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    多腫瘤標志物蛋白芯片在腫瘤篩查的應用

    2016-11-03 11:33王亞南廖莉婭鄭曉琴
    中國實用醫(yī)藥 2016年25期
    關(guān)鍵詞:篩查腫瘤

    王亞南+廖莉婭+鄭曉琴

    【摘要】 目的 討論12種腫瘤標志物蛋白芯片檢測系統(tǒng)(C-12)在腫瘤篩查的應用。方法 采用C-12型多腫瘤標志物蛋白芯片檢測試劑盒檢測1950例健康體檢者及336例住院患者血清中12種腫瘤標志物的水平, 結(jié)合臨床情況, 分析比較檢出陽性率和臨床腫瘤診斷符合率。結(jié)果 健康體檢者C-12檢測指標陽性率5.13%低于住院患者26.49%(P<0.05);陽性健康體檢者腫瘤檢出率56.52%與陽性住院患者79.78%比較差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.05);蛋白芯片檢測結(jié)果陽性者與臨床診斷腫瘤者其符合率達71.85%。結(jié)論 多腫瘤標志物蛋白芯片檢測系統(tǒng)是腫瘤高危人群篩查的重要手段, 可用于臨床腫瘤的輔助診斷、預后及療效觀察。

    【關(guān)鍵詞】 多腫瘤標志物;蛋白芯片;腫瘤;篩查

    DOI:10.14163/j.cnki.11-5547/r.2016.25.001

    【Abstract】 Objective To discuss application of multi-tumor marker protein chip detection system (C-12) in tumor screening. Methods C-12 multi-tumor marker protein chip detection kit was applied to detect 12 serum tumor markers levels in 1950 healthy people and 336 hospitalized patients. Analysis was made in accordance with their clinical situation on positive rate and clinical tumor diagnostic accordance rate. Results Healthy people had lower C-12 indexes positive rate as 5.13% than 26.49% in hospitalized patients (P<0.05). The difference of tumor detection rate between 56.52% in positive healthy people and 79.78% in positive hospitalized patients had statistical significance (P<0.05). Coincidence rate was 71.85% between positive cases in protein chip detection and cases with tumor by clinical diagnosis. Conclusion As an important screening method for tumor high risk group, multi-tumor marker protein chip detection system can be applied in assistant clinical tumor diagnosis, prognosis and curative effective observation.

    【Key words】 Multi-tumor marker; Protein chip; Tumor; Screening

    腫瘤的發(fā)病率逐年提高, 且發(fā)病年齡有年輕化趨勢, 早期診斷相對困難, 嚴重危害人類健康, 腫瘤的早期發(fā)現(xiàn)和診斷至關(guān)重要[1]。由于未能及早發(fā)現(xiàn)、早診斷和早治療, 大多數(shù)患者在確診為腫瘤時, 往往到了中晚期, 此時不僅病情嚴重、癥狀復雜、痛苦較大、體質(zhì)下降、生存質(zhì)量低下, 而且臨床治愈率較低, 因而早發(fā)現(xiàn)、早診斷、早治療是提高患者生存率的關(guān)鍵[2]。C-12型多腫瘤標志物蛋白芯片系統(tǒng)是一種以雙抗體夾心法為基礎(chǔ)的化學發(fā)光檢測方法, 12種腫瘤標志物的抗體被包被在固相基質(zhì)上, 捕捉被檢測血清樣本中對應的腫瘤標志物, 結(jié)合第二抗體, 然后催化化學反應進而產(chǎn)生光信號, 最后用專門的芯片閱讀儀讀取光信號, 對腫瘤標志物進行定量檢測。多腫瘤標志物蛋白芯片檢測系統(tǒng)具備高通量、高準確性、快速且微型化的特點, 目前被廣泛應用[3]。本文討論C-12型多腫瘤標志物蛋白芯片檢測系統(tǒng)在腫瘤篩查的應用, 現(xiàn)報告如下。

    1 資料與方法

    1. 1 一般資料 檢測對象為中山大學附屬第五醫(yī)院2015年1~10月的2286例受試者, 其中健康體檢者1950例, 住院患者336例, 男1209例, 女1077例。

    1. 2 儀器與試劑 試劑采用上海銘源數(shù)康生物芯片有限公司生產(chǎn)的C-12型多腫瘤標志物蛋白芯片試劑盒, 包括C-12蛋白芯片集成板1塊, 濃縮洗滌液1瓶, 反應液1瓶, 標準品系列(標準品0、標準品4各1瓶, 凍干品), 定量質(zhì)控品1瓶, 復溶劑1瓶, 檢測液A和檢測液B各1瓶。檢測儀器HD-2001A生物芯片閱讀儀、生物芯片圖像分析系統(tǒng)軟件均由上海銘源數(shù)康生物芯片有限公司提供。

    1. 3 檢測方法

    1. 3. 1 標本采集 所有受試者均于清晨空腹采集靜脈血2 ml, 不抗凝。離心后取血清保存于4℃冰箱待測, 7 d內(nèi)完成檢測, 除外溶血、脂血和黃疸標本。

    1. 3. 2 實驗步驟 采用C-12蛋白芯片試劑盒, 嚴格按照操作說明書將試劑配套標準品、質(zhì)控品復溶, 取標準品按比例稀釋并進行標記。用200 μl的加樣槍依次吸取校準品0、校準品1、校準品2、校準品3、校準品4、定量質(zhì)控品、待測樣品各100 μl加入芯片各反應孔內(nèi), 避免產(chǎn)生氣泡, 每吸取一個樣本應更換一個槍頭;將已加樣完成的芯片, 平放固定于恒溫搖床內(nèi), 設(shè)定恒溫搖床運行參數(shù)為37℃、25 r/min, 溫育振蕩30 min;棄去芯片反應孔內(nèi)的液體, 并用洗滌液沖洗1次, 將芯片放入洗盒中加入洗滌液, 并將洗盒直立固定于恒溫搖床內(nèi), 設(shè)定恒溫搖床運行參數(shù)為37℃、25 r/min, 溫育振蕩8 min, 棄去洗盒內(nèi)洗滌液, 共洗滌4次;在芯片各反應孔內(nèi)加入100 μl反應液, 避免產(chǎn)生氣泡;第2次溫育與溫育第1次方法相同;棄去芯片反應孔內(nèi)液體, 并用洗滌液進行沖洗1次, 剝離蛋白芯片集成塊的上部將蛋白芯片集成塊下部放入洗盒中加入洗滌液, 并將洗盒直立固定于恒溫搖床內(nèi), 設(shè)定恒溫搖床運行參數(shù)為37℃、25 r/min, 溫育震蕩8 min, 棄去洗盒內(nèi)洗滌液, 共洗滌4次;將檢測液A和檢測液B混合15 min后制成混合液, 將洗滌完成的蛋白芯片集成塊拍干, 并在每個芯片的膜表面加入20 μl檢測液A和檢測液B的混合液靜置1.5 min;將加有檢測液A和B混合液蛋白芯片集成塊下部放入生物芯片閱讀儀, 軟件將自動讀取圖像(時間60 s)、作標準曲線、分析各被測樣本的測試結(jié)果并打印數(shù)據(jù)報表。全部樣本均應用同一方法在同一實驗室進行檢測。

    1. 4 結(jié)果判斷 凡有1項及1項以上指標超出試劑盒提供正常參考范圍即定性為“結(jié)果陽性”, 以人次計算, 同時記錄其檢測數(shù)值。

    1. 5 統(tǒng)計學方法 采用SPSS18.0統(tǒng)計學軟件處理數(shù)據(jù)。計數(shù)資料以率(%)表示, 采用χ2檢驗。P<0.05表示差異具有統(tǒng)計學意義。

    2 結(jié)果

    2. 1 1950例健康體檢者中, 不同程度超出參考值范圍的有100例, 各腫瘤標志物的陽性率以糖類抗原(CA)199、甲胎蛋白(AFP)、CA125、CA724較高, 神經(jīng)元特異性烯醇化酶(NSE)、癌胚抗原(CEA)、CA242、鐵蛋白(Ferritin)、人絨毛膜促性腺激素(β-HCG)、游離型前列腺特異性抗原(Free-PSA)、前列腺特異性抗原(PSA)、CA153陽性檢出率都較低。見表1。

    2. 2 1950例健康體檢者中100例檢測結(jié)果陽性, 336例住院患者中89例檢測結(jié)果為陽性, 住院患者檢測陽性率顯著高于健康體檢者(P<0.05)。見表2。

    2. 3 100例陽性健康體檢者后期隨訪調(diào)查難度較大, 不能完全統(tǒng)計, 故需要排除部分不在本院進行后續(xù)檢查治療以及可能去其他醫(yī)院求醫(yī)的例數(shù), 來本院進行后續(xù)檢查治療的共有46例, 46例陽性體檢者中經(jīng)病理學、影像學等被確診為腫瘤的為26例, 89例陽性住院患者經(jīng)病理學、影像學等被確診為腫瘤的為71例, 住院患者陽性與健康體檢者腫瘤檢出率比較差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。見表3。蛋白芯片檢測結(jié)果陽性者與臨床診斷腫瘤者其符合率達71.85%(97/135)。

    2. 4 住院患者和健康體檢者被確診為惡性腫瘤的多以2項指標及2項指標以上同時升高為主, 未確診為腫瘤的例數(shù)多以單項指標升高為主, 住院患者和健康體檢者C-12檢測指標陽性情況分析見表4。

    3 討論

    惡性腫瘤是危害人類健康的重大原因之一, 但腫瘤中、早期無特異性癥狀, 故常常漏診, 大多數(shù)患者在確診為腫瘤時, 往往處于腫瘤晚期, 已喪失手術(shù)治療的最佳機會, 同時缺乏有效的治療手段[4]。因此, 腫瘤的早發(fā)現(xiàn)對腫瘤的預防和治療至為關(guān)鍵。理想中的腫瘤標志物應具有以下特點:①較高敏感性, 可以在早期就發(fā)現(xiàn)腫瘤微小病變;②高特異性, 可根據(jù)腫瘤標志物的類型不同進行腫瘤定位和鑒別診斷;③濃度與腫瘤大小相關(guān), 與病情程度相關(guān)性高;④濃度變化可直觀反映腫瘤的治療效果, 預后判斷;⑤易于檢測。然而, 目前尚未有任何一種腫瘤標志物可以完全滿足以上的條件, 且單項指標檢測特異性低, 靈敏度低, 因此在臨床實踐中, 常將多項相關(guān)的標志物組成聯(lián)合標志物, 來進一步提高輔助診斷臨床腫瘤的準確率[5]。

    本材料采用的C-12蛋白芯片檢測系統(tǒng)通過同時定量檢測被檢者血清中的12種腫瘤標志物的含量, 聯(lián)合受試者的臨床狀況, 分析對比檢出陽性率和臨床腫瘤診斷符合率, 結(jié)果表明12種腫瘤標志物聯(lián)合檢測有助于早期腫瘤篩查。C-12具有高信息量、高通量、低成本等特點, 且檢測方法簡便快速, 創(chuàng)傷性小, 成本較化學發(fā)光低得多, 體現(xiàn)了明顯的優(yōu)越性, 可廣泛應用于健康體檢人群和腫瘤高危人群的早期篩查[6]。需注意的是腫瘤標志物檢測結(jié)果增高并不等于肯定得了癌癥, 而結(jié)果正常也不能完全排除癌癥, 必要時需要定期復查和隨訪。一旦出現(xiàn)陽性結(jié)果, 應及時進行影像學等相關(guān)輔助診斷檢測, 必要時進行病理學活檢來確診, 并定期復查和隨訪, 以達到早發(fā)現(xiàn), 早診斷, 早治療, 提高腫瘤生存率的目的[7]。

    因為C-12蛋白芯片檢測系統(tǒng)同時檢測12項腫瘤標志物的含量, 會受到實驗室條件、個人體質(zhì)和疾病狀態(tài)等多方面因素的影響, 而要獲得對腫瘤診斷可信度高的檢測結(jié)果, 就需要盡量去除自身疾病狀態(tài)以外的影響因素。隨年齡的增長, 部分腫瘤標志物也會相應發(fā)生改變, 主要是CA242、CEA、PSA、Free-PSA;飲酒則會對AFP結(jié)果有影響;吸煙與CA199指標升高有關(guān), 是其獨立危險因素。另外, 類風濕因子、異噬性抗體、醫(yī)源性誘導的抗鼠IgG的抗體、標本溶血等因素也會影響腫瘤標志物的檢測結(jié)果。

    腫瘤標志物是反映腫瘤存在的化學類物質(zhì)。許多腫瘤標志物并非腫瘤組織特異表達, 正常組織及良性疾病中亦有表達;此外一種腫瘤可分泌多種腫瘤標志物, 而不同的腫瘤或同種腫瘤的不同組織類型也可分泌相同的腫瘤標志物, 且在不同的腫瘤患者體內(nèi), 腫瘤標志物的質(zhì)和量變化也較大, 所以目前為止腫瘤標志物的檢測尚不能替代組織病理學和影像學等臨床檢查作為腫瘤疾病判斷的金指標[8]。對于陽性檢測結(jié)果, 應定期復查, 動態(tài)觀察, 特別是檢測值略高于參考值者, 不要做出過度反應, 以免造成不必要的經(jīng)濟和思想負擔[9]。對于腫瘤標志物陰性者, 也不完全代表不會發(fā)生腫瘤, 出現(xiàn)臨床癥狀后, 應及時通過其他醫(yī)學手段進行檢查[10]。12種腫瘤標志物蛋白芯片檢測結(jié)果陽性者與臨床腫瘤診斷符合率較高, 該方法可用于臨床腫瘤的早期篩查與復發(fā)檢查, 尤其是腫瘤高危人群的防癌普查具有重要意義。

    參考文獻

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    [收稿日期:2016-06-21]

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