新型復方氟苯尼考注射液的安全性評價

程培培　楊亞軍　劉希望　李劍勇

摘要：按照2010版《中國獸藥典》和《獸藥及添加劑安全性毒理學評價程序》的要求，對新型復方氟苯尼考注射液進行安全性評價，相應進行了熱原檢查、注射途徑LD50測定、皮膚刺激試驗和肌肉刺激試驗等。結(jié)果表明：新型復方氟苯尼考注射液制劑熱原檢查符合藥典規(guī)定；腹腔注射對小鼠的LD50為1 888.73 mg/kg，95%可信限為1 575.90～2 263.65 mg/kg；該注射液對皮膚有輕度刺激性；對股四頭肌有輕微刺激，但在給藥后7 d可以完全恢復。說明新型復方氟苯尼考注射液安全可靠，可應用于獸醫(yī)臨床。

關鍵詞：新型復方氟苯尼考注射液；熱原檢查；LD50；皮膚刺激；肌肉刺激；安全性評價

中圖分類號： S859.79+6文獻標志碼： A文章編號：1002-1302（2014）01-0174-03

收稿日期：2013-05-09

基金項目：中央級公益性科研院所基本科研業(yè)務費專項（編號：1610322012005）；國家公益性行業(yè)（農(nóng)業(yè)）科研專項（編號：201303038-4）。

作者簡介：程培培（1987—），女，河南洛陽人，碩士，主要從事藥物篩選研究。E-mail：chengpeipei1117@163.com。

通信作者：李劍勇（1971—），男，甘肅秦安人，博士，研究員，主要從事新獸藥的研究與開發(fā)工作。Tel：（0931）2115290；E-mail：lijy1971@163.com。豬、牛呼吸系統(tǒng)感染性疾病的發(fā)病率高，病原微生物多種多樣，血清型復雜，疫苗的交叉保護力較差，在這類疾病治療過程中，藥物防治發(fā)揮著巨大的作用[1-3]。

新型復方氟苯尼考注射液是由抗菌藥物氟苯尼考和抗炎藥物氟尼辛葡甲胺以及輔料等成分組成，用于皮下注射和肌肉注射。氟苯尼考是動物專用的廣譜抗生素，克服了氯霉素引起骨髓抑制和再生障礙性貧血的缺點，且抗菌活性優(yōu)于同類的氯霉素、甲砜霉素等，廣泛應用于畜禽和水產(chǎn)細菌性疾病[4]，如由多殺性巴氏桿菌（Pasteurella multocida）、溶血性巴氏桿菌（Pasteurella hemolytica）、昏睡嗜血桿菌（Haemophilus somnus）等引起的牛呼吸系統(tǒng)疾病、由豬肺炎支原體（Mycoplasma hyopneumoniae）、多殺性巴氏桿菌、胸膜肺炎放線桿菌（Actinobacillus pleuropneumoniae）、支氣管敗血波氏桿菌（Bordetella bronchiseptica）、肺炎鏈球菌（Streptococcus pneumoniae）等引起的豬呼吸系統(tǒng)疾病、禽大腸桿菌病和霍亂等防控。氟尼辛葡甲胺是一種非選擇性的非甾體抗炎藥[5]，通過抑制花生四烯酸環(huán)氧合酶途徑，阻止前列腺素的合成，起到抗炎、鎮(zhèn)痛、退熱的作用，該藥已被《英國獸藥典》2001版、《美國藥典》2002版[6]和《中國獸藥典》2010版收錄，被批準用于肉牛、奶牛、馬的內(nèi)毒素血癥引起的炎癥，控制呼吸系統(tǒng)疾病伴隨的發(fā)熱癥狀和急性牛乳房炎[7]。已有的相關研究表明，氟尼辛葡甲胺和抗菌藥物聯(lián)用治療牛、豬呼吸系統(tǒng)疾病效果良好[8-9]。

依據(jù)抗菌、抗炎的原則和長效、緩釋的目的，研制出新型復方氟苯尼考注射液，用于治療豬、牛呼吸系統(tǒng)原發(fā)或繼發(fā)細菌和支原體感染，具有很好的抗菌和抗炎作用。為了將復方氟苯尼考注射液制劑合理、安全的應用于臨床并提供理論依據(jù)，依據(jù)2010版《中國獸藥典（一部）》對注射劑要求[10]和《獸藥及添加劑安全性毒理學評價程序》[11]對該注射液進行了安全性評價，包括熱原檢查、注射途徑LD50測定、皮膚刺激試驗和肌肉刺激試驗。

1材料與方法

1.1材料

1.1.1藥品新型復方氟苯尼考注射液（批號：F20120730，氟苯尼考含量為30%，中國農(nóng)業(yè)科學院蘭州畜牧與獸藥研究所）；空白溶劑（批號：20120913，中國農(nóng)業(yè)科學院蘭州畜牧與獸藥研究所）；0.9%氯化鈉注射液（批號：1210032B，安徽雙鶴藥業(yè)有限責任公司）。

1.1.2試驗動物日本大耳白兔，雌雄各半，體重2.0～3.0 kg，購自中國農(nóng)業(yè)科學院蘭州獸醫(yī)研究所，許可證號：SCXK（甘）2012-0001；昆明小鼠，雌雄各半，體重18～22 g，購自蘭州大學實驗動物中心，許可證號：SCXK（甘）2009-0004。

1.2方法

1.2.1熱原試驗依照2010版《中國獸藥典》規(guī)定的熱原檢查方法[10]，經(jīng)8次預測體溫選取適合于熱原檢查法的健康家兔3只，且正常體溫為38.0～39.6 ℃。在試驗前停食 1 h，然后每隔30 min測量1次體溫，測2次，2次體溫差不得超過0.2 ℃，以此2次體溫的平均值為正常體溫；在測正常體溫后15 min以內(nèi)，將溫熱至38 ℃的新型復方氟苯尼考注射液，自耳緣靜脈按推薦劑量1 mL/7.5 kg注射給藥，然后每隔 30 min 測量1次體溫，共測6次。以6次體溫中，最高的一次減去正常體溫，即為該兔體溫的升高溫度（℃），計算3只家兔體溫升高總和，并按照獸藥典的熱原檢查判定標準，判定供試品是否符合熱原檢查規(guī)定。

1.2.2LD50測定按照改良寇氏法[12]設計試驗。預試驗：每組4只昆明小鼠，雌雄各半，測得新型復方氟苯尼考注射液的絕對致死量（LD100）和最大耐受量（LD0）。正式試驗：分5組，每組10只小鼠，雌雄各半，腹腔注射，給藥后觀察 7 d，記錄小鼠死亡數(shù)量，并觀察注射藥物后小鼠的癥狀和死亡小鼠的病理變化。用改良寇氏法計算LD50及其95%可信限。

1.2.3皮膚刺激試驗[13]取健康家兔4只，雌雄各半，采用同體左右對比法，設溶劑對照。試驗前24 h對背部進行剪毛處理，剪毛范圍左右各 3 cm×3 cm，左側(cè)涂抹藥物，右側(cè)涂抹空白溶劑，均為0.5 mL；然后用2層紗布（2.5 cm×2.5 cm）和1層玻璃紙覆蓋，再用無刺激性膠布加以固定；貼敷4 h時，用溫熱至38 ℃的溫水清潔給藥部位，在去除藥物后0.5、1.0、24.0、48.0、72.0 h，分別肉眼觀察并記錄涂敷部位有無紅斑和水腫情況，按照皮膚刺激反應評分標準（表1）進行評分，總分值為8分，然后再按皮膚刺激強度評價標準（表2）進行評價。

表1皮膚刺激反應與評分標準

紅斑1分值1水腫1分值無紅斑101無水腫10輕度紅斑（勉強可見）111輕度水腫（勉強可見）11中度紅斑（明顯可見）121中度水腫（明顯隆起）12重度紅斑

13

1重度水腫（皮膚隆起1 mm，輪廓清楚）13

紫紅色紅斑到輕度焦痂形成14

1嚴重水腫（皮膚隆起 1 mm 以上并有擴大）14

摘要：按照2010版《中國獸藥典》和《獸藥及添加劑安全性毒理學評價程序》的要求，對新型復方氟苯尼考注射液進行安全性評價，相應進行了熱原檢查、注射途徑LD50測定、皮膚刺激試驗和肌肉刺激試驗等。結(jié)果表明：新型復方氟苯尼考注射液制劑熱原檢查符合藥典規(guī)定；腹腔注射對小鼠的LD50為1 888.73 mg/kg，95%可信限為1 575.90～2 263.65 mg/kg；該注射液對皮膚有輕度刺激性；對股四頭肌有輕微刺激，但在給藥后7 d可以完全恢復。說明新型復方氟苯尼考注射液安全可靠，可應用于獸醫(yī)臨床。

關鍵詞：新型復方氟苯尼考注射液；熱原檢查；LD50；皮膚刺激；肌肉刺激；安全性評價

中圖分類號： S859.79+6文獻標志碼： A文章編號：1002-1302（2014）01-0174-03

收稿日期：2013-05-09

基金項目：中央級公益性科研院所基本科研業(yè)務費專項（編號：1610322012005）；國家公益性行業(yè)（農(nóng)業(yè)）科研專項（編號：201303038-4）。

作者簡介：程培培（1987—），女，河南洛陽人，碩士，主要從事藥物篩選研究。E-mail：chengpeipei1117@163.com。

通信作者：李劍勇（1971—），男，甘肅秦安人，博士，研究員，主要從事新獸藥的研究與開發(fā)工作。Tel：（0931）2115290；E-mail：lijy1971@163.com。豬、牛呼吸系統(tǒng)感染性疾病的發(fā)病率高，病原微生物多種多樣，血清型復雜，疫苗的交叉保護力較差，在這類疾病治療過程中，藥物防治發(fā)揮著巨大的作用[1-3]。

新型復方氟苯尼考注射液是由抗菌藥物氟苯尼考和抗炎藥物氟尼辛葡甲胺以及輔料等成分組成，用于皮下注射和肌肉注射。氟苯尼考是動物專用的廣譜抗生素，克服了氯霉素引起骨髓抑制和再生障礙性貧血的缺點，且抗菌活性優(yōu)于同類的氯霉素、甲砜霉素等，廣泛應用于畜禽和水產(chǎn)細菌性疾病[4]，如由多殺性巴氏桿菌（Pasteurella multocida）、溶血性巴氏桿菌（Pasteurella hemolytica）、昏睡嗜血桿菌（Haemophilus somnus）等引起的牛呼吸系統(tǒng)疾病、由豬肺炎支原體（Mycoplasma hyopneumoniae）、多殺性巴氏桿菌、胸膜肺炎放線桿菌（Actinobacillus pleuropneumoniae）、支氣管敗血波氏桿菌（Bordetella bronchiseptica）、肺炎鏈球菌（Streptococcus pneumoniae）等引起的豬呼吸系統(tǒng)疾病、禽大腸桿菌病和霍亂等防控。氟尼辛葡甲胺是一種非選擇性的非甾體抗炎藥[5]，通過抑制花生四烯酸環(huán)氧合酶途徑，阻止前列腺素的合成，起到抗炎、鎮(zhèn)痛、退熱的作用，該藥已被《英國獸藥典》2001版、《美國藥典》2002版[6]和《中國獸藥典》2010版收錄，被批準用于肉牛、奶牛、馬的內(nèi)毒素血癥引起的炎癥，控制呼吸系統(tǒng)疾病伴隨的發(fā)熱癥狀和急性牛乳房炎[7]。已有的相關研究表明，氟尼辛葡甲胺和抗菌藥物聯(lián)用治療牛、豬呼吸系統(tǒng)疾病效果良好[8-9]。

依據(jù)抗菌、抗炎的原則和長效、緩釋的目的，研制出新型復方氟苯尼考注射液，用于治療豬、牛呼吸系統(tǒng)原發(fā)或繼發(fā)細菌和支原體感染，具有很好的抗菌和抗炎作用。為了將復方氟苯尼考注射液制劑合理、安全的應用于臨床并提供理論依據(jù)，依據(jù)2010版《中國獸藥典（一部）》對注射劑要求[10]和《獸藥及添加劑安全性毒理學評價程序》[11]對該注射液進行了安全性評價，包括熱原檢查、注射途徑LD50測定、皮膚刺激試驗和肌肉刺激試驗。

1材料與方法

1.1材料

1.1.1藥品新型復方氟苯尼考注射液（批號：F20120730，氟苯尼考含量為30%，中國農(nóng)業(yè)科學院蘭州畜牧與獸藥研究所）；空白溶劑（批號：20120913，中國農(nóng)業(yè)科學院蘭州畜牧與獸藥研究所）；0.9%氯化鈉注射液（批號：1210032B，安徽雙鶴藥業(yè)有限責任公司）。

1.1.2試驗動物日本大耳白兔，雌雄各半，體重2.0～3.0 kg，購自中國農(nóng)業(yè)科學院蘭州獸醫(yī)研究所，許可證號：SCXK（甘）2012-0001；昆明小鼠，雌雄各半，體重18～22 g，購自蘭州大學實驗動物中心，許可證號：SCXK（甘）2009-0004。

1.2方法

1.2.1熱原試驗依照2010版《中國獸藥典》規(guī)定的熱原檢查方法[10]，經(jīng)8次預測體溫選取適合于熱原檢查法的健康家兔3只，且正常體溫為38.0～39.6 ℃。在試驗前停食 1 h，然后每隔30 min測量1次體溫，測2次，2次體溫差不得超過0.2 ℃，以此2次體溫的平均值為正常體溫；在測正常體溫后15 min以內(nèi)，將溫熱至38 ℃的新型復方氟苯尼考注射液，自耳緣靜脈按推薦劑量1 mL/7.5 kg注射給藥，然后每隔 30 min 測量1次體溫，共測6次。以6次體溫中，最高的一次減去正常體溫，即為該兔體溫的升高溫度（℃），計算3只家兔體溫升高總和，并按照獸藥典的熱原檢查判定標準，判定供試品是否符合熱原檢查規(guī)定。

1.2.2LD50測定按照改良寇氏法[12]設計試驗。預試驗：每組4只昆明小鼠，雌雄各半，測得新型復方氟苯尼考注射液的絕對致死量（LD100）和最大耐受量（LD0）。正式試驗：分5組，每組10只小鼠，雌雄各半，腹腔注射，給藥后觀察 7 d，記錄小鼠死亡數(shù)量，并觀察注射藥物后小鼠的癥狀和死亡小鼠的病理變化。用改良寇氏法計算LD50及其95%可信限。

1.2.3皮膚刺激試驗[13]取健康家兔4只，雌雄各半，采用同體左右對比法，設溶劑對照。試驗前24 h對背部進行剪毛處理，剪毛范圍左右各 3 cm×3 cm，左側(cè)涂抹藥物，右側(cè)涂抹空白溶劑，均為0.5 mL；然后用2層紗布（2.5 cm×2.5 cm）和1層玻璃紙覆蓋，再用無刺激性膠布加以固定；貼敷4 h時，用溫熱至38 ℃的溫水清潔給藥部位，在去除藥物后0.5、1.0、24.0、48.0、72.0 h，分別肉眼觀察并記錄涂敷部位有無紅斑和水腫情況，按照皮膚刺激反應評分標準（表1）進行評分，總分值為8分，然后再按皮膚刺激強度評價標準（表2）進行評價。

表1皮膚刺激反應與評分標準

紅斑1分值1水腫1分值無紅斑101無水腫10輕度紅斑（勉強可見）111輕度水腫（勉強可見）11中度紅斑（明顯可見）121中度水腫（明顯隆起）12重度紅斑

13

1重度水腫（皮膚隆起1 mm，輪廓清楚）13

紫紅色紅斑到輕度焦痂形成14

1嚴重水腫（皮膚隆起 1 mm 以上并有擴大）14

摘要：按照2010版《中國獸藥典》和《獸藥及添加劑安全性毒理學評價程序》的要求，對新型復方氟苯尼考注射液進行安全性評價，相應進行了熱原檢查、注射途徑LD50測定、皮膚刺激試驗和肌肉刺激試驗等。結(jié)果表明：新型復方氟苯尼考注射液制劑熱原檢查符合藥典規(guī)定；腹腔注射對小鼠的LD50為1 888.73 mg/kg，95%可信限為1 575.90～2 263.65 mg/kg；該注射液對皮膚有輕度刺激性；對股四頭肌有輕微刺激，但在給藥后7 d可以完全恢復。說明新型復方氟苯尼考注射液安全可靠，可應用于獸醫(yī)臨床。

關鍵詞：新型復方氟苯尼考注射液；熱原檢查；LD50；皮膚刺激；肌肉刺激；安全性評價

中圖分類號： S859.79+6文獻標志碼： A文章編號：1002-1302（2014）01-0174-03

收稿日期：2013-05-09

基金項目：中央級公益性科研院所基本科研業(yè)務費專項（編號：1610322012005）；國家公益性行業(yè)（農(nóng)業(yè)）科研專項（編號：201303038-4）。

作者簡介：程培培（1987—），女，河南洛陽人，碩士，主要從事藥物篩選研究。E-mail：chengpeipei1117@163.com。

通信作者：李劍勇（1971—），男，甘肅秦安人，博士，研究員，主要從事新獸藥的研究與開發(fā)工作。Tel：（0931）2115290；E-mail：lijy1971@163.com。豬、牛呼吸系統(tǒng)感染性疾病的發(fā)病率高，病原微生物多種多樣，血清型復雜，疫苗的交叉保護力較差，在這類疾病治療過程中，藥物防治發(fā)揮著巨大的作用[1-3]。

新型復方氟苯尼考注射液是由抗菌藥物氟苯尼考和抗炎藥物氟尼辛葡甲胺以及輔料等成分組成，用于皮下注射和肌肉注射。氟苯尼考是動物專用的廣譜抗生素，克服了氯霉素引起骨髓抑制和再生障礙性貧血的缺點，且抗菌活性優(yōu)于同類的氯霉素、甲砜霉素等，廣泛應用于畜禽和水產(chǎn)細菌性疾病[4]，如由多殺性巴氏桿菌（Pasteurella multocida）、溶血性巴氏桿菌（Pasteurella hemolytica）、昏睡嗜血桿菌（Haemophilus somnus）等引起的牛呼吸系統(tǒng)疾病、由豬肺炎支原體（Mycoplasma hyopneumoniae）、多殺性巴氏桿菌、胸膜肺炎放線桿菌（Actinobacillus pleuropneumoniae）、支氣管敗血波氏桿菌（Bordetella bronchiseptica）、肺炎鏈球菌（Streptococcus pneumoniae）等引起的豬呼吸系統(tǒng)疾病、禽大腸桿菌病和霍亂等防控。氟尼辛葡甲胺是一種非選擇性的非甾體抗炎藥[5]，通過抑制花生四烯酸環(huán)氧合酶途徑，阻止前列腺素的合成，起到抗炎、鎮(zhèn)痛、退熱的作用，該藥已被《英國獸藥典》2001版、《美國藥典》2002版[6]和《中國獸藥典》2010版收錄，被批準用于肉牛、奶牛、馬的內(nèi)毒素血癥引起的炎癥，控制呼吸系統(tǒng)疾病伴隨的發(fā)熱癥狀和急性牛乳房炎[7]。已有的相關研究表明，氟尼辛葡甲胺和抗菌藥物聯(lián)用治療牛、豬呼吸系統(tǒng)疾病效果良好[8-9]。

依據(jù)抗菌、抗炎的原則和長效、緩釋的目的，研制出新型復方氟苯尼考注射液，用于治療豬、牛呼吸系統(tǒng)原發(fā)或繼發(fā)細菌和支原體感染，具有很好的抗菌和抗炎作用。為了將復方氟苯尼考注射液制劑合理、安全的應用于臨床并提供理論依據(jù)，依據(jù)2010版《中國獸藥典（一部）》對注射劑要求[10]和《獸藥及添加劑安全性毒理學評價程序》[11]對該注射液進行了安全性評價，包括熱原檢查、注射途徑LD50測定、皮膚刺激試驗和肌肉刺激試驗。

1材料與方法

1.1材料

1.1.1藥品新型復方氟苯尼考注射液（批號：F20120730，氟苯尼考含量為30%，中國農(nóng)業(yè)科學院蘭州畜牧與獸藥研究所）；空白溶劑（批號：20120913，中國農(nóng)業(yè)科學院蘭州畜牧與獸藥研究所）；0.9%氯化鈉注射液（批號：1210032B，安徽雙鶴藥業(yè)有限責任公司）。

1.1.2試驗動物日本大耳白兔，雌雄各半，體重2.0～3.0 kg，購自中國農(nóng)業(yè)科學院蘭州獸醫(yī)研究所，許可證號：SCXK（甘）2012-0001；昆明小鼠，雌雄各半，體重18～22 g，購自蘭州大學實驗動物中心，許可證號：SCXK（甘）2009-0004。

1.2方法

1.2.1熱原試驗依照2010版《中國獸藥典》規(guī)定的熱原檢查方法[10]，經(jīng)8次預測體溫選取適合于熱原檢查法的健康家兔3只，且正常體溫為38.0～39.6 ℃。在試驗前停食 1 h，然后每隔30 min測量1次體溫，測2次，2次體溫差不得超過0.2 ℃，以此2次體溫的平均值為正常體溫；在測正常體溫后15 min以內(nèi)，將溫熱至38 ℃的新型復方氟苯尼考注射液，自耳緣靜脈按推薦劑量1 mL/7.5 kg注射給藥，然后每隔 30 min 測量1次體溫，共測6次。以6次體溫中，最高的一次減去正常體溫，即為該兔體溫的升高溫度（℃），計算3只家兔體溫升高總和，并按照獸藥典的熱原檢查判定標準，判定供試品是否符合熱原檢查規(guī)定。

1.2.2LD50測定按照改良寇氏法[12]設計試驗。預試驗：每組4只昆明小鼠，雌雄各半，測得新型復方氟苯尼考注射液的絕對致死量（LD100）和最大耐受量（LD0）。正式試驗：分5組，每組10只小鼠，雌雄各半，腹腔注射，給藥后觀察 7 d，記錄小鼠死亡數(shù)量，并觀察注射藥物后小鼠的癥狀和死亡小鼠的病理變化。用改良寇氏法計算LD50及其95%可信限。

1.2.3皮膚刺激試驗[13]取健康家兔4只，雌雄各半，采用同體左右對比法，設溶劑對照。試驗前24 h對背部進行剪毛處理，剪毛范圍左右各 3 cm×3 cm，左側(cè)涂抹藥物，右側(cè)涂抹空白溶劑，均為0.5 mL；然后用2層紗布（2.5 cm×2.5 cm）和1層玻璃紙覆蓋，再用無刺激性膠布加以固定；貼敷4 h時，用溫熱至38 ℃的溫水清潔給藥部位，在去除藥物后0.5、1.0、24.0、48.0、72.0 h，分別肉眼觀察并記錄涂敷部位有無紅斑和水腫情況，按照皮膚刺激反應評分標準（表1）進行評分，總分值為8分，然后再按皮膚刺激強度評價標準（表2）進行評價。

表1皮膚刺激反應與評分標準

紅斑1分值1水腫1分值無紅斑101無水腫10輕度紅斑（勉強可見）111輕度水腫（勉強可見）11中度紅斑（明顯可見）121中度水腫（明顯隆起）12重度紅斑

13

1重度水腫（皮膚隆起1 mm，輪廓清楚）13

紫紅色紅斑到輕度焦痂形成14

1嚴重水腫（皮膚隆起 1 mm 以上并有擴大）14