畜禽血液采集及血清分離技術(shù)

劉 艷

(甘肅省張掖市甘州區(qū)動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，734000)

近年來(lái)各級(jí)畜牧獸醫(yī)部門(mén)，每年都需要對(duì)畜禽進(jìn)行血樣采集及血清分離工作，如血常規(guī)檢查、血片制作、豬附紅細(xì)胞體病檢測(cè)、小反芻獸疫抗體檢測(cè)、病原學(xué)檢查，尤其是一年數(shù)次的口蹄疫、禽流感和新城疫等抗體（免疫抗體、感染抗體）監(jiān)測(cè)及范圍廣泛的布魯氏桿菌病檢疫監(jiān)測(cè)等。在工作中發(fā)現(xiàn)，由于采集方法錯(cuò)誤，血樣保存環(huán)境不當(dāng)，導(dǎo)致技術(shù)人員在采血及分離血清時(shí)，時(shí)常有失敗現(xiàn)象發(fā)生，如溶血、分離不出血清、血清如膠凍樣物質(zhì)以及腐敗等情況發(fā)生，從而反復(fù)采血而引起養(yǎng)殖場(chǎng)戶的反感、不配合甚至拒絕，也造成人財(cái)物的浪費(fèi)，為此，筆者依據(jù)從事多年的血樣采集和血清工作經(jīng)驗(yàn)，在畜禽采血和分離血清技術(shù)方面的一些做法與大家探討。

1 材料與方法

1.1 供試材料

保定用牛韁繩、麻繩、牛鼻鉗，醫(yī)用鑷子、止血鉗、醫(yī)用膠貼、醫(yī)用止血帶、剪毛剪，70 %～75 %酒精、5 %～10 %碘酊、滅菌干棉球，消毒18#、16#、12#及9#針頭，采血管或潔凈干燥的青霉素瓶、一次性靜脈采血真空管及針頭一次性注射器，工作服、帽、口罩、一次性手套、膠鞋、鞋套，采血登記表、記錄用筆、玻璃鉛筆及冷藏箱、消毒液（用于工作人員及器械消毒）。

1.2 采血方法

1.2.1 牛頸靜脈采血法：穿戴好工作服、帽、口罩、膠鞋及手套等，用韁繩保定好牛，如牛跳動(dòng)不安，需要夾上牛鼻鉗；采血部位：其解剖位置為牛頸靜脈溝；采血部位先用剪毛剪剪毛后，用10 %碘酊棉球消毒，再以75 %酒精棉球脫碘消毒；如在頸部左側(cè)采血（以左側(cè)為例），用左手的食指、中指及無(wú)名指（或半握拳）壓住采血部位稍下（向心）端的頸靜脈，使靜脈回流受阻，靜脈怒張，這時(shí)用右手拇指、食指及中指持緊消毒后并干燥的18#針頭，用飛針?lè)绞皆腩i靜脈（如用真空采血方法，因針頭尖銳且較細(xì)，輕輕即可刺入頸靜脈，當(dāng)針頭后方見(jiàn)血后，應(yīng)迅速將連接針頭的另一端插入真空管），血液便可從針頭流出（或滴出），接血時(shí)采血管應(yīng)稍傾斜，使血液沿管壁徐徐流入采血管中，切勿使血液直接滴入采血管底部，以免產(chǎn)生氣泡和因紅細(xì)胞破裂而引起溶血。一般采集5 mL 血樣即可，然后迅速拔出針頭，立即用75 %酒精棉球按壓止血5 s 左右，再用10 %碘酊消毒傷口。采血完畢后，將采血管平放或斜置，待血液完全凝固后再放入冷藏箱。

1.2.2 牛尾中靜脈采血法：牛尾靜脈位于牛尾腹側(cè)面的中心線皮下位置，因離尾根大約20 cm 處?kù)o脈較粗且較淺，所以此處為采血最佳部位。助手將牛牽好，采血者左手托起牛尾巴，右手對(duì)采血部位消毒后，持帶有5 號(hào)針頭的一次性注射器，右手食指控制針頭深度，由下向上垂直刺入牛尾腹側(cè)中心線位置約0.5 cm 見(jiàn)有回血即可抽血，一般采用5 mL 即可，拔出采血針，用酒精棉球壓一下針孔防出血。

1.2.3 羊的血液采集方法：人騎在羊的肩胛部，兩腿稍用力，使羊站立，兩手握住羊頭，輕輕使羊頭彎于一側(cè)并使下顎上抬，以便于采血者在另一側(cè)操作；采血部位是：羊的頸靜脈；采血部位剪毛消毒后，用12#針頭，輕輕刺入頸靜脈即可，也可用較為方便的真空采血法。羊也可采用側(cè)臥保定的方法。其它與牛的頸靜脈采血方法相同。

1.2.4 豬的耳緣靜脈采血方法：如果是體型較大的公（母）豬及大中豬的采血，將結(jié)實(shí)的麻繩系個(gè)活扣，套在豬的上顎犬齒上，將麻繩的另一頭系緊于圈門(mén)的鋼筋（或其它較為牢固的物體）上，繩子拴短一些，使豬的頭頸部與水平面呈30 度以上角度，以減少豬的活動(dòng)范圍；助手用止血帶扎緊（或用手握緊）豬耳根部并幫助保定，采血者挑選怒張較好的耳緣靜脈，經(jīng)剪毛消毒后，用真空采血針頭（或12#針頭）刺入血管后，用醫(yī)用膠貼固定針頭，以防豬晃動(dòng)導(dǎo)致針頭移位；如是小豬，可采用一人抱于懷中的保定方法；無(wú)論大小豬，也可側(cè)臥保定進(jìn)行；其它與牛的頸靜脈采血相同。

1.2.5 豬的前腔靜脈采血方法：因豬體格不同，前腔靜脈的血管粗細(xì)及深淺也不同，所以，使用針頭的規(guī)格是不一樣的；體型較大的公（母）豬，宜選用16～18#、長(zhǎng)度為50 mm 針頭；30 kg 以上的中大豬，選用12～16#、長(zhǎng)度40 mm 針頭為宜；10 kg～30 kg小豬，可選用9～12#、長(zhǎng)度25 mm 針頭；10 kg 以下仔豬，用9#、長(zhǎng)度20 mm 針頭。保定方法與豬耳緣靜脈采法相同（也可采用側(cè)臥保定方式）；采血的解剖部位是：胸骨柄、胸頭肌與胸骨舌骨肌的起始部位所形成的凹陷部。豬的前腔靜脈，越向頭部，靜脈分布越淺表，但隨著分支增多，也逐漸變細(xì)；而越是向心端血管越粗，但分布越深。因此，采血部位的選擇要適當(dāng)，小豬的采血部位應(yīng)向向心端近一些為好，而公（母）豬及中大豬血管較粗大，可稍靠前一些。20 kg 以下的小豬在兩前肢與氣管交匯處采血為宜，體型較大的公母豬及20 kg 以上中大豬，可選在頸部最低凹處采血較好；術(shù)部常規(guī)剪毛消毒后, 采血者手持一次性注射器（或真空采血器），垂直稍偏向胸腔方向刺入（大中豬，注射器與頭部呈120°左右進(jìn)針），同時(shí)做抽吸動(dòng)作，調(diào)整進(jìn)針深度,見(jiàn)有回血即慢慢抽吸，采足需要的血量后，用滅菌棉球緊壓針孔處，迅速拔出針頭，壓迫5 s 左右，防止出血，再用碘酊消毒傷口，其它與牛的頸靜脈采血相同。

1.2.6 禽翅靜脈采血法：將禽側(cè)臥于消毒后的塑料布上，助手的一只手抓緊禽的后腳骨部分，另一只手壓在禽的背部將其保定好，采血者左手握緊（或止血帶扎住）雞翅根部，使禽翅靜脈怒張，用真空采血針頭輕輕刺入，當(dāng)采出血時(shí)，要注意扶好針頭，以免刺穿血管；如用一次性注射器抽血方式，應(yīng)掌握吸取速度，速度過(guò)快會(huì)將翅靜脈吸扁而不能采出血；其它與牛頸靜脈采血相同。

1.2.7 禽心臟采血法：如禽已處于頻死期或認(rèn)為有必要時(shí)，可進(jìn)行心臟采血。禽采用右側(cè)臥方式保定（左側(cè)向上）；采血部位是：禽胸骨脊前端與背部下凹陷處連線的中點(diǎn)；常規(guī)消毒后，根據(jù)禽的大小，選用12～18#、長(zhǎng)度為5 cm 的針頭，用一次性注射器或真空采血管采血，針頭垂直或稍向前方進(jìn)針2 cm～3 cm，抽吸便可采出血液。

1.2.8 犬的采血方法：犬的采血安全很重要，首要是防止犬咬傷人。用質(zhì)量好、直徑1 cm 左右的鋼筋，焊一個(gè)尺寸放大了的、似牛鼻鉗樣式的保定鉗；焊接規(guī)格為：前端的圓弧張開(kāi)到最大時(shí)，直徑約30 cm 左右，合攏后呈長(zhǎng)約25 cm、寬約10 cm 的橢圓形，后面的力臂部分長(zhǎng)度不小于1.2 m，保定鉗整體長(zhǎng)度應(yīng)不小于1.5 m（以保持人與犬之間的安全距離），在保定鉗的圓弧部分套上塑料膠管（以減少對(duì)犬的傷害）；保定犬時(shí)，應(yīng)在犬主人的配合下，夾在犬第2 頸椎處的頸部，用力將犬壓在地上（尤其是保定較為兇猛的犬時(shí)要用力，但需注意力度和方法，防止犬窒息），保定員及犬主按住軀體及前后肢（或用繩子拴住）；采血部位是：犬的頸靜脈或后肢脛部下1/3 外側(cè)淺表皮下的隱靜脈，經(jīng)常規(guī)剪毛消毒后采血即可。

1.3 血樣保存及血清分離技術(shù)

將采集的血樣趁未凝固前平放或斜置，以增加血清析出面，嚴(yán)禁晃動(dòng)采血管，以防溶血；待血液完全凝固后，將采血管置于冷藏箱內(nèi)，冬季置于較為溫暖的地方，切忌凍結(jié)；夏季置于陰涼處，以防腐敗。

采集的血液凝固后,在室溫下12 h 內(nèi)即可析出血清，在炎熱的夏季，3 h～6 h 即可充分析出血清，此時(shí)應(yīng)及時(shí)將血清移出，以防腐敗及因晃動(dòng)采血管等因素而造成溶血現(xiàn)象；有時(shí)血清析出量少或未析出血清的，可把凝固后12 h 以上的全血，置于離心機(jī)內(nèi)，離心分離血清（3000 r/min，離心時(shí)間為2 min），使血清析出，待血清析出后，用移液器小心（移液頭尖端部勿觸及凝血塊，以防影響血清質(zhì)量）將血清移入另一潔凈、干燥、無(wú)菌試管中。分離后得到的血清，應(yīng)盡快送到實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行檢測(cè)，如果不需要盡快檢測(cè)血清需要盡快冷凍保存。

1.4 常見(jiàn)不良“采血法”導(dǎo)致的結(jié)果

1.4.1 不剪毛、不消毒導(dǎo)致皮毛上的雜物及病原微生物等污染針頭、掉入采血容器，影響血清質(zhì)量，造成動(dòng)物發(fā)生感染，而造成養(yǎng)殖戶的損失。

1.4.2 用自來(lái)水煮沸消毒的針頭不經(jīng)干燥、不用力甩凈針頭內(nèi)的水、或不用滅菌生理鹽水沖洗，因?yàn)樗c血液是不相容的，采集的血液很容易出現(xiàn)溶血現(xiàn)象。

1.4.3 用1 個(gè)針頭采多頭只畜禽導(dǎo)致血清質(zhì)量差及溶血，也會(huì)造成畜禽間病菌交叉感染，導(dǎo)致畜禽感染患病。

1.4.4 用酒精浸泡后的針頭直接采血容易造成溶血。

1.4.5 個(gè)別人員專業(yè)技術(shù)素質(zhì)差，采不出血就用采血管直接在出血的皮膚處接、或未剪毛時(shí)在毛尖上接血，更有甚者，將畜禽屠宰后用采血管接，這時(shí)的組織液、各種雜物隨同血液進(jìn)入采血管，這樣的血液含有大量的微生物、雜質(zhì)等，會(huì)導(dǎo)致血液受到污染，發(fā)生溶血，分離出的血清呈膠凍樣，這樣的“血清”是不能用的。

2 討論與分析

2.1 采血人員要合理分工如采血員、保定員、記錄員、器械遞送員等，不要慌亂，不可漏采和重復(fù)采，注意人畜安全。

2.2 采血時(shí)間應(yīng)在早晨喂飼前或停食(但要保證充足的飲水)后6 h 進(jìn)行，以免出現(xiàn)血清混濁等質(zhì)量問(wèn)題。

2.3 使用一次性注射器、連試管式的真空采血器，避免因器械消毒不嚴(yán)，操作人員直接接觸動(dòng)物血液，導(dǎo)致受到病原微生物感染，使人畜患病。

2.4 在采血和分離血清時(shí)做到①采血針頭和采血管潔凈、干燥、無(wú)菌；②采血過(guò)程中確保人畜安全；③采血時(shí)按“畜（禽）采血登記表”逐一詳細(xì)登記；④采血時(shí)必須無(wú)菌操作，不溶血、無(wú)污染、無(wú)腐敗；⑤做到表、號(hào)、血、畜四統(tǒng)一，以防混淆。

2.5 牛尾中靜脈采血法的優(yōu)點(diǎn)是對(duì)牛應(yīng)激反應(yīng)微小，牛不需要特殊的保定, 此種操作方法相對(duì)比較安全，不影響乳牛的產(chǎn)奶量；操作簡(jiǎn)便，采血人員容易掌握；具有單人即可操作、采血快速、保定簡(jiǎn)單、防止人畜受傷等優(yōu)點(diǎn)。缺點(diǎn)是不適用于犢牛的血液采集，會(huì)造成犢牛尾部血管的永久性損傷。

2.6 通過(guò)實(shí)踐豬前腔靜脈采血法較耳緣靜脈采血法更為方便、快捷。

2.7 市面上出售的“捕豬器”存在的缺點(diǎn)：多為細(xì)鋼絲繩材質(zhì)，質(zhì)地堅(jiān)硬強(qiáng)度大，對(duì)豬的牙齒、牙齦、口腔粘膜等部位的損傷大，會(huì)影響豬幾天甚至十幾天的生長(zhǎng)發(fā)育，有的還導(dǎo)致感染死亡，因此，建議改用質(zhì)地結(jié)實(shí)，相對(duì)柔軟的麻繩來(lái)進(jìn)行保定較好。