原研和國產(chǎn)仿制藥阿托伐他汀鈣片的溶出曲線比較和評(píng)價(jià)

章建富，邵淑蓉，葉朝輝

阿托伐他汀鈣為羥甲戊二酰輔酶A（HMG-CoA）還原酶抑制劑類調(diào)血脂藥，臨床主要用于高膽固醇血癥、冠心病合并高膽固醇血癥或混合型血脂異常的患者，是全球處方量最多的降膽固醇藥物和排名第一的處方藥。阿托伐他汀鈣片由輝瑞公司生產(chǎn)，1997年首先在英國上市，商品名為“立普妥”，1999年國內(nèi)上市，規(guī)格為10、20和40 mg。2011年底，原研藥立普妥專利保護(hù)到期后，阿托伐他汀鈣仿制藥逐步進(jìn)入市場，截至目前國內(nèi)已有6個(gè)廠家獲得仿制藥批準(zhǔn)文號(hào)。阿托伐他汀鈣極微溶于水，隨著水溶液pH值上升溶解度增大，當(dāng)pH值低于5.0時(shí)幾乎不溶[1]，屬于生物藥劑學(xué)分類系統(tǒng)Ⅱ類藥物[2]，溶出是影響其吸收的限速步驟。張啟明等[3]指出溶出度試驗(yàn)技術(shù)是評(píng)價(jià)口服固體制劑內(nèi)在質(zhì)量的一種重要手段，可為建立體內(nèi)外相關(guān)性提供基礎(chǔ)數(shù)據(jù)，在多種pH值溶出介質(zhì)中溶出曲線的測定更是評(píng)估不同來源的同一制劑內(nèi)在質(zhì)量差異上的可靠手段。本文以原研藥立普妥為參比制劑，考察阿托伐他汀鈣片仿制藥在不同介質(zhì)中的溶出曲線，采用相似因子法評(píng)價(jià)溶出行為，為進(jìn)一步保障臨床用藥提供質(zhì)量依據(jù)?，F(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 儀器與試藥 DGU-20A3高效液相色譜儀（島津）；ZRS-8L智能溶出試驗(yàn)儀（天津市天大天發(fā)科技有限公司）；FA2104電子分析天平（上海良平儀器儀表有限公司）。阿托伐他汀鈣片（商品名：立普妥，輝瑞制藥有限公司，批號(hào)X83161）、（商品名：優(yōu)力平，浙江樂普藥業(yè)股份有限公司（A廠），批號(hào)20180904A）、（商品名：阿樂，北京嘉林藥業(yè)股份有限公司（B廠），批號(hào)BA181069）、（商品名：山樂汀，山德士（中國）制藥有限公司（C廠），批號(hào)HK5407）；阿托伐他汀鈣對(duì)照品（中國藥品生物制品檢定所，批號(hào)100590-200501，含量為95.2%）；甲醇、乙腈為色譜純，鹽酸、醋酸、醋酸鈉、磷酸二氫鉀等均為分析純；水為純化水。

1.2 方法

1.2.1 溶液的配制

1.2.1.1 溶出介質(zhì) 按照《普通口服固體制劑溶出度試驗(yàn)技術(shù)指導(dǎo)原則》[4]分別配制4種溶出介質(zhì)，分別為pH值1.0鹽酸溶液、pH值4.5醋酸鹽緩沖液及pH值6.8磷酸鹽緩沖液和水。

1.2.1.2 對(duì)照品溶液 取阿托伐他汀鈣對(duì)照品約10 mg，精密稱定，置10 ml量瓶中，用甲醇溶解后稀釋至刻度，搖勻，配成濃度約1 mg/ml的對(duì)照品儲(chǔ)備液，并按需要稀釋成不同濃度的對(duì)照品溶液。

1.2.2 方法學(xué)考察

1.2.2.1 色譜條件 色譜柱：Welch Ultimate XB-C18色譜柱（4.6×250 mm，5 m）；流動(dòng)相：乙腈-1%醋酸（65∶35）；檢測波長：244 nm；流速：1.0 ml/min；柱溫：常溫；進(jìn)樣量：20 l。

1.2.2.2 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取“1.2.1.2”項(xiàng)下對(duì)照品溶液適量，用4種溶出介質(zhì)pH值1.0鹽酸溶液、pH值4.5醋酸鹽緩沖液、pH值6.8磷酸鹽緩沖液和水稀釋成阿托伐他汀鈣濃度為9.97 g/ml的溶液。

1.2.2.3 線性關(guān)系考察 精密量取適量阿托伐他汀鈣對(duì)照品溶液，用3種溶出介質(zhì)（pH值4.5醋酸鹽緩沖液、pH值6.8磷酸鹽緩沖液和水）稀釋至刻度，搖勻，配置成0.997、4.985、9.97、19.94、39.88 g/ml系列標(biāo)準(zhǔn)工作液。分別進(jìn)樣20 l測定，以阿托伐他汀鈣質(zhì)量濃度（X）為橫坐標(biāo)，峰面積（Y）為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸。

1.2.2.4 精密度試驗(yàn) 取“1.2.1.2”項(xiàng)下對(duì)照品溶液適量，用3種溶出介質(zhì)（pH值4.5醋酸鹽緩沖液、pH值6.8磷酸鹽緩沖液和水）稀釋成阿托伐他汀鈣濃度為9.97 g/ml的溶液，分別連續(xù)進(jìn)樣6次，計(jì)算相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）。

1.2.2.5 加樣回收率試驗(yàn) 精密稱取已知含量的阿托伐他汀鈣片研細(xì)粉末，置100 ml量瓶中，分別加入“1.2.1.2”項(xiàng)下對(duì)照品溶液0.8、1.0、1.2 ml，并用3種溶出介質(zhì)（pH值4.5醋酸鹽緩沖液、pH值6.8磷酸鹽緩沖液和水）稀釋至刻度，搖勻，離心取上清液測定藥物濃度，計(jì)算回收率。

1.2.3 溶出度測定 參照阿托伐他汀鈣片國家藥品標(biāo)準(zhǔn)WS1-（X-106）-2003Z溶出度項(xiàng)下的方法，按照溶出度測定法（中國藥典2015年版0931溶出度與釋放度測定法第二法），分別量取經(jīng)脫氣處理的“1.2.1.1”項(xiàng)下3種溶出介質(zhì)（pH值4.5醋酸鹽緩沖液、pH值6.8磷酸鹽緩沖液和水）900 ml，待溶出介質(zhì)溫度恒定在（37±0.5）℃，設(shè)置轉(zhuǎn)速50 r/min，將阿托伐他汀鈣片置6個(gè)溶出杯中，自供試品接觸溶出介質(zhì)起計(jì)時(shí)，根據(jù)《普通口服固體制劑溶出度試驗(yàn)技術(shù)指導(dǎo)原則》和實(shí)際溶出情況，分別于5、10、15、30、45、60 min取樣5ml（同時(shí)補(bǔ)充同溫等量空白溶出介質(zhì)），濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液。進(jìn)樣測定藥物含量，計(jì)算各時(shí)間點(diǎn)的累積溶出度，繪制溶出曲線。

1.2.4 溶出曲線相似性評(píng)價(jià) 根據(jù)《普通口服固體制劑溶出度試驗(yàn)技術(shù)指導(dǎo)原則》，采用相似因子（f2）來比較溶出曲線，評(píng)價(jià)其他廠家阿托伐他汀鈣片與原研制劑體外溶出行為的相似性。

2 結(jié)果

2.1 穩(wěn)定性試驗(yàn) 阿托伐他汀鈣于4種介質(zhì)室溫放置0、2、4、6、8、12 h，計(jì)算RSD分別為33.80%、2.55%、2.04%、1.28%。結(jié)果表明阿托伐他汀鈣在pH值1.0鹽酸溶液中不穩(wěn)定，0、6、12 h分別降解約15%、50%和53%，在另3種溶出介質(zhì)中12 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.2 方法學(xué)試驗(yàn) 阿托伐他汀鈣在3種溶出介質(zhì)（pH值4.5醋酸鹽緩沖液、pH值6.8磷酸鹽緩沖液和水）線性關(guān)系見表1，在0.997～39.88 g/ml范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。3種溶出介質(zhì)的RSD分別為1.11%、1.15%和1.71%，平均回收率分別為98.32%、99.17%和98.07%，均符合試驗(yàn)要求。

2.3 溶出度測定 不同廠家阿托伐他汀鈣制劑在3種溶出介質(zhì)的溶出度測定結(jié)果見封三彩圖1～3。

2.4 溶出曲線評(píng)價(jià) 在溶出介質(zhì)pH值6.8磷酸鹽緩沖液和水中，原研藥及A、B、C三個(gè)廠家的15 min溶出度均超過85%，可判定為溶出行為相似。在pH值4.5醋酸鹽緩沖液中，與原研制劑比較A廠、B廠的f2值分別為73.94和76.01，可判定為溶出曲線相似，C廠f2值為41.26，判定為溶出行為存在差異。

3 討論

有研究報(bào)道，阿托伐他汀鈣在pH值1.0鹽酸溶液中不穩(wěn)定，迅速發(fā)生降解[5-6]，本文穩(wěn)定性試驗(yàn)顯示0、12 h阿托伐他汀鈣降解分別達(dá)15%和53%。但與文獻(xiàn)[5]報(bào)道結(jié)果不同，本研究發(fā)現(xiàn)阿托伐他汀鈣在pH值1.0鹽酸溶液中產(chǎn)生至少兩個(gè)主要的降解產(chǎn)物，且降解產(chǎn)物與阿托伐他汀鈣主峰面積未呈規(guī)律變化，峰面積和與藥物濃度之間線性關(guān)系較差，無法準(zhǔn)確測定阿托伐他汀鈣在pH值1.0介質(zhì)中的溶出量。因此，本文選擇pH值4.5醋酸鹽緩沖液、pH值6.8磷酸鹽緩沖液和水作為溶出介質(zhì)，分別考察阿托伐他汀鈣片的質(zhì)量。

本研究考察了納入浙江省藥品集中采購的全部阿托伐他汀鈣片，包括原研藥立普妥、國產(chǎn)仿制藥A廠和B廠（均為通過仿制藥一致性評(píng)價(jià)品種）、進(jìn)口仿制藥C廠。與原研藥體外溶出研究比較，國產(chǎn)仿制藥A廠、B廠具有完全相似的溶出行為，這與早期報(bào)道國產(chǎn)阿托伐他汀鈣片的溶出速度顯著慢于原研藥的結(jié)果不同[7-8]；這表明近年隨著我國大力推進(jìn)仿制藥一致性評(píng)價(jià)政策，國產(chǎn)仿制藥企業(yè)通過對(duì)原研藥的全面剖析和模擬，不斷改進(jìn)處方、輔料及生產(chǎn)工藝，仿制藥水平得到大幅度提升。進(jìn)口仿制藥C廠的阿托伐他汀鈣片，在pH值6.8磷酸鹽緩沖液和水中的溶出行為與原研藥相似，但在pH值4.5醋酸鹽緩沖液存在差異，主要為前30 min的溶出慢于原研藥，之后溶出無異，這是否影響體內(nèi)生物利用度有待于進(jìn)一步研究。

總之，本研究通過考察市售隨機(jī)批號(hào)不同廠家的阿托伐他汀鈣片體外溶出，所有產(chǎn)品均符合國家藥品標(biāo)準(zhǔn)[WS1-（X-106）-2003Z]的溶出度檢查要求，其中已通過一致性評(píng)價(jià)的國產(chǎn)仿制藥在不同溶出介質(zhì)中具有原研藥完全相似的體外溶出行為，表明阿托伐他汀鈣片的國內(nèi)仿制藥已經(jīng)達(dá)到類似原研藥的品質(zhì)，為臨床用藥提供質(zhì)量依據(jù)。