鐘彥等
摘要:以蘆丁為對照品,利用AlCl3顯色法分析重樓屬(Paris L.)植物中總黃酮的含量。該方法在0.005~0.025 mg/mL (r=0.999 3)范圍內(nèi)線性關(guān)系良好,平均回收率達97.50%,RSD為1.89%。結(jié)果表明,不同種屬、不同產(chǎn)地重樓屬植物中總黃酮含量有顯著性差異,可為開發(fā)利用重樓屬資源提供參考。
關(guān)鍵詞:重樓屬(Paris L.);總黃酮;分光光度法
中圖分類號:Q815 文獻標(biāo)識碼:A 文章編號:0439-8114(2014)06-1420-02
Comparison of Total Flavonoids in Four Paris L. Resources
ZHONG Yan1,ZHOU Nong1,2,DU Si-wen3,GUO Dong-qin1
[1.College of Life Science and Engineering, Chongqing Three Gorges University, Chongqing 404000,China;
2.College of Pharmacy and Chemistry, Dali University, Dali 671000, Yunnan, China;
3.Chengdu College (Chengdu University), Experiential Technologies Center, Chengdu 610106,China]
Abstract: The contents of total flavonoids in Paris L. were detected with AlCl3 colorimetric analysis using rutin as control. A good linear relationship was in the range of 0.005~0.025 mg/mL(r=0.999 3), with the average recovery rate of 97.50% and RSD of 1.89%. The total flavonoids in Paris L. from different spicies and areas had significant difference. The results will provide a refenerce for utilizing Paris L.
Key words: Paris L.; total flavonoids; spectrophotometry
重樓屬(Paris L.)歸于百合科(Liliaceae),為我國傳統(tǒng)中藥藥材,具有清熱解毒、消腫止痛、涼肝定驚功效,常用于無名腫毒、毒蛇咬傷、流行性腮腺炎、扁桃體炎、咽喉腫痛、乳腺炎、跌打損傷等[1-3]。研究表明,重樓主要含甾體皂苷、黃酮、多糖等活性成分[4],其中,黃酮化合物具有抗腫瘤、抗炎、抗動脈粥樣硬化、抑制血小板聚集、抗過敏、抗突變、抗氧化等生物活性[4-6],為重樓的重要活性成分,也是衡量該藥材質(zhì)量的重要指標(biāo)。目前已有重樓屬植物七葉一枝花中總黃酮的含量報道[7],但采用紫外-可見分光光度法分析云南重樓、毛重樓、花葉重樓中的總黃酮含量尚未見報道。本試驗分析不同藥用重樓中總黃酮含量的差異,將為重樓資源的開發(fā)利用和藥材質(zhì)量控制提供參考依據(jù)。
1 材料與方法
1.1 材料
蘆丁對照品(中國藥品生物制品檢定所,批號:100080-200707);本試驗所用的各種重樓藥材(表1)購于全國的藥材市場或自采,經(jīng)大理學(xué)院藥學(xué)與化學(xué)學(xué)院生藥教研室周濃副教授鑒定為云南重樓[Paris polyphylla Smith var. yunnanensis (Franch.) Hand.-Mazz.]、七葉一枝花[Paris polyphylla Smith var. chinensis (Franch.) Hara]、毛重樓(P. polyphylla Smith var. pubescens Hand. -Mazz.)、花葉重樓(P. violacea Lévl.)的干燥根莖。樣品保存于大理學(xué)院藥學(xué)與化學(xué)學(xué)院生藥學(xué)教研室。
試劑均為分析純,去離子水。
1.2 儀器
TU-1901型雙光束紫外-可見分光光度計(北京普析通用儀器有限責(zé)任公司);RE-2000A型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(上海亞榮生化儀器廠);AL104型電子天平(梅特勒-托利多儀器上海有限公司);SHZ-DM型循環(huán)水式真空泵(鞏義市予華儀器有限責(zé)任公司);SB25-120型超聲波清洗機(寧波新芝生物科技股份有限公司);DKS-28型恒溫水浴鍋(嘉興市中新醫(yī)療儀器有限公司)。
1.3 方法
1.3.1 對照品溶液的制備 稱取蘆丁對照品適量,置于25 mL容量瓶中,以甲醇溶解并定容至刻度,制成0.1 mg/mL的蘆丁對照品貯備液。
1.3.2 供試溶液的制備 稱取重樓藥材粉末(過三號篩)0.50 g,置250 mL圓底燒瓶中,加甲醇30 mL,在80 ℃水浴鍋中回流提取2 h,靜置至室溫,過濾,重復(fù)回流1次,合并濾液,減壓濃縮至干,殘渣以甲醇溶液并轉(zhuǎn)移到10 mL容量瓶中,即得供試溶液。
1.3.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 分別取蘆丁對照品貯備液0.0、0.5、1.0、1.5、2.0、2.5 mL,置于10 mL容量瓶中,加入三氯化鋁甲醇溶液定容至刻度。以第一份溶液為空白,在425 nm波長處測定吸光度。以蘆丁濃度(C)為橫坐標(biāo),吸光度(A)為縱坐標(biāo),制備標(biāo)準(zhǔn)曲線。
2 結(jié)果與分析
2.1 精密度
量取對照品貯備液2 mL于10 mL容量瓶中,按“1.3.3”測定6次,測定結(jié)果的RSD為1.18%(n=6),表明方法精密度良好。
2.2 重復(fù)性
稱取重樓藥材粉末6份,分別按“1.3.2”制備供試品溶液。精確量取供試品溶液2 mL于10 mL容量瓶中,按照“1.3.3”測定,測定結(jié)果的RSD=1.08%(n=6),表明方法重復(fù)性良好。
2.3 穩(wěn)定性
量取供試品溶液2 mL于10 mL容量瓶中,在0~60 min內(nèi),每隔10 min測定1次,參照“1.3.3” 測定,測定結(jié)果的RSD為1.22%(n=6),表明供試品溶液顯色后在60 min內(nèi)穩(wěn)定。
2.4 加樣回收率
參照“1.3.3”,蘆丁對照品的回歸方程為A=33.78 C+0.026 9,(r=0.999 3)。結(jié)果表明蘆丁對照品在0.005~0.025 mg/mL范圍內(nèi)呈良好線性關(guān)系;精確稱取已知總黃酮含量的重樓藥材粉末0.25 g,共9份,分別加入一定量的蘆丁對照品,按“1.3.2”制備供試溶液,按“1.3.3”測定。結(jié)果表明,樣品平均回收率為97.5%,RSD為1.89%(n=9)。
2.5 樣品測定
稱取7份不同產(chǎn)地的重樓樣品,同上法分析,計算總黃酮含量,結(jié)果見表1。由表1可知,不同種屬重樓藥材中總黃酮含量差異較大,即使同為云南重樓,不同產(chǎn)地的樣品差異也較大,其中云南大理金貝藥材市場購買云南重樓中總黃酮含量最高,云南麗江地區(qū)自采云南重樓總黃酮含量最低,兩者含量相差近4倍。該結(jié)果表明重樓中總黃酮的含量受產(chǎn)地及品種影響較大。
3 討論
在預(yù)試驗中,參考文獻[7-9]分析了不同溶劑[甲醇、70%(V/V,下同)甲醇、無水乙醇、70%乙醇]、不同提取方法(超聲、回流、索氏)、不同提取時間(1.0、1.5、2.0、2.5 h)、不同提取次數(shù)(1、2、3次)、不同料液比(1∶10、1∶20、1∶30、1∶40、1∶50、1∶60)、不同顯色劑[Al(NO3)3-NaNO2-NaOH顯色法、AlCl3顯色法]對重樓中總黃酮含量測定的影響。結(jié)果表明,以甲醇為提取溶劑、加熱回流提取2 h、提取2次后,采用AlCl3顯色測得的總黃酮含量較準(zhǔn)確。另外,本試驗方法的精密度、重復(fù)性、穩(wěn)定性、平均回收率均較好,可作為重樓藥材中總黃酮的含量測定方法,為其多成分、多指標(biāo)質(zhì)量控制,提高藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)及進一步開發(fā)利用相關(guān)資源提供了參考。
參考文獻:
[1] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(一部)[S].北京:中國醫(yī)藥科技出版社,2010.243-244.
[2] 趙保勝,朱寅荻,馬 勇,等.中藥重樓研究進展[J].中國實驗方劑學(xué)雜志,2011,17(11):267-270.
[3] 李 恒.重?fù)僦参颷M].北京:科學(xué)出版社,1998.182.
[4] 武珊珊,高文遠,段宏泉,等.重樓化學(xué)成分和藥理作用研究進展[J].中草藥,2004,35(3):344-347.
[5] 何佳珂,于 洋,陳西敬,等.黃酮類化合物的藥物代謝研究進展[J].中國中藥雜志,2010,35(21):2789-2794.
[6] 黃賢校,高文遠,谷克仁,等.毛重樓的化學(xué)成分研究[J].中草藥,2009,40(9):1366-1369.
[7] 袁 曉,袁 萍,嚴(yán)海燕,等.野生珍稀藥用植物七葉一枝花的成分含量分析[J].武漢植物學(xué)研究,2004,22(6):575-577.
[8] 宋 萍,趙明德,殷海青.青海地區(qū)幾種錦雞兒屬植物中總黃酮含量的測定[J].時珍國醫(yī)國藥,2009,20(6):1297-1298.
[9] 鄭媛媛,李 辰,封士蘭,等.油橄欖葉中總黃酮含量測定方法探討[J].光譜學(xué)與光譜分析,2011,31(2):547-551.
2.1 精密度
量取對照品貯備液2 mL于10 mL容量瓶中,按“1.3.3”測定6次,測定結(jié)果的RSD為1.18%(n=6),表明方法精密度良好。
2.2 重復(fù)性
稱取重樓藥材粉末6份,分別按“1.3.2”制備供試品溶液。精確量取供試品溶液2 mL于10 mL容量瓶中,按照“1.3.3”測定,測定結(jié)果的RSD=1.08%(n=6),表明方法重復(fù)性良好。
2.3 穩(wěn)定性
量取供試品溶液2 mL于10 mL容量瓶中,在0~60 min內(nèi),每隔10 min測定1次,參照“1.3.3” 測定,測定結(jié)果的RSD為1.22%(n=6),表明供試品溶液顯色后在60 min內(nèi)穩(wěn)定。
2.4 加樣回收率
參照“1.3.3”,蘆丁對照品的回歸方程為A=33.78 C+0.026 9,(r=0.999 3)。結(jié)果表明蘆丁對照品在0.005~0.025 mg/mL范圍內(nèi)呈良好線性關(guān)系;精確稱取已知總黃酮含量的重樓藥材粉末0.25 g,共9份,分別加入一定量的蘆丁對照品,按“1.3.2”制備供試溶液,按“1.3.3”測定。結(jié)果表明,樣品平均回收率為97.5%,RSD為1.89%(n=9)。
2.5 樣品測定
稱取7份不同產(chǎn)地的重樓樣品,同上法分析,計算總黃酮含量,結(jié)果見表1。由表1可知,不同種屬重樓藥材中總黃酮含量差異較大,即使同為云南重樓,不同產(chǎn)地的樣品差異也較大,其中云南大理金貝藥材市場購買云南重樓中總黃酮含量最高,云南麗江地區(qū)自采云南重樓總黃酮含量最低,兩者含量相差近4倍。該結(jié)果表明重樓中總黃酮的含量受產(chǎn)地及品種影響較大。
3 討論
在預(yù)試驗中,參考文獻[7-9]分析了不同溶劑[甲醇、70%(V/V,下同)甲醇、無水乙醇、70%乙醇]、不同提取方法(超聲、回流、索氏)、不同提取時間(1.0、1.5、2.0、2.5 h)、不同提取次數(shù)(1、2、3次)、不同料液比(1∶10、1∶20、1∶30、1∶40、1∶50、1∶60)、不同顯色劑[Al(NO3)3-NaNO2-NaOH顯色法、AlCl3顯色法]對重樓中總黃酮含量測定的影響。結(jié)果表明,以甲醇為提取溶劑、加熱回流提取2 h、提取2次后,采用AlCl3顯色測得的總黃酮含量較準(zhǔn)確。另外,本試驗方法的精密度、重復(fù)性、穩(wěn)定性、平均回收率均較好,可作為重樓藥材中總黃酮的含量測定方法,為其多成分、多指標(biāo)質(zhì)量控制,提高藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)及進一步開發(fā)利用相關(guān)資源提供了參考。
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[6] 黃賢校,高文遠,谷克仁,等.毛重樓的化學(xué)成分研究[J].中草藥,2009,40(9):1366-1369.
[7] 袁 曉,袁 萍,嚴(yán)海燕,等.野生珍稀藥用植物七葉一枝花的成分含量分析[J].武漢植物學(xué)研究,2004,22(6):575-577.
[8] 宋 萍,趙明德,殷海青.青海地區(qū)幾種錦雞兒屬植物中總黃酮含量的測定[J].時珍國醫(yī)國藥,2009,20(6):1297-1298.
[9] 鄭媛媛,李 辰,封士蘭,等.油橄欖葉中總黃酮含量測定方法探討[J].光譜學(xué)與光譜分析,2011,31(2):547-551.
2.1 精密度
量取對照品貯備液2 mL于10 mL容量瓶中,按“1.3.3”測定6次,測定結(jié)果的RSD為1.18%(n=6),表明方法精密度良好。
2.2 重復(fù)性
稱取重樓藥材粉末6份,分別按“1.3.2”制備供試品溶液。精確量取供試品溶液2 mL于10 mL容量瓶中,按照“1.3.3”測定,測定結(jié)果的RSD=1.08%(n=6),表明方法重復(fù)性良好。
2.3 穩(wěn)定性
量取供試品溶液2 mL于10 mL容量瓶中,在0~60 min內(nèi),每隔10 min測定1次,參照“1.3.3” 測定,測定結(jié)果的RSD為1.22%(n=6),表明供試品溶液顯色后在60 min內(nèi)穩(wěn)定。
2.4 加樣回收率
參照“1.3.3”,蘆丁對照品的回歸方程為A=33.78 C+0.026 9,(r=0.999 3)。結(jié)果表明蘆丁對照品在0.005~0.025 mg/mL范圍內(nèi)呈良好線性關(guān)系;精確稱取已知總黃酮含量的重樓藥材粉末0.25 g,共9份,分別加入一定量的蘆丁對照品,按“1.3.2”制備供試溶液,按“1.3.3”測定。結(jié)果表明,樣品平均回收率為97.5%,RSD為1.89%(n=9)。
2.5 樣品測定
稱取7份不同產(chǎn)地的重樓樣品,同上法分析,計算總黃酮含量,結(jié)果見表1。由表1可知,不同種屬重樓藥材中總黃酮含量差異較大,即使同為云南重樓,不同產(chǎn)地的樣品差異也較大,其中云南大理金貝藥材市場購買云南重樓中總黃酮含量最高,云南麗江地區(qū)自采云南重樓總黃酮含量最低,兩者含量相差近4倍。該結(jié)果表明重樓中總黃酮的含量受產(chǎn)地及品種影響較大。
3 討論
在預(yù)試驗中,參考文獻[7-9]分析了不同溶劑[甲醇、70%(V/V,下同)甲醇、無水乙醇、70%乙醇]、不同提取方法(超聲、回流、索氏)、不同提取時間(1.0、1.5、2.0、2.5 h)、不同提取次數(shù)(1、2、3次)、不同料液比(1∶10、1∶20、1∶30、1∶40、1∶50、1∶60)、不同顯色劑[Al(NO3)3-NaNO2-NaOH顯色法、AlCl3顯色法]對重樓中總黃酮含量測定的影響。結(jié)果表明,以甲醇為提取溶劑、加熱回流提取2 h、提取2次后,采用AlCl3顯色測得的總黃酮含量較準(zhǔn)確。另外,本試驗方法的精密度、重復(fù)性、穩(wěn)定性、平均回收率均較好,可作為重樓藥材中總黃酮的含量測定方法,為其多成分、多指標(biāo)質(zhì)量控制,提高藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)及進一步開發(fā)利用相關(guān)資源提供了參考。
參考文獻:
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[5] 何佳珂,于 洋,陳西敬,等.黃酮類化合物的藥物代謝研究進展[J].中國中藥雜志,2010,35(21):2789-2794.
[6] 黃賢校,高文遠,谷克仁,等.毛重樓的化學(xué)成分研究[J].中草藥,2009,40(9):1366-1369.
[7] 袁 曉,袁 萍,嚴(yán)海燕,等.野生珍稀藥用植物七葉一枝花的成分含量分析[J].武漢植物學(xué)研究,2004,22(6):575-577.
[8] 宋 萍,趙明德,殷海青.青海地區(qū)幾種錦雞兒屬植物中總黃酮含量的測定[J].時珍國醫(yī)國藥,2009,20(6):1297-1298.
[9] 鄭媛媛,李 辰,封士蘭,等.油橄欖葉中總黃酮含量測定方法探討[J].光譜學(xué)與光譜分析,2011,31(2):547-551.