，共6份。精密加入無水乙醇40 ml，稱重85℃加熱回流提取1 h，冷卻，稱重，補(bǔ)足減失重量，微孔濾膜過濾，取續(xù)濾液進(jìn)樣。按上述色譜條件測定，平均回收率為99.00%，RSD=1.83%，結(jié)果見表6。

表6 薄荷腦含量測定的回收率結(jié)果（n=6）

2.4.6 藥材的測定

取承德市不同藥房的薄荷藥材粉末（過二號篩）4 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入40 ml無水乙醇溶液，稱重，85℃加熱回流提取1 h，冷卻，稱重，補(bǔ)足減失重量，微孔濾膜過濾，取續(xù)濾液進(jìn)樣。結(jié)果見表7、圖1。

表7 不同藥房藥材中薄荷腦的含量（n=6）

2.4.7 提取方法的比較

用上述最佳提取方法和水蒸氣蒸餾法（2010年版《中國藥典》一部）提取揮發(fā)油，比較兩者中薄荷腦含量大小。結(jié)果見表8，表明加熱回流法能提取出比傳統(tǒng)方法更多的薄荷腦。

表8 不同提取方法薄荷腦的含量（n=2）

3 討論

本試驗(yàn)用三氯甲烷、正己烷、無水乙醇溶劑提取，無水乙醇提取效率最高，而且無水乙醇價(jià)格便宜，無毒，三氯甲烷、正己烷有一定毒性，但是無水乙醇提取出大量的葉綠素，可能會污染柱子，葉綠素的去除方法有待研究。

通過對承德市6個(gè)不同藥房的薄荷藥材中薄荷腦含量測定，結(jié)果表明，不同藥材中薄荷腦的含量差別很大，其中三家藥房的藥材中沒有薄荷腦，可能藥材質(zhì)量不同，也可能是藥材存放不當(dāng)導(dǎo)致含量損失?！吨袊幍洹?010版一部中只對薄荷中揮發(fā)油含量進(jìn)行了限定，所以建立薄荷藥材中薄荷腦的含量測定方法對評價(jià)藥材質(zhì)量以及藥材的使用有重大意義。

經(jīng)典的水蒸氣蒸餾法往往由于高溫可能造成部分成分損失，或改變其組分，使薄荷腦的提取率相對降低。本文采用加熱回流法直接從薄荷藥材中提取薄荷腦，使用溶劑量和藥材量減少，溫度低，損失量少，提取率相對提高。

本試驗(yàn)提取方法不能全部提取薄荷藥材的薄荷腦，提取出的薄荷腦也不一定全是薄荷藥材中原有的，可能是提取過程中轉(zhuǎn)化來的，薄荷腦也有可能在提取過程中轉(zhuǎn)化成了其他成分，具體情況有待研究。

[參考文獻(xiàn)]

[1]國家藥典委員會.中國藥典（一部）[M].北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010.

[2]梁呈元，李維林，張涵慶，等.薄荷化學(xué)成分及其藥理作用研究進(jìn)展[J].中國野生植物資源，2003，22（3）：9-10.

[3]劉玉萍，蘇旭.青藏高原野薄荷揮發(fā)油成分的氣相色譜-質(zhì)譜分析[J].江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué)，2012，40（1）：256-258.

[4]祝祎瑋，懷悅，何翠翠.吳藥薄荷揮發(fā)油成分的GC-MS分析與薄荷醇含量測定[J].南京中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2011， 27（1）：73-76.

[5]徐玉婷.湖北栽培薄荷揮發(fā)油化學(xué)成分氣相色譜-質(zhì)譜分析[J].湖北中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2011，13（1）：26-29.

[6]陳在敏.薄荷素油特征圖譜的研究及多組分含量測定[J].藥物分析雜志，2011，31（10）：1957-1960.

[7]程闊菊，王暉，陳墾.薄荷醇的安全性研究進(jìn)展[J].遼寧中醫(yī)雜志，2010，37（2）：377-380.

[8]王二豪，趙怡，郭延壘，等.氣相色譜法快速測定含薄荷產(chǎn)品中薄荷腦的含量[J].食品科技，2013，38（1）：318-321.

[9]王成港，王春龍，劉衡，等.氣相色譜法測定薄荷油中薄荷腦的含量[J].中草藥，2004，35（11）：1252-1253.

[10]江周虹，高向波，王玉梅.GC-MS法測定薄荷油中薄荷腦、L-薄荷酮和胡薄荷酮的含量[J].中藥材，2009，32（6）：906-908.

[11]蘇越，王呈仲，郭寅龍.基于準(zhǔn)確質(zhì)量測定和保留指數(shù)的GC-MS分析薄荷揮發(fā)性成分[J].化學(xué)學(xué)報(bào)，2009，67（6）：546-554.

[12]劉東輝，黃月純，張子龍，等.薄荷飲片揮發(fā)油氣相色譜指紋圖譜研究[J].中國藥業(yè)，2011，20（4）：28-30.

[13]謝治森.薄荷飲片揮發(fā)油氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用分析[J].海峽藥學(xué)，2010，22（12）：82-83.

[14]魏興國，董巖，崔慶新，等.野生薄荷揮發(fā)油化學(xué)成分的GC-MS分析[J].煙臺師范學(xué)院學(xué)報(bào)（自然科學(xué)版），2003， 19（2）：116-118.

[15]顏永剛，郭曉恒，鄧翀.云南產(chǎn)野生和栽培薄荷中揮發(fā)油的GC-MS比較分析[J].中草藥，2011，42（6）：1090-1092.

（收稿日期：2014-03-26本文編輯：郭靜娟）

3種方法比較，結(jié)果見表1，表明加熱回流提取效率最高。

表 1 不同提取方法薄荷腦的含量（n=3）

2.3.2 提取溶劑的考察

取薄荷藥材粉末（過二號篩）4 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，分別精密加入三氯甲烷、正己烷、無水乙醇50 ml，稱重，85℃回流2 h，冷卻，稱重，補(bǔ)足減失重量，微孔濾膜過濾，取續(xù)濾液進(jìn)樣。結(jié)果見表2，表明無水乙醇提取效率最高。

表 2 不同提取溶劑薄荷腦的含量（n=3）

2.3.3 提取時(shí)間的考察

取薄荷藥材粉末（過二號篩）4 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，共3份，分別精密加入無水乙醇50 ml，稱重，于85℃水浴鍋中，提取時(shí)間分別為1、2、3 h，冷卻，稱重，補(bǔ)足減失重量，微孔濾膜過濾，取續(xù)濾液進(jìn)樣。結(jié)果見表3，表明1 h已基本提取完全。

表 3 不同提取時(shí)間薄荷腦的含量（n=3）

2.3.4 提取溫度的考察

取薄荷藥材粉末（過二號篩）4 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入無水乙醇50 ml，共3份，稱重，分別于85、90、95℃水浴鍋中，回流提取1 h，冷卻，稱重，補(bǔ)足減失重量，微孔濾膜過濾，取續(xù)濾液進(jìn)樣。結(jié)果見表4，表明85℃的水浴溫度足以提取充分。

表 4 不同提取溫度薄荷腦的含量（n=3）

2.3.5 提取溶劑用量的考察

取薄荷藥材粉末（過二號篩）4 g，精密稱定，共3份，分別精密加入40、50、60 ml的無水乙醇，稱重，回流提取1 h，冷卻，稱重，補(bǔ)足減失重量，微孔濾膜過濾，取續(xù)濾液進(jìn)樣。結(jié)果見表5，表明不同提取劑量對薄荷藥材中薄荷腦的提取效率影響不大。

表5 不同提取溶劑用量薄荷腦的含量（n=3）

綜上所述，通過單因素循環(huán)法對提取方法、提取溶劑、提取時(shí)間、提取溫度及提取溶劑用量的考察，確定最佳提取工藝為加10倍的無水乙醇溶液85℃加熱回流提取1 h。

2.4 含量測定方法的建立

2.4.1 供試品溶液的制備

取薄荷藥材粉末（過二號篩）4 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入40 ml無水乙醇溶劑，稱重，85℃加熱回流提取1 h，冷卻，稱重，補(bǔ)足減失重量，微孔濾膜過濾，取續(xù)濾液進(jìn)樣。

2.4.2 線性范圍

分別精密量取上述薄荷腦對照品溶液0.1、0.15、0.2、0.5、0.75、1 ml，于5 ml容量瓶中，無水乙醇定容，配置成6個(gè)不同濃度的對照品溶液，按本文色譜條件測定。以濃度（mg/ml）為橫坐標(biāo)，對照品峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線得到回歸方程：Y=1.0393X+0.0082，r=0.9999（n=6）。

2.4.3 精密度試驗(yàn)

取同一對照品溶液，連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄薄荷腦的峰面積，RSD為0.97%。

2.4.4 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取供試品溶液，分別于0、2、4、6、24 h測定，記錄薄荷腦的峰面積，RSD=0.77%，結(jié)果表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.4.5 回收率試驗(yàn)

采用加樣回收法。取薄荷藥材粉末（過二號篩）2 g，精密稱定，分別精密加入對照品溶液2.6 ml，共6份。精密加入無水乙醇40 ml，稱重85℃加熱回流提取1 h，冷卻，稱重，補(bǔ)足減失重量，微孔濾膜過濾，取續(xù)濾液進(jìn)樣。按上述色譜條件測定，平均回收率為99.00%，RSD=1.83%，結(jié)果見表6。

表6 薄荷腦含量測定的回收率結(jié)果（n=6）

2.4.6 藥材的測定

取承德市不同藥房的薄荷藥材粉末（過二號篩）4 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入40 ml無水乙醇溶液，稱重，85℃加熱回流提取1 h，冷卻，稱重，補(bǔ)足減失重量，微孔濾膜過濾，取續(xù)濾液進(jìn)樣。結(jié)果見表7、圖1。

表7 不同藥房藥材中薄荷腦的含量（n=6）

2.4.7 提取方法的比較

用上述最佳提取方法和水蒸氣蒸餾法（2010年版《中國藥典》一部）提取揮發(fā)油，比較兩者中薄荷腦含量大小。結(jié)果見表8，表明加熱回流法能提取出比傳統(tǒng)方法更多的薄荷腦。

表8 不同提取方法薄荷腦的含量（n=2）

3 討論

本試驗(yàn)用三氯甲烷、正己烷、無水乙醇溶劑提取，無水乙醇提取效率最高，而且無水乙醇價(jià)格便宜，無毒，三氯甲烷、正己烷有一定毒性，但是無水乙醇提取出大量的葉綠素，可能會污染柱子，葉綠素的去除方法有待研究。

通過對承德市6個(gè)不同藥房的薄荷藥材中薄荷腦含量測定，結(jié)果表明，不同藥材中薄荷腦的含量差別很大，其中三家藥房的藥材中沒有薄荷腦，可能藥材質(zhì)量不同，也可能是藥材存放不當(dāng)導(dǎo)致含量損失?！吨袊幍洹?010版一部中只對薄荷中揮發(fā)油含量進(jìn)行了限定，所以建立薄荷藥材中薄荷腦的含量測定方法對評價(jià)藥材質(zhì)量以及藥材的使用有重大意義。

經(jīng)典的水蒸氣蒸餾法往往由于高溫可能造成部分成分損失，或改變其組分，使薄荷腦的提取率相對降低。本文采用加熱回流法直接從薄荷藥材中提取薄荷腦，使用溶劑量和藥材量減少，溫度低，損失量少，提取率相對提高。

本試驗(yàn)提取方法不能全部提取薄荷藥材的薄荷腦，提取出的薄荷腦也不一定全是薄荷藥材中原有的，可能是提取過程中轉(zhuǎn)化來的，薄荷腦也有可能在提取過程中轉(zhuǎn)化成了其他成分，具體情況有待研究。

[參考文獻(xiàn)]

[1]國家藥典委員會.中國藥典（一部）[M].北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010.

[2]梁呈元，李維林，張涵慶，等.薄荷化學(xué)成分及其藥理作用研究進(jìn)展[J].中國野生植物資源，2003，22（3）：9-10.

[3]劉玉萍，蘇旭.青藏高原野薄荷揮發(fā)油成分的氣相色譜-質(zhì)譜分析[J].江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué)，2012，40（1）：256-258.

[4]祝祎瑋，懷悅，何翠翠.吳藥薄荷揮發(fā)油成分的GC-MS分析與薄荷醇含量測定[J].南京中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2011， 27（1）：73-76.

[5]徐玉婷.湖北栽培薄荷揮發(fā)油化學(xué)成分氣相色譜-質(zhì)譜分析[J].湖北中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2011，13（1）：26-29.

[6]陳在敏.薄荷素油特征圖譜的研究及多組分含量測定[J].藥物分析雜志，2011，31（10）：1957-1960.

[7]程闊菊，王暉，陳墾.薄荷醇的安全性研究進(jìn)展[J].遼寧中醫(yī)雜志，2010，37（2）：377-380.

[8]王二豪，趙怡，郭延壘，等.氣相色譜法快速測定含薄荷產(chǎn)品中薄荷腦的含量[J].食品科技，2013，38（1）：318-321.

[9]王成港，王春龍，劉衡，等.氣相色譜法測定薄荷油中薄荷腦的含量[J].中草藥，2004，35（11）：1252-1253.

[10]江周虹，高向波，王玉梅.GC-MS法測定薄荷油中薄荷腦、L-薄荷酮和胡薄荷酮的含量[J].中藥材，2009，32（6）：906-908.

[11]蘇越，王呈仲，郭寅龍.基于準(zhǔn)確質(zhì)量測定和保留指數(shù)的GC-MS分析薄荷揮發(fā)性成分[J].化學(xué)學(xué)報(bào)，2009，67（6）：546-554.

[12]劉東輝，黃月純，張子龍，等.薄荷飲片揮發(fā)油氣相色譜指紋圖譜研究[J].中國藥業(yè)，2011，20（4）：28-30.

[13]謝治森.薄荷飲片揮發(fā)油氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用分析[J].海峽藥學(xué)，2010，22（12）：82-83.

[14]魏興國，董巖，崔慶新，等.野生薄荷揮發(fā)油化學(xué)成分的GC-MS分析[J].煙臺師范學(xué)院學(xué)報(bào)（自然科學(xué)版），2003， 19（2）：116-118.

[15]顏永剛，郭曉恒，鄧翀.云南產(chǎn)野生和栽培薄荷中揮發(fā)油的GC-MS比較分析[J].中草藥，2011，42（6）：1090-1092.

（收稿日期：2014-03-26本文編輯：郭靜娟）