點(diǎn)地梅中總黃酮及總?cè)坪康臏y(cè)定

摘要：分別以蘆丁及齊墩果酸為對(duì)照品，用超聲輔助提取、分光光度法測(cè)定了點(diǎn)地梅（Androsace umbellata）總黃酮及總?cè)坪?。結(jié)果表明，點(diǎn)地梅全草總黃酮及總?cè)频南鄬?duì)含量分別為6.863%和8.832%， RSD分別為1.47%和1.02%；盧丁對(duì)照品在0.013 8~0.220 0 mg/mL范圍呈良好線性關(guān)系，回歸方程為y=10.27x+0.013 8，R2為0.999 9；齊墩果酸對(duì)照品在0~100 mg/mL范圍內(nèi)呈良好線性關(guān)系，回歸方程為y=0.011 3x-0.017 7，R2為0.999 1。該法操作簡(jiǎn)單、準(zhǔn)確，相關(guān)結(jié)果可為點(diǎn)地梅的開發(fā)及利用提供參考依據(jù)。

關(guān)鍵詞：點(diǎn)地梅（Androsace umbellata）；總黃酮；總?cè)?；分光光度?/p>

中圖分類號(hào)：TS201文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：Ａ文章編號(hào)：0439－８114（２０14）08－1902-03

Determination of Total Flavonoids and Triterpenoid in Androsace umbellata

HE Ke-qun

（Chemistry and Environmental Science Department of Guizhou Minzu University， Guizhou 550025， Guiyang， China）

Abstract: The total flavonoids and total triterpenoid from Androsace umbellata were determined by spectrophotometry based on the standard curves of rutin and oleanolic acid. The results showed the percentage of total flavonoids and total triterpenoid in Androsace umbellata were 6.863% （RSD=1.47%） and 8.832% （RSD=1.02%）， respectively. There was a good linearity （R2= 0.999 9） in the range of 0.013 8~0.220 0 mg/mL for rutin with the regression equation of y=10.27x+0.013 8. When the similar linearity of oleanolic acid （R2=0.999 1） was in the range of 0~100 mg/mL （R2=0.999 1）， the regression equation was y=0.011 3x-0.017 7. This method is simple and reliable for detecting total flavonoids and total triterpenoid in Androsace umbellate. It will provides a reference for the exploitation and utilization of the Androsace umbellata.

Key words: Androsace umbellata; total flavonoids;total triterpenoid; spectrometry

點(diǎn)地梅（Androsace umbellata）是報(bào)春花科點(diǎn)地梅屬草本植物，又名天星草、頂珠草、佛頂珠、地胡椒、銅錢草、白花草、喉嚨草、百花珍珠草等，分布于我國東北、華北及秦嶺以南各省區(qū)［1，2］。點(diǎn)地梅以全草入藥，具有清熱解毒，消腫止痛功效；主要用于扁桃腺炎、咽喉炎、口腔炎、牙痛、急性結(jié)膜炎、跌打損傷等的治療［1，2］。根據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，點(diǎn)地梅含有黃酮、三萜皂苷、酚苷及揮發(fā)油等物質(zhì)［2-7］。本試驗(yàn)分析了點(diǎn)地梅全草總黃酮及總?cè)坪?，相關(guān)結(jié)果將為其開發(fā)和利用提供參考。

1材料與方法

1.1材料與試劑

點(diǎn)地梅全草，采自云南省云龍縣，標(biāo)本保存于貴州民族大學(xué)化學(xué)與環(huán)境科學(xué)學(xué)院藥學(xué)教研室。

氫氧化鈉、亞硝酸鈉、硝酸鋁、無水乙醇、冰醋酸、香草醛、高氯酸均為分析純?cè)噭?，蘆?。ā?8%）及齊墩果酸（≥98%）對(duì)照品均購自貴州迪大科技有限責(zé)任公司。

1.2儀器

756PC型紫外-可見分光光度計(jì)（上海舜宇恒平科學(xué)儀器有限公司），METTLERAE240型電子分析天平（上海天平儀器廠），BGZ-30型電熱鼓風(fēng)干燥箱（上海博迅實(shí)業(yè)有限公司醫(yī)療設(shè)備廠），SG3200HE型超聲清洗儀（上海冠特超聲儀器有限公司），數(shù)顯恒溫水浴鍋（常州博遠(yuǎn)實(shí)驗(yàn)分析儀器有限公司）

1.3方法

1.3.1點(diǎn)地梅供試液的提?。?］將自然晾干的點(diǎn)地梅于（60±1）℃烘干5 h，精確稱取干燥、粉碎（過40目篩）的點(diǎn)地梅粉末2.000 g，按1∶20的固液比（m/V）用無水乙醇，超聲提取2次，每次提取60 min，超聲頻率40 kHz，功率150 W，提取結(jié)束后，合并提取液，過濾冷卻，用無水乙醇定容至100 mL，搖勻備用。

1.3.2總黃酮的測(cè)定及重復(fù)性試驗(yàn)總黃酮的測(cè)定及重復(fù)性試驗(yàn)參照文獻(xiàn)［9］。

1.3.3總?cè)茦?biāo)準(zhǔn)溶液的制備及測(cè)定波長(zhǎng)的選擇稱取65 ℃干燥至恒重的齊墩果酸20.00 mg，溶解后以無水乙醇定容至100 mL搖勻，配制200 mg/mL溶液；吸取齊墩果酸標(biāo)準(zhǔn)溶液和點(diǎn)地梅提取液各1.00 mL，分別置于2支10 mL比色管中，于85 ℃揮干溶劑，冷卻，加入5%（m/V）香草醛-冰醋酸0.500 mL，再分別加入高氯酸1.00 mL，搖勻，70 ℃水浴20 min，取出，在冰水浴中冷卻，用冰醋酸稀釋至刻度，搖勻，靜置5 min。以試劑空白建立基線，在400~700nm掃描波長(zhǎng)，確定最大吸收波長(zhǎng)［10-13］。

1.3.4齊墩果酸標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制吸取濃度200 mg/mL的齊墩果酸標(biāo)準(zhǔn)溶液0、1.00、2.00、3.00、4.00、5.00 mL分別置于6支10 mL比色管中，以下操作同1.3.3“于85 ℃揮干溶劑”，以試劑空白為參比，于540 nm下測(cè)定吸光度，以吸光度為縱坐標(biāo)，齊墩果酸質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線［10-13］。

1.3.5樣品測(cè)定量取點(diǎn)地梅乙醇提取液1.00 mL于10 mL比色管中，以下操作同“1.3.3”，樣品液于540 nm波長(zhǎng)下測(cè)得點(diǎn)地梅提取液的吸光度，代入回歸方程得點(diǎn)地梅的總?cè)祁惢衔餄舛?，并?jì)算干燥藥材中總?cè)坪浚?0-13］。

1.3.6重復(fù)性試驗(yàn)稱取點(diǎn)地梅樣品5份，按含量測(cè)定方法測(cè)定，計(jì)算平均含量。

1.3.7加標(biāo)回收試驗(yàn)量取點(diǎn)地梅提取液1.00 mL 3份，再分別精確加入齊墩果酸標(biāo)準(zhǔn)溶液（200 mg/mL）1.00 mL，測(cè)定后計(jì)算加標(biāo)回收率。

2結(jié)果與分析

2.1總黃酮的測(cè)定結(jié)果

以吸光度為縱坐標(biāo)，蘆丁質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線（圖1），得方程y=10.27x+ 0.013 8，R2=0.999 9，結(jié)果表明，蘆丁在0.013 8~0.220 0 mg/mL范圍內(nèi)吸光度與質(zhì)量濃度呈良好線性關(guān)系。

在加顯色劑后，蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液和點(diǎn)地梅樣品溶液顯色后在510 nm處均有較平緩的吸收峰，適于定量測(cè)定，故將測(cè)定波長(zhǎng)選定為510 nm。5次測(cè)定的點(diǎn)地梅樣品中總黃酮含量為6.863%，RSD為1.47%，精密度高。

點(diǎn)地梅中總黃酮加標(biāo)回收試驗(yàn)結(jié)果見表1。由表1可知，總黃酮測(cè)定的平均加標(biāo)回收率為95.1%，RSD為1.39%，表明該方法適用于點(diǎn)地梅樣品中總黃酮的測(cè)定。

2.2總?cè)频臏y(cè)定結(jié)果

齊墩果酸及點(diǎn)地梅提取液顯色后在540 nm均有最大吸收，故以540 nm作為總?cè)频臏y(cè)定波長(zhǎng)。以吸光度為縱坐標(biāo)，齊墩果酸質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線（圖2），得方程y=0.011 3x-0.017 7，R2=0.999 1，齊墩果酸濃度在0~100 mg/mL范圍內(nèi)吸光度與質(zhì)量濃度線性關(guān)系良好。

5次測(cè)定的點(diǎn)地梅樣品中總?cè)频钠骄繛?.832%，RSD為1.02%，精密度較高。由表2可知，總?cè)频钠骄訕?biāo)回收率為92.6%，RSD為7.2%，表明該方法適用于點(diǎn)地梅樣品中總?cè)坪康臏y(cè)定。

３小結(jié)

點(diǎn)地梅是我國西南地區(qū)少數(shù)民族的常用草藥，但迄今為止，其資源還未充分開發(fā)和利用。三萜酸類及黃酮類物質(zhì)具有廣泛的生理活性，如抗腫瘤、抗菌、抗病毒、抗炎、降低膽固醇、降血糖［１４，１５］、強(qiáng)心、降血脂、抗氧化、提高免疫力等［１６］，分析藥用植物的總?cè)扑峒翱傸S酮含量將有助于深入開發(fā)相關(guān)藥用資源。本試驗(yàn)分析了點(diǎn)地梅的總黃酮及總?cè)坪?，結(jié)果表明點(diǎn)地梅干燥全草總黃酮及總?cè)坪糠謩e為６．８６３％和８．８３２％，為其開發(fā)及利用提供科學(xué)參考。

參考文獻(xiàn)：

［１］ 云南省衛(wèi)生廳．云南中草藥［Ｍ］．昆明：云南人民出版社，１９７１．

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［９］ 何可群，盧文蕓，李相興．貴州鼠尾草的總黃酮含量測(cè)定［Ｊ］．貴州農(nóng)業(yè)科學(xué)，２０１３，４１（１）：７７－７９．

［１０］ 劉玉明，柴逸峰，婁子洋，等．分光光度法測(cè)定藍(lán)桉果實(shí)總?cè)扑幔郏剩荩袊t(yī)院藥學(xué)雜志，２００５，２５（１）：４－６．

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［１２］ 張雁冰，王克讓，劉宏民．馬桑葉中總?cè)扑岬暮繙y(cè)定［Ｊ］．時(shí)珍國醫(yī)國藥，２００６，１７（４）：５２９－５３０．

［１３］ 易中宏，鄭一敏，胥秀英，等．分光光度法測(cè)定茯苓中總?cè)祁惓煞值暮浚郏剩荩畷r(shí)珍國醫(yī)國藥，２００５，１６（４）：８４７－８４８．

［１４］ 姚新生，吳立軍．天然藥物化學(xué)［Ｍ］．北京：人民衛(wèi)生出版社，２００３.３０６．

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［１６］ 韓公羽，沈企華，韓紹雯．植物藥黃酮成分與生理生化活性［Ｍ］．北京：中國書籍出版社，２０１０．

在加顯色劑后，蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液和點(diǎn)地梅樣品溶液顯色后在510 nm處均有較平緩的吸收峰，適于定量測(cè)定，故將測(cè)定波長(zhǎng)選定為510 nm。5次測(cè)定的點(diǎn)地梅樣品中總黃酮含量為6.863%，RSD為1.47%，精密度高。

點(diǎn)地梅中總黃酮加標(biāo)回收試驗(yàn)結(jié)果見表1。由表1可知，總黃酮測(cè)定的平均加標(biāo)回收率為95.1%，RSD為1.39%，表明該方法適用于點(diǎn)地梅樣品中總黃酮的測(cè)定。

2.2總?cè)频臏y(cè)定結(jié)果

齊墩果酸及點(diǎn)地梅提取液顯色后在540 nm均有最大吸收，故以540 nm作為總?cè)频臏y(cè)定波長(zhǎng)。以吸光度為縱坐標(biāo)，齊墩果酸質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線（圖2），得方程y=0.011 3x-0.017 7，R2=0.999 1，齊墩果酸濃度在0~100 mg/mL范圍內(nèi)吸光度與質(zhì)量濃度線性關(guān)系良好。

5次測(cè)定的點(diǎn)地梅樣品中總?cè)频钠骄繛?.832%，RSD為1.02%，精密度較高。由表2可知，總?cè)频钠骄訕?biāo)回收率為92.6%，RSD為7.2%，表明該方法適用于點(diǎn)地梅樣品中總?cè)坪康臏y(cè)定。

３小結(jié)

點(diǎn)地梅是我國西南地區(qū)少數(shù)民族的常用草藥，但迄今為止，其資源還未充分開發(fā)和利用。三萜酸類及黃酮類物質(zhì)具有廣泛的生理活性，如抗腫瘤、抗菌、抗病毒、抗炎、降低膽固醇、降血糖［１４，１５］、強(qiáng)心、降血脂、抗氧化、提高免疫力等［１６］，分析藥用植物的總?cè)扑峒翱傸S酮含量將有助于深入開發(fā)相關(guān)藥用資源。本試驗(yàn)分析了點(diǎn)地梅的總黃酮及總?cè)坪浚Y(jié)果表明點(diǎn)地梅干燥全草總黃酮及總?cè)坪糠謩e為６．８６３％和８．８３２％，為其開發(fā)及利用提供科學(xué)參考。

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［１１］ 袁媛，楊毅，開桂青，等．靈芝三萜提取工藝研究［Ｊ］．安徽化工，２００７，３３（４）：２７－２９．

［１２］ 張雁冰，王克讓，劉宏民．馬桑葉中總?cè)扑岬暮繙y(cè)定［Ｊ］．時(shí)珍國醫(yī)國藥，２００６，１７（４）：５２９－５３０．

［１３］ 易中宏，鄭一敏，胥秀英，等．分光光度法測(cè)定茯苓中總?cè)祁惓煞值暮浚郏剩荩畷r(shí)珍國醫(yī)國藥，２００５，１６（４）：８４７－８４８．

［１４］ 姚新生，吳立軍．天然藥物化學(xué)［Ｍ］．北京：人民衛(wèi)生出版社，２００３.３０６．

［１５］ 譚世強(qiáng)，謝敬宇，郭帥，等．三萜類物質(zhì)的生理活性研究進(jìn)展［Ｊ］．２０１２，２８（３６）：２３－２７．

［１６］ 韓公羽，沈企華，韓紹雯．植物藥黃酮成分與生理生化活性［Ｍ］．北京：中國書籍出版社，２０１０．

在加顯色劑后，蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液和點(diǎn)地梅樣品溶液顯色后在510 nm處均有較平緩的吸收峰，適于定量測(cè)定，故將測(cè)定波長(zhǎng)選定為510 nm。5次測(cè)定的點(diǎn)地梅樣品中總黃酮含量為6.863%，RSD為1.47%，精密度高。

點(diǎn)地梅中總黃酮加標(biāo)回收試驗(yàn)結(jié)果見表1。由表1可知，總黃酮測(cè)定的平均加標(biāo)回收率為95.1%，RSD為1.39%，表明該方法適用于點(diǎn)地梅樣品中總黃酮的測(cè)定。

2.2總?cè)频臏y(cè)定結(jié)果

齊墩果酸及點(diǎn)地梅提取液顯色后在540 nm均有最大吸收，故以540 nm作為總?cè)频臏y(cè)定波長(zhǎng)。以吸光度為縱坐標(biāo)，齊墩果酸質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線（圖2），得方程y=0.011 3x-0.017 7，R2=0.999 1，齊墩果酸濃度在0~100 mg/mL范圍內(nèi)吸光度與質(zhì)量濃度線性關(guān)系良好。

5次測(cè)定的點(diǎn)地梅樣品中總?cè)频钠骄繛?.832%，RSD為1.02%，精密度較高。由表2可知，總?cè)频钠骄訕?biāo)回收率為92.6%，RSD為7.2%，表明該方法適用于點(diǎn)地梅樣品中總?cè)坪康臏y(cè)定。

３小結(jié)

點(diǎn)地梅是我國西南地區(qū)少數(shù)民族的常用草藥，但迄今為止，其資源還未充分開發(fā)和利用。三萜酸類及黃酮類物質(zhì)具有廣泛的生理活性，如抗腫瘤、抗菌、抗病毒、抗炎、降低膽固醇、降血糖［１４，１５］、強(qiáng)心、降血脂、抗氧化、提高免疫力等［１６］，分析藥用植物的總?cè)扑峒翱傸S酮含量將有助于深入開發(fā)相關(guān)藥用資源。本試驗(yàn)分析了點(diǎn)地梅的總黃酮及總?cè)坪?，結(jié)果表明點(diǎn)地梅干燥全草總黃酮及總?cè)坪糠謩e為６．８６３％和８．８３２％，為其開發(fā)及利用提供科學(xué)參考。

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