人參皂甙Rg1對慢性疲勞綜合癥大鼠抗氧化酶系統(tǒng)活性的影響研究＊

宋姌 劉濤 西安體育學(xué)院（西安 710068）

慢性疲勞綜合征（Chronic fatigue syndrome，CFS）是近二十年來發(fā)現(xiàn)的一種以人身體和精神極度疲勞并伴隨著肌肉酸痛、淋巴結(jié)腫大、咽喉腫痛、記憶力下降及睡眠障礙和抑郁等癥狀的一種疾病，目前在城市人口中多發(fā)，多見于腦力勞動者。我國的傳統(tǒng)中藥人參皂甙具有理氣扶正、強身健體的作用?；诖?，我們擬通過中藥人參皂甙Rg1干預(yù)CFS模型大鼠，探討運動及中藥治療CFS的新思路。

1 材料與方法

1.1 研究對象 健康雄性SD大鼠30只，體重（205±15）g，（西安交通大學(xué)動物實驗中心提供）。隨機分為5組：正常對照組（常規(guī)飼養(yǎng)，不做任何處理，C組）、模型組（在造模后不給予任何治療，M組）、人參皂甙＋模型組（造模的同時給予人參皂甙水溶液60mg／kg／d灌胃治療，R＋M組）、每組10只，所有動物自由攝食和飲水。實驗室溫度、濕度控制在規(guī)定范圍，室內(nèi)光／暗周期為12h／12h（光照時間06：00～18：00）。

1.2 實驗材料 自制硬塑料束縛筒；人參皂甙Rg1粉劑由西安飛達生物技術(shù)有限公司（批號：056244）；SOD試劑盒、GSH試劑盒、MDA試劑盒均購自南京建成生物公司。

1.3 CFS大鼠造模 參照羅英華等[1]CFS造模進行改良，每周一、三、五上午對大鼠放入束縛筒內(nèi)，調(diào)節(jié)束縛筒內(nèi)徑直至大鼠不能動彈，每次3min，休息10min后，再次放入束縛筒內(nèi)，共5次。下午將大鼠進行冷水游泳（溫度控制在12℃）10min，休息30min后，再重復(fù)一次。造模時間為6周。正常對照組大鼠常規(guī)飼養(yǎng)，不做任何處理。

1.4 抗氧化系統(tǒng)檢測實驗 實驗結(jié)束1d后，10%水合氯醛（30mg／kg）腹腔注射麻醉大鼠，迅速斷頭取血約2mL／只，3000r／min離心10min，取上清-20℃?zhèn)溆?。在冰板上快速分離出海馬、大腦皮層，稱重后在超聲均漿機上勻漿。用Bradford的考馬斯亮藍染色法，測定各樣品的蛋白含量。超氧化物歧化酶（SOD）活性，丙二醛（MDA）含量和谷胱甘肽過氧化氫酶（GSH）活性均采用相應(yīng)的試劑盒測定。MDA含量采用巴比妥酸比色法測定[2]。

1.5 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS13.0統(tǒng)計軟件進行處理，所有數(shù)據(jù)以均數(shù)士標(biāo)準(zhǔn)差（）表示。采用單因素方差分析，方差齊用LSD檢驗，方差不齊用Dunnett T3檢驗，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)顯著意義。

2 結(jié) 果

2.1 各組大鼠SOD、GSH和MDA的測定見表1。

表1 各組大鼠SOD、GSH、MDA測定結(jié)果（）

表1 各組大鼠SOD、GSH、MDA測定結(jié)果（）

注：與C組比較△P＜0.01；與M組比較▲P＜0.01

10648±24.54 54.35±4.191.52±0.19 M組 10367±17.65△ 28.23±2.12△ 3.27±0.58△R＋M組 10587±21.32▲ 48.69±3.27▲ 1.86±0.43）C組▲

表1結(jié)果顯示，與對照組相比，模型組SOD、GSH活性明顯降低，MDA含量明顯增加，統(tǒng)計學(xué)意義非常顯著（P＜0.01）；與模型組比較，人參皂甙組大鼠SOD、GSH活性明顯增加，MDA含量明顯降低，具有非常顯著性差異 （P＜0.01），說明慢性疲勞綜合癥大鼠海馬及大腦皮質(zhì)抗氧化功能明顯降低，脂質(zhì)沉積物增加。而人參皂甙Rg1可明顯提高慢性疲勞綜合癥大鼠抗氧化酶系統(tǒng)的活性，降低脂質(zhì)氧化物的沉積。

3 討 論

3.1 CFS動物模型的研制 建立合適的動物模型是研究疾病重要的手段。CFS發(fā)病原因復(fù)雜，目前研制的CFS動物模型有多種。在本研究中，我們通過慢性束縛和冷水游泳相結(jié)合的辦法來建立CFS模型就是模仿人長期的心理應(yīng)激和軀體應(yīng)激誘發(fā)而產(chǎn)生的煩躁、絕望以及免疫功能低下等CFS癥狀。有研究報道[3]慢性束縛可能是影響了海馬中氨基酸遞質(zhì)的水平及比例，使中樞抑制占優(yōu)勢，使動物出現(xiàn)疲勞記憶力下降及抑郁傾向。在本實驗中，大鼠在束縛筒中所產(chǎn)生的煩躁、絕望等狀態(tài)與人類的抑郁、心理壓力增大等精神狀態(tài)很相似。同時，我們根據(jù)大鼠游泳喜歡溫水的習(xí)慣，選擇冷水游泳既是對大鼠體力的巨大消耗，同是也對大鼠的精神狀態(tài)造成一定的壓力。6周造模結(jié)束后，模型組大鼠身體消瘦，體重增加不明顯，反映了雙重刺激引起了大鼠產(chǎn)生CFS的相應(yīng)癥狀，間接導(dǎo)致了大鼠的體力和精神狀態(tài)的下降。我們選擇了比較經(jīng)典的鼠尾懸掛實驗評價其行為學(xué)能力。在本實驗中，模型組大鼠的懸掛時間明顯增加，說明其表現(xiàn)出與人類CFS類似的“抑郁”、“失望”情緒明顯增加。在本研究中的慢性復(fù)合刺激所引起的體力和精神損害與臨床的CFS癥狀比較相似，故認為本模型是可行的。

3.2 運動與人參皂甙對CFS大鼠對氧化一抗氧化系統(tǒng)的影響 機體在新陳代謝中會產(chǎn)生大量的氧自由基，引起細胞、組織的損傷。機體產(chǎn)生的氧自由基能攻擊生物膜中的多不飽和脂肪酸，引發(fā)脂質(zhì)過氧化反應(yīng)，并因此形成脂質(zhì)過氧化物，如丙二醛（MDA）。SOD活力的高低間接反映了機體清除氧自由基的能力，而MDA的高低又間接反映了機體細胞受自由基攻擊的嚴(yán)重程度[4]。MDA是自由基攻擊生物膜中多不飽和脂肪酸引發(fā)脂質(zhì)過氧化作用所形成的脂質(zhì)過氧化物[5]。自由基的增加，導(dǎo)致生物膜的完整性受損，生物膜的通透性增加，細胞內(nèi)酶外釋，內(nèi)外狀況異常，電解質(zhì)失衡，酶的活性降低，細胞功能下降，從而造成疲勞產(chǎn)生。同時，機體也存在著抗氧化系統(tǒng)包括：SOD、GSH、CAT等。目前有研究表明[6]，CFS的精神疲勞與腦內(nèi)大量產(chǎn)生氧自由基而抗氧化系統(tǒng)被抑制有關(guān)，所以尋求能提高機體抗氧化能力的手段對治療CFS有重要的意義。本研究發(fā)現(xiàn)人參皂甙組及人參皂甙加運動組大鼠能明顯減輕CFS大鼠脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物MDA的產(chǎn)量，同時增加抗氧化酶的活性。說明人參皂甙Rg1可以提高神經(jīng)細胞抗氧化能力、減少自由基的生成，賀洪等[7]也報道人參皂甙通過提高抗氧化酶活性，同時減少MDA產(chǎn)量，減輕一次性力竭游泳對小鼠肝臟的損害。人參皂甙的抗氧化作用與其分子結(jié)構(gòu)中含有酚類結(jié)構(gòu)和氨基，易與自由電子結(jié)合有關(guān)。在本實驗中，單純運動對CFS大鼠的抗氧化功能改善不明顯，也不能減輕脂質(zhì)過氧化產(chǎn)生的生成，這可能與我們的運動強度和CFS大鼠的病理體質(zhì)有關(guān)，具體機制需進一步探討。

4 結(jié) 論 利用束縛法和冷水游泳相結(jié)合的方法可成功建立慢性疲勞綜合征大鼠模型。人參皂甙灌注可提高CFS大鼠腦組織抗氧化酶系統(tǒng)活性并減輕脂質(zhì)過氧化物的沉積。

[1]羅英華，陳敏聰，馮耀華，等.針刺對慢性疲勞大鼠血清IL-2及 TNF-α的影響[J].天津中醫(yī)藥，2006，（03）：206-208.

[2]Zhou Q，Liang YX.The improvement of the MDA determine in animal livers[J].Lishizhen Medicine and Materia Medica Research，2010，21（1）：224-225.

[3]王天芳，陳易新，張 倩，等.慢性束縛對大鼠海馬氨基酸水平的變化及中藥的調(diào)節(jié)作用[J].中國中醫(yī)藥信息雜志，2000，7（7）：23-24.

[4]Soares DD，Coimbra CC，Marubayashi U.Tryptophan-induced central fatigue in exercising rats is related to sero-tonincontent in preoptic area[J].Neurosci Lett，2007，415（3）：274-278.

[5]耿 珊，張 琛，徐春燕，等.過氧化損傷及抗氧化能力時間動態(tài)變化與造血干／祖細胞衰老的相關(guān)性[J].中國老年學(xué)雜志，2013，3（33）：1061-1063.

[6]陳愛國，顏 軍.中等負荷運動訓(xùn)練對心理應(yīng)激大鼠行為和氧自由基的影響[J].中國行為醫(yī)學(xué)科學(xué)，2005，14（7）：582-583.

[7]賀 洪，汪保和，唐 暉，等.人參皂甙Rg1對小鼠力竭游泳恢復(fù)期的抗自由基作用[J].體育科學(xué)，2002，22（2）：104-107.