多腫瘤標(biāo)志物蛋白芯片檢測(cè)系統(tǒng)在臨床中的應(yīng)用分析

張培良?張煥珍

【摘要】 目的 探討多腫瘤標(biāo)志物蛋白芯片檢測(cè)系統(tǒng)在臨床應(yīng)用中的價(jià)值。方法 100例臨床常見(jiàn)的惡性腫瘤患者應(yīng)用多腫瘤標(biāo)志物蛋白芯片技術(shù)對(duì)患者的血清進(jìn)行檢測(cè)， 100例良性腫瘤患者的血清進(jìn)行檢測(cè)， 分析其靈敏度和特異性并對(duì)其進(jìn)行比較兩組的差異。結(jié)果 多腫瘤標(biāo)志物蛋白芯片檢測(cè)系統(tǒng)對(duì)常見(jiàn)腫瘤患者100例進(jìn)行檢測(cè)， 呈陽(yáng)性85例， 陽(yáng)性率85%；對(duì)照組100例呈陽(yáng)性9例， 陽(yáng)性率9%。結(jié)論 多腫瘤標(biāo)志物蛋白芯片檢測(cè)系統(tǒng)適宜于健康體檢及腫瘤普查， 是臨床檢測(cè)腫瘤的有效手段。

【關(guān)鍵詞】 惡性腫瘤；蛋白芯片；腫瘤標(biāo)志物；應(yīng)用分析

蛋白芯片檢測(cè)技術(shù)是新研究領(lǐng)域的一種高靈敏度、高通量、高特異性且微型化的蛋白質(zhì)分析技術(shù)[1]。本研究采用上海數(shù)康公司的HD2001A型生物芯片， 對(duì)已經(jīng)確診的100例惡性腫瘤患者和100例良性患者進(jìn)行相關(guān)分析， 探討在腫瘤臨床診斷檢測(cè)腫瘤標(biāo)記物（TM）的聯(lián)合應(yīng)用價(jià)值， 為腫瘤患者的早期診斷和治療提供精準(zhǔn)的依據(jù)。

1 資料與方法

1. 1 一般資料 惡性腫瘤患者為本院2012年8月～2013年10月住院患者100例， 其中男62例， 女38例， 年齡34～79， 平均年齡（53.2±7.8）歲， 其中胃癌25例， 胰腺癌15例， 乳腺癌10例， 肺癌11例， 肝癌21例， 直腸癌8例， 結(jié)腸癌10例。對(duì)照組100例， 其中肝臟疾病32例， 肺部疾病20例， 消化道疾病26例， 婦科疾病14例， 前列腺疾病8例， 兩組患者的一般資料差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）， 具有可比性。

1. 2 方法 在患者空腹時(shí)采集外周血2 ml 對(duì)其離心分離血清， 分離后在4℃冰箱保存， 4 d左右取出檢測(cè)。檢測(cè)時(shí)將芯片的小方格內(nèi)放入待測(cè)血清或標(biāo)準(zhǔn)品100 μl；恒溫37 ℃， 30 min， 100 rpm 搖床振蕩， 振蕩后取出芯片棄去孔內(nèi)液體；清洗后將芯片放入洗盒， 繼續(xù)洗液， 37℃搖床， 250 rpm， 10 min振蕩洗滌， 將棄去盒內(nèi)液體；重復(fù)洗滌4次；芯片小方格內(nèi)加 100 μl 反應(yīng)液， 同樣重復(fù)洗滌 4次；等體積將檢測(cè)液 A 和 B 混合， 加入 20 μl 混合的檢測(cè)液在膜表面， 通過(guò)蛋白芯片檢測(cè)儀進(jìn)行檢測(cè)， 60 s后拍攝圖像， 進(jìn)行反應(yīng)數(shù)據(jù)分析。

1. 3 結(jié)果判定[2] 根據(jù)C-12 檢測(cè)系統(tǒng)12種腫瘤標(biāo)志物的參考范圍：神經(jīng)元特異性烯醇化酶（NSE）<13.0 ng/ml， 癌胚抗原（CEA）<5.0 ng/ml， 糖類(lèi)抗原125（CA125）<35.0 U/ml， 糖類(lèi)抗原242（CA242）<20.0 U/ml， 鐵蛋白（ferritin）<219.0 ng/ml（女）、<322.0 ng/ml（男）， 糖類(lèi)抗原199（CA199）<35.0 U/ml， 糖類(lèi)抗原153（CA153）<35.0 U/ml， 前列腺特異性抗原（PSA）<5.0 ng/ml， 甲胎蛋白（AFP）<20.0 ng/ml， 人絨毛膜促性腺激素（β-HCG）<3.0 ng/ml， 游離性前列腺特異性抗原（F-PSA）<1.0 ng/ml， 生長(zhǎng)激素（HGH）<7.5 ng/ml。實(shí)驗(yàn)排除溶血、脂血標(biāo)本。其他具體步驟要嚴(yán)格按照C-12上的使用說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作。

1. 4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件SPSS16.0對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行總結(jié)、處理， 計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)， P<0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

良性疾病組與惡性腫瘤組的陽(yáng)性率比較， 惡性腫瘤組的陽(yáng)性率明顯比良性疾病組高（P<0.05）。C-12 蛋白芯片對(duì)惡性腫瘤檢測(cè)的陽(yáng)性率85%， 靈敏度為82%。見(jiàn)表1。

表1 C-12蛋白芯片對(duì)各組的檢測(cè)陽(yáng)性率（n， %）

分組 例數(shù) 陽(yáng)性 陽(yáng)性率

惡性腫瘤組 100 85 85

胃癌 25 20

肺癌 11 9

肝癌 21 19

胰腺癌 15 12

乳腺癌 10 10

直腸癌 8 7

結(jié)腸癌 10 8

良性疾病組 100 9 9

肝臟疾病 32 3

肺部疾病 20 2

婦科疾病 14 1

消化道疾病 26 3

前列腺疾病 8 0

3 討論

生物芯片是近年來(lái)醫(yī)學(xué)界一個(gè)備受矚目的醫(yī)療成果， 可以將人體的各項(xiàng)檢測(cè)變得非常集中化， 而且可對(duì)人體內(nèi)的細(xì)胞進(jìn)行簡(jiǎn)單快速地解讀。生物芯片主要就是采用了微細(xì)加工[3， 4]。雙抗體夾心法的化學(xué)發(fā)光檢測(cè)方法是多腫瘤標(biāo)志物蛋白芯片檢測(cè)系統(tǒng)是基礎(chǔ)， 12種腫瘤標(biāo)志物的抗體被固相基質(zhì)上包被， 將血清中對(duì)應(yīng)的腫瘤標(biāo)志物進(jìn)行捕捉， 與第二抗體結(jié)合， 對(duì)其催化使其產(chǎn)生化學(xué)反應(yīng)的光信號(hào)， 將芯片采取專(zhuān)門(mén)的芯片閱讀儀對(duì)腫瘤標(biāo)志物進(jìn)行定量檢測(cè)。

本研究對(duì)卵巢癌使用多腫瘤標(biāo)志物蛋白芯片進(jìn)行分析和檢測(cè)， 蛋白芯片是一種應(yīng)用較為廣泛生物芯片， 蛋白芯之所以發(fā)光主要就是利用了抗體和抗原特異性的結(jié)合通過(guò)催化化學(xué)反應(yīng)來(lái)進(jìn)行檢測(cè)的。然后利用計(jì)算機(jī)來(lái)判斷熒光的強(qiáng)弱結(jié)果。蛋白芯片技術(shù)避免了過(guò)去分析方法的弱點(diǎn)， 具有快速讀取、高通量和樣本量少的優(yōu)勢(shì)， 對(duì)于原始蛋白的提取物和血液中的蛋白質(zhì)快速進(jìn)行分析， 而且可以對(duì)于血液， 提取多種組織和細(xì)胞中的蛋白質(zhì)信息， 所以廣泛的運(yùn)用于檢測(cè)癌癥， 經(jīng)過(guò)醫(yī)學(xué)研究， 該技術(shù)對(duì)于檢測(cè)腫瘤蛋白質(zhì)水平的變化已經(jīng)成熟， 比起其他的檢測(cè)能夠?qū)δ[瘤特征進(jìn)行反映。雖然生物芯片已經(jīng)成熟但是不可能達(dá)到百分百的效果， 仍會(huì)有一些患者由于病情原因被誤診。畢竟腫瘤患者在不斷地變化之中， 很難預(yù)測(cè)。蛋白芯片檢測(cè)技術(shù)的特異性和敏感性在所有目前存在的檢測(cè)手段中相對(duì)較高， 盡管達(dá)不到百分百的成功率， 但是對(duì)腫瘤做出合理而科學(xué)的檢測(cè)成功率相對(duì)還是很高的。

目前在醫(yī)學(xué)界倡導(dǎo)腫瘤標(biāo)志物聯(lián)合檢驗(yàn)的方法的人占的比率還是較大的， 因?yàn)槟[瘤診斷這種方法可以提高敏感度和特異性， 在適合腫瘤臨床檢測(cè)的同時(shí)， 在臨床上對(duì)腫瘤高?；颊叩捏w檢篩查也具有顯著的意義， 在臨床診斷上C-12芯片法的基本價(jià)值也是顯著的。對(duì)陽(yáng)性血清腫瘤標(biāo)志物的檢驗(yàn)因?yàn)橛辛?2 項(xiàng)指標(biāo)的聯(lián)合所以更加精確。目前所有腫瘤的標(biāo)志物的指標(biāo)會(huì)有所顯示。而對(duì)于單項(xiàng)腫瘤標(biāo)志物如肺癌、 乳腺癌、 胃癌陽(yáng)性比例不高的， 通過(guò)C-12芯片法的聯(lián)合檢測(cè)可以發(fā)現(xiàn)多項(xiàng)腫瘤標(biāo)志物呈陽(yáng)性， 這不僅為臨床治療提供有效的監(jiān)測(cè)指標(biāo)還有助于提高臨床診斷的靈敏度。多腫瘤標(biāo)志物蛋白芯片檢測(cè)系統(tǒng)在臨床中的應(yīng)用具有一定價(jià)值。

參考文獻(xiàn)

[1] 程建平， 張建明， 金躍.多腫瘤標(biāo)志物蛋白芯片檢測(cè)系統(tǒng)在腫瘤診斷與篩查中的應(yīng)用研究.中國(guó)實(shí)驗(yàn)診斷學(xué)， 2008， 1（3）： 1370-1371.

[2] 陳莉彭， 劍雄， 周細(xì)國(guó).多腫瘤標(biāo)志物蛋白芯片檢測(cè)系統(tǒng)在臨床中的應(yīng)用.中國(guó)醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)， 2006， 3（29）：29-30.

[3] 胡興榮， 徐先早， 崔顯念， 等.多腫瘤標(biāo)志物蛋白芯片檢測(cè)系統(tǒng)的應(yīng)用分析.檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)與臨床， 2007， 4（10）：929-930.

[4] 潘振華.多腫瘤標(biāo)志物蛋白芯片檢測(cè)技術(shù)在卵巢癌臨床應(yīng)用中的評(píng)價(jià).現(xiàn)代預(yù)防醫(yī)學(xué)， 2012， 39（24）：6399-6340.

[收稿日期：2014-03-11]endprint

【摘要】 目的 探討多腫瘤標(biāo)志物蛋白芯片檢測(cè)系統(tǒng)在臨床應(yīng)用中的價(jià)值。方法 100例臨床常見(jiàn)的惡性腫瘤患者應(yīng)用多腫瘤標(biāo)志物蛋白芯片技術(shù)對(duì)患者的血清進(jìn)行檢測(cè)， 100例良性腫瘤患者的血清進(jìn)行檢測(cè)， 分析其靈敏度和特異性并對(duì)其進(jìn)行比較兩組的差異。結(jié)果 多腫瘤標(biāo)志物蛋白芯片檢測(cè)系統(tǒng)對(duì)常見(jiàn)腫瘤患者100例進(jìn)行檢測(cè)， 呈陽(yáng)性85例， 陽(yáng)性率85%；對(duì)照組100例呈陽(yáng)性9例， 陽(yáng)性率9%。結(jié)論 多腫瘤標(biāo)志物蛋白芯片檢測(cè)系統(tǒng)適宜于健康體檢及腫瘤普查， 是臨床檢測(cè)腫瘤的有效手段。

【關(guān)鍵詞】 惡性腫瘤；蛋白芯片；腫瘤標(biāo)志物；應(yīng)用分析

蛋白芯片檢測(cè)技術(shù)是新研究領(lǐng)域的一種高靈敏度、高通量、高特異性且微型化的蛋白質(zhì)分析技術(shù)[1]。本研究采用上海數(shù)康公司的HD2001A型生物芯片， 對(duì)已經(jīng)確診的100例惡性腫瘤患者和100例良性患者進(jìn)行相關(guān)分析， 探討在腫瘤臨床診斷檢測(cè)腫瘤標(biāo)記物（TM）的聯(lián)合應(yīng)用價(jià)值， 為腫瘤患者的早期診斷和治療提供精準(zhǔn)的依據(jù)。

1 資料與方法

1. 1 一般資料 惡性腫瘤患者為本院2012年8月～2013年10月住院患者100例， 其中男62例， 女38例， 年齡34～79， 平均年齡（53.2±7.8）歲， 其中胃癌25例， 胰腺癌15例， 乳腺癌10例， 肺癌11例， 肝癌21例， 直腸癌8例， 結(jié)腸癌10例。對(duì)照組100例， 其中肝臟疾病32例， 肺部疾病20例， 消化道疾病26例， 婦科疾病14例， 前列腺疾病8例， 兩組患者的一般資料差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）， 具有可比性。

1. 2 方法 在患者空腹時(shí)采集外周血2 ml 對(duì)其離心分離血清， 分離后在4℃冰箱保存， 4 d左右取出檢測(cè)。檢測(cè)時(shí)將芯片的小方格內(nèi)放入待測(cè)血清或標(biāo)準(zhǔn)品100 μl；恒溫37 ℃， 30 min， 100 rpm 搖床振蕩， 振蕩后取出芯片棄去孔內(nèi)液體；清洗后將芯片放入洗盒， 繼續(xù)洗液， 37℃搖床， 250 rpm， 10 min振蕩洗滌， 將棄去盒內(nèi)液體；重復(fù)洗滌4次；芯片小方格內(nèi)加 100 μl 反應(yīng)液， 同樣重復(fù)洗滌 4次；等體積將檢測(cè)液 A 和 B 混合， 加入 20 μl 混合的檢測(cè)液在膜表面， 通過(guò)蛋白芯片檢測(cè)儀進(jìn)行檢測(cè)， 60 s后拍攝圖像， 進(jìn)行反應(yīng)數(shù)據(jù)分析。

1. 3 結(jié)果判定[2] 根據(jù)C-12 檢測(cè)系統(tǒng)12種腫瘤標(biāo)志物的參考范圍：神經(jīng)元特異性烯醇化酶（NSE）<13.0 ng/ml， 癌胚抗原（CEA）<5.0 ng/ml， 糖類(lèi)抗原125（CA125）<35.0 U/ml， 糖類(lèi)抗原242（CA242）<20.0 U/ml， 鐵蛋白（ferritin）<219.0 ng/ml（女）、<322.0 ng/ml（男）， 糖類(lèi)抗原199（CA199）<35.0 U/ml， 糖類(lèi)抗原153（CA153）<35.0 U/ml， 前列腺特異性抗原（PSA）<5.0 ng/ml， 甲胎蛋白（AFP）<20.0 ng/ml， 人絨毛膜促性腺激素（β-HCG）<3.0 ng/ml， 游離性前列腺特異性抗原（F-PSA）<1.0 ng/ml， 生長(zhǎng)激素（HGH）<7.5 ng/ml。實(shí)驗(yàn)排除溶血、脂血標(biāo)本。其他具體步驟要嚴(yán)格按照C-12上的使用說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作。

1. 4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件SPSS16.0對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行總結(jié)、處理， 計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)， P<0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

良性疾病組與惡性腫瘤組的陽(yáng)性率比較， 惡性腫瘤組的陽(yáng)性率明顯比良性疾病組高（P<0.05）。C-12 蛋白芯片對(duì)惡性腫瘤檢測(cè)的陽(yáng)性率85%， 靈敏度為82%。見(jiàn)表1。

表1 C-12蛋白芯片對(duì)各組的檢測(cè)陽(yáng)性率（n， %）

分組 例數(shù) 陽(yáng)性 陽(yáng)性率

惡性腫瘤組 100 85 85

胃癌 25 20

肺癌 11 9

肝癌 21 19

胰腺癌 15 12

乳腺癌 10 10

直腸癌 8 7

結(jié)腸癌 10 8

良性疾病組 100 9 9

肝臟疾病 32 3

肺部疾病 20 2

婦科疾病 14 1

消化道疾病 26 3

前列腺疾病 8 0

3 討論

生物芯片是近年來(lái)醫(yī)學(xué)界一個(gè)備受矚目的醫(yī)療成果， 可以將人體的各項(xiàng)檢測(cè)變得非常集中化， 而且可對(duì)人體內(nèi)的細(xì)胞進(jìn)行簡(jiǎn)單快速地解讀。生物芯片主要就是采用了微細(xì)加工[3， 4]。雙抗體夾心法的化學(xué)發(fā)光檢測(cè)方法是多腫瘤標(biāo)志物蛋白芯片檢測(cè)系統(tǒng)是基礎(chǔ)， 12種腫瘤標(biāo)志物的抗體被固相基質(zhì)上包被， 將血清中對(duì)應(yīng)的腫瘤標(biāo)志物進(jìn)行捕捉， 與第二抗體結(jié)合， 對(duì)其催化使其產(chǎn)生化學(xué)反應(yīng)的光信號(hào)， 將芯片采取專(zhuān)門(mén)的芯片閱讀儀對(duì)腫瘤標(biāo)志物進(jìn)行定量檢測(cè)。

本研究對(duì)卵巢癌使用多腫瘤標(biāo)志物蛋白芯片進(jìn)行分析和檢測(cè)， 蛋白芯片是一種應(yīng)用較為廣泛生物芯片， 蛋白芯之所以發(fā)光主要就是利用了抗體和抗原特異性的結(jié)合通過(guò)催化化學(xué)反應(yīng)來(lái)進(jìn)行檢測(cè)的。然后利用計(jì)算機(jī)來(lái)判斷熒光的強(qiáng)弱結(jié)果。蛋白芯片技術(shù)避免了過(guò)去分析方法的弱點(diǎn)， 具有快速讀取、高通量和樣本量少的優(yōu)勢(shì)， 對(duì)于原始蛋白的提取物和血液中的蛋白質(zhì)快速進(jìn)行分析， 而且可以對(duì)于血液， 提取多種組織和細(xì)胞中的蛋白質(zhì)信息， 所以廣泛的運(yùn)用于檢測(cè)癌癥， 經(jīng)過(guò)醫(yī)學(xué)研究， 該技術(shù)對(duì)于檢測(cè)腫瘤蛋白質(zhì)水平的變化已經(jīng)成熟， 比起其他的檢測(cè)能夠?qū)δ[瘤特征進(jìn)行反映。雖然生物芯片已經(jīng)成熟但是不可能達(dá)到百分百的效果， 仍會(huì)有一些患者由于病情原因被誤診。畢竟腫瘤患者在不斷地變化之中， 很難預(yù)測(cè)。蛋白芯片檢測(cè)技術(shù)的特異性和敏感性在所有目前存在的檢測(cè)手段中相對(duì)較高， 盡管達(dá)不到百分百的成功率， 但是對(duì)腫瘤做出合理而科學(xué)的檢測(cè)成功率相對(duì)還是很高的。

目前在醫(yī)學(xué)界倡導(dǎo)腫瘤標(biāo)志物聯(lián)合檢驗(yàn)的方法的人占的比率還是較大的， 因?yàn)槟[瘤診斷這種方法可以提高敏感度和特異性， 在適合腫瘤臨床檢測(cè)的同時(shí)， 在臨床上對(duì)腫瘤高危患者的體檢篩查也具有顯著的意義， 在臨床診斷上C-12芯片法的基本價(jià)值也是顯著的。對(duì)陽(yáng)性血清腫瘤標(biāo)志物的檢驗(yàn)因?yàn)橛辛?2 項(xiàng)指標(biāo)的聯(lián)合所以更加精確。目前所有腫瘤的標(biāo)志物的指標(biāo)會(huì)有所顯示。而對(duì)于單項(xiàng)腫瘤標(biāo)志物如肺癌、 乳腺癌、 胃癌陽(yáng)性比例不高的， 通過(guò)C-12芯片法的聯(lián)合檢測(cè)可以發(fā)現(xiàn)多項(xiàng)腫瘤標(biāo)志物呈陽(yáng)性， 這不僅為臨床治療提供有效的監(jiān)測(cè)指標(biāo)還有助于提高臨床診斷的靈敏度。多腫瘤標(biāo)志物蛋白芯片檢測(cè)系統(tǒng)在臨床中的應(yīng)用具有一定價(jià)值。

參考文獻(xiàn)

[1] 程建平， 張建明， 金躍.多腫瘤標(biāo)志物蛋白芯片檢測(cè)系統(tǒng)在腫瘤診斷與篩查中的應(yīng)用研究.中國(guó)實(shí)驗(yàn)診斷學(xué)， 2008， 1（3）： 1370-1371.

[2] 陳莉彭， 劍雄， 周細(xì)國(guó).多腫瘤標(biāo)志物蛋白芯片檢測(cè)系統(tǒng)在臨床中的應(yīng)用.中國(guó)醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)， 2006， 3（29）：29-30.

[3] 胡興榮， 徐先早， 崔顯念， 等.多腫瘤標(biāo)志物蛋白芯片檢測(cè)系統(tǒng)的應(yīng)用分析.檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)與臨床， 2007， 4（10）：929-930.

[4] 潘振華.多腫瘤標(biāo)志物蛋白芯片檢測(cè)技術(shù)在卵巢癌臨床應(yīng)用中的評(píng)價(jià).現(xiàn)代預(yù)防醫(yī)學(xué)， 2012， 39（24）：6399-6340.

[收稿日期：2014-03-11]endprint

【摘要】 目的 探討多腫瘤標(biāo)志物蛋白芯片檢測(cè)系統(tǒng)在臨床應(yīng)用中的價(jià)值。方法 100例臨床常見(jiàn)的惡性腫瘤患者應(yīng)用多腫瘤標(biāo)志物蛋白芯片技術(shù)對(duì)患者的血清進(jìn)行檢測(cè)， 100例良性腫瘤患者的血清進(jìn)行檢測(cè)， 分析其靈敏度和特異性并對(duì)其進(jìn)行比較兩組的差異。結(jié)果 多腫瘤標(biāo)志物蛋白芯片檢測(cè)系統(tǒng)對(duì)常見(jiàn)腫瘤患者100例進(jìn)行檢測(cè)， 呈陽(yáng)性85例， 陽(yáng)性率85%；對(duì)照組100例呈陽(yáng)性9例， 陽(yáng)性率9%。結(jié)論 多腫瘤標(biāo)志物蛋白芯片檢測(cè)系統(tǒng)適宜于健康體檢及腫瘤普查， 是臨床檢測(cè)腫瘤的有效手段。

【關(guān)鍵詞】 惡性腫瘤；蛋白芯片；腫瘤標(biāo)志物；應(yīng)用分析

蛋白芯片檢測(cè)技術(shù)是新研究領(lǐng)域的一種高靈敏度、高通量、高特異性且微型化的蛋白質(zhì)分析技術(shù)[1]。本研究采用上海數(shù)康公司的HD2001A型生物芯片， 對(duì)已經(jīng)確診的100例惡性腫瘤患者和100例良性患者進(jìn)行相關(guān)分析， 探討在腫瘤臨床診斷檢測(cè)腫瘤標(biāo)記物（TM）的聯(lián)合應(yīng)用價(jià)值， 為腫瘤患者的早期診斷和治療提供精準(zhǔn)的依據(jù)。

1 資料與方法

1. 1 一般資料 惡性腫瘤患者為本院2012年8月～2013年10月住院患者100例， 其中男62例， 女38例， 年齡34～79， 平均年齡（53.2±7.8）歲， 其中胃癌25例， 胰腺癌15例， 乳腺癌10例， 肺癌11例， 肝癌21例， 直腸癌8例， 結(jié)腸癌10例。對(duì)照組100例， 其中肝臟疾病32例， 肺部疾病20例， 消化道疾病26例， 婦科疾病14例， 前列腺疾病8例， 兩組患者的一般資料差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）， 具有可比性。

1. 2 方法 在患者空腹時(shí)采集外周血2 ml 對(duì)其離心分離血清， 分離后在4℃冰箱保存， 4 d左右取出檢測(cè)。檢測(cè)時(shí)將芯片的小方格內(nèi)放入待測(cè)血清或標(biāo)準(zhǔn)品100 μl；恒溫37 ℃， 30 min， 100 rpm 搖床振蕩， 振蕩后取出芯片棄去孔內(nèi)液體；清洗后將芯片放入洗盒， 繼續(xù)洗液， 37℃搖床， 250 rpm， 10 min振蕩洗滌， 將棄去盒內(nèi)液體；重復(fù)洗滌4次；芯片小方格內(nèi)加 100 μl 反應(yīng)液， 同樣重復(fù)洗滌 4次；等體積將檢測(cè)液 A 和 B 混合， 加入 20 μl 混合的檢測(cè)液在膜表面， 通過(guò)蛋白芯片檢測(cè)儀進(jìn)行檢測(cè)， 60 s后拍攝圖像， 進(jìn)行反應(yīng)數(shù)據(jù)分析。

1. 3 結(jié)果判定[2] 根據(jù)C-12 檢測(cè)系統(tǒng)12種腫瘤標(biāo)志物的參考范圍：神經(jīng)元特異性烯醇化酶（NSE）<13.0 ng/ml， 癌胚抗原（CEA）<5.0 ng/ml， 糖類(lèi)抗原125（CA125）<35.0 U/ml， 糖類(lèi)抗原242（CA242）<20.0 U/ml， 鐵蛋白（ferritin）<219.0 ng/ml（女）、<322.0 ng/ml（男）， 糖類(lèi)抗原199（CA199）<35.0 U/ml， 糖類(lèi)抗原153（CA153）<35.0 U/ml， 前列腺特異性抗原（PSA）<5.0 ng/ml， 甲胎蛋白（AFP）<20.0 ng/ml， 人絨毛膜促性腺激素（β-HCG）<3.0 ng/ml， 游離性前列腺特異性抗原（F-PSA）<1.0 ng/ml， 生長(zhǎng)激素（HGH）<7.5 ng/ml。實(shí)驗(yàn)排除溶血、脂血標(biāo)本。其他具體步驟要嚴(yán)格按照C-12上的使用說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作。

1. 4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件SPSS16.0對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行總結(jié)、處理， 計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)， P<0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

良性疾病組與惡性腫瘤組的陽(yáng)性率比較， 惡性腫瘤組的陽(yáng)性率明顯比良性疾病組高（P<0.05）。C-12 蛋白芯片對(duì)惡性腫瘤檢測(cè)的陽(yáng)性率85%， 靈敏度為82%。見(jiàn)表1。

表1 C-12蛋白芯片對(duì)各組的檢測(cè)陽(yáng)性率（n， %）

分組 例數(shù) 陽(yáng)性 陽(yáng)性率

惡性腫瘤組 100 85 85

胃癌 25 20

肺癌 11 9

肝癌 21 19

胰腺癌 15 12

乳腺癌 10 10

直腸癌 8 7

結(jié)腸癌 10 8

良性疾病組 100 9 9

肝臟疾病 32 3

肺部疾病 20 2

婦科疾病 14 1

消化道疾病 26 3

前列腺疾病 8 0

3 討論

生物芯片是近年來(lái)醫(yī)學(xué)界一個(gè)備受矚目的醫(yī)療成果， 可以將人體的各項(xiàng)檢測(cè)變得非常集中化， 而且可對(duì)人體內(nèi)的細(xì)胞進(jìn)行簡(jiǎn)單快速地解讀。生物芯片主要就是采用了微細(xì)加工[3， 4]。雙抗體夾心法的化學(xué)發(fā)光檢測(cè)方法是多腫瘤標(biāo)志物蛋白芯片檢測(cè)系統(tǒng)是基礎(chǔ)， 12種腫瘤標(biāo)志物的抗體被固相基質(zhì)上包被， 將血清中對(duì)應(yīng)的腫瘤標(biāo)志物進(jìn)行捕捉， 與第二抗體結(jié)合， 對(duì)其催化使其產(chǎn)生化學(xué)反應(yīng)的光信號(hào)， 將芯片采取專(zhuān)門(mén)的芯片閱讀儀對(duì)腫瘤標(biāo)志物進(jìn)行定量檢測(cè)。

本研究對(duì)卵巢癌使用多腫瘤標(biāo)志物蛋白芯片進(jìn)行分析和檢測(cè)， 蛋白芯片是一種應(yīng)用較為廣泛生物芯片， 蛋白芯之所以發(fā)光主要就是利用了抗體和抗原特異性的結(jié)合通過(guò)催化化學(xué)反應(yīng)來(lái)進(jìn)行檢測(cè)的。然后利用計(jì)算機(jī)來(lái)判斷熒光的強(qiáng)弱結(jié)果。蛋白芯片技術(shù)避免了過(guò)去分析方法的弱點(diǎn)， 具有快速讀取、高通量和樣本量少的優(yōu)勢(shì)， 對(duì)于原始蛋白的提取物和血液中的蛋白質(zhì)快速進(jìn)行分析， 而且可以對(duì)于血液， 提取多種組織和細(xì)胞中的蛋白質(zhì)信息， 所以廣泛的運(yùn)用于檢測(cè)癌癥， 經(jīng)過(guò)醫(yī)學(xué)研究， 該技術(shù)對(duì)于檢測(cè)腫瘤蛋白質(zhì)水平的變化已經(jīng)成熟， 比起其他的檢測(cè)能夠?qū)δ[瘤特征進(jìn)行反映。雖然生物芯片已經(jīng)成熟但是不可能達(dá)到百分百的效果， 仍會(huì)有一些患者由于病情原因被誤診。畢竟腫瘤患者在不斷地變化之中， 很難預(yù)測(cè)。蛋白芯片檢測(cè)技術(shù)的特異性和敏感性在所有目前存在的檢測(cè)手段中相對(duì)較高， 盡管達(dá)不到百分百的成功率， 但是對(duì)腫瘤做出合理而科學(xué)的檢測(cè)成功率相對(duì)還是很高的。

目前在醫(yī)學(xué)界倡導(dǎo)腫瘤標(biāo)志物聯(lián)合檢驗(yàn)的方法的人占的比率還是較大的， 因?yàn)槟[瘤診斷這種方法可以提高敏感度和特異性， 在適合腫瘤臨床檢測(cè)的同時(shí)， 在臨床上對(duì)腫瘤高?；颊叩捏w檢篩查也具有顯著的意義， 在臨床診斷上C-12芯片法的基本價(jià)值也是顯著的。對(duì)陽(yáng)性血清腫瘤標(biāo)志物的檢驗(yàn)因?yàn)橛辛?2 項(xiàng)指標(biāo)的聯(lián)合所以更加精確。目前所有腫瘤的標(biāo)志物的指標(biāo)會(huì)有所顯示。而對(duì)于單項(xiàng)腫瘤標(biāo)志物如肺癌、 乳腺癌、 胃癌陽(yáng)性比例不高的， 通過(guò)C-12芯片法的聯(lián)合檢測(cè)可以發(fā)現(xiàn)多項(xiàng)腫瘤標(biāo)志物呈陽(yáng)性， 這不僅為臨床治療提供有效的監(jiān)測(cè)指標(biāo)還有助于提高臨床診斷的靈敏度。多腫瘤標(biāo)志物蛋白芯片檢測(cè)系統(tǒng)在臨床中的應(yīng)用具有一定價(jià)值。

參考文獻(xiàn)

[1] 程建平， 張建明， 金躍.多腫瘤標(biāo)志物蛋白芯片檢測(cè)系統(tǒng)在腫瘤診斷與篩查中的應(yīng)用研究.中國(guó)實(shí)驗(yàn)診斷學(xué)， 2008， 1（3）： 1370-1371.

[2] 陳莉彭， 劍雄， 周細(xì)國(guó).多腫瘤標(biāo)志物蛋白芯片檢測(cè)系統(tǒng)在臨床中的應(yīng)用.中國(guó)醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)， 2006， 3（29）：29-30.

[3] 胡興榮， 徐先早， 崔顯念， 等.多腫瘤標(biāo)志物蛋白芯片檢測(cè)系統(tǒng)的應(yīng)用分析.檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)與臨床， 2007， 4（10）：929-930.

[4] 潘振華.多腫瘤標(biāo)志物蛋白芯片檢測(cè)技術(shù)在卵巢癌臨床應(yīng)用中的評(píng)價(jià).現(xiàn)代預(yù)防醫(yī)學(xué)， 2012， 39（24）：6399-6340.

[收稿日期：2014-03-11]endprint