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    重組白介素-2增強(qiáng)口蹄疫病毒多表位疫苗免疫效果研究

    2014-06-18 11:27:30蘇春霞段相國陳溥言
    關(guān)鍵詞:表位腺病毒活疫苗

    蘇春霞,段相國,陳溥言

    (1.寧夏醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院病原生物學(xué)與免疫學(xué)系,寧夏銀川 750004;2.寧夏醫(yī)科大學(xué)檢驗(yàn)學(xué)院臨床免疫學(xué)檢驗(yàn)系,寧夏銀川 750004;3.南京農(nóng)業(yè)大學(xué)農(nóng)業(yè)部動(dòng)物疫病診斷與免疫重點(diǎn)開放實(shí)驗(yàn)室,江蘇南京 210095)

    口蹄疫(Foot-and-mouth disease,F(xiàn)MD)是由口蹄疫病毒(FMDV)引起的反芻動(dòng)物的一種高度傳染性疾病,F(xiàn)MD在國際上被稱為“政治經(jīng)濟(jì)病”,主要是因?yàn)槠鋫鞑ニ俣瓤?,防控難度較大,而造成的經(jīng)濟(jì)損失巨大。目前,疫苗接種仍然是發(fā)展中國家控制FMD的一項(xiàng)重大策略[1-2],但傳統(tǒng)的FMD疫苗存在不能區(qū)分疫苗接種與自然感染以及潛在的生物安全隱患等問題,因此,F(xiàn)MD新型疫苗如亞單位疫苗、合成肽疫苗、DNA疫苗和重組病毒疫苗等被廣泛研究[3-4]。以往的研究表明,合成肽疫苗或重組蛋白疫苗能誘導(dǎo)中和抗體的產(chǎn)生并能有效保護(hù)病毒對實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的攻擊[5-6],但這些疫苗的免疫原性不如傳統(tǒng)滅活疫苗。因此,研究者試圖通過增加抗原表位的數(shù)量或加入T輔助細(xì)胞表位等方法增強(qiáng)新型疫苗的免疫原性[7-8]。我們前期構(gòu)建了串聯(lián)表達(dá)FMDV多表位基因,同時(shí)引入通用型輔助性T淋巴細(xì)胞表位(PARDE)[9-10],但其誘導(dǎo)小鼠抗體水平和細(xì)胞免疫應(yīng)答略低于滅活疫苗。很多研究者試圖利用細(xì)胞因子佐劑與FMD疫苗聯(lián)合免疫動(dòng)物,以增強(qiáng)后者的免疫原性。本研究通過聯(lián)合免疫表達(dá)豬IL-2的重組腺病毒(rAd5poIL-2)和串聯(lián)表達(dá)FMDV多表位的重組腺病毒(rAd5EGS),觀察IL-2對FMDV多表位疫苗誘導(dǎo)小鼠免疫功能的影響,為IL-2作為FMDV表位疫苗的候選佐劑提供實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。

    1 材料與方法

    1.1 材料

    表達(dá)豬IL-2的重組腺病毒(rAd5poIL-2)、表達(dá)FMDV多表位重組腺病毒(rAd5EGS)、重組FMDV VP1蛋白由寧夏醫(yī)科大學(xué)病原生物學(xué)與免疫學(xué)系實(shí)驗(yàn)室保存;O型FMD滅活疫苗為中牧股份蘭州生物藥廠產(chǎn)品;HRP標(biāo)記的山羊抗小鼠抗體為Caltag Laboratories公司產(chǎn)品;細(xì)胞因子IL-4和IFN-γ檢測試劑盒為Raybiotech公司產(chǎn)品;其他試劑均為國產(chǎn)或進(jìn)口分析純試劑。

    1.2 方法

    1.2.1 動(dòng)物的分組與免疫接種 6周齡雌性Balb/c小鼠分為4組,每組12只,第1組聯(lián)合免疫rAd5poIL-2和rAd5EGS,第2、3和4組分別注射rAd5EGS、滅活疫苗和PBS,免疫劑量均為1×108TCID50/只,滅 活 疫 苗 和 PBS 組 分 別 注 射200μL,間隔2周免疫接種1次,共免疫接種3次。

    1.2.2 脾淋巴細(xì)胞增殖試驗(yàn) 首次免疫接種后6周,參考文獻(xiàn)[7]采用MTT法檢測淋巴細(xì)胞增殖功能,簡述如下:無菌制備小鼠單個(gè)脾細(xì)胞懸液,接種到96孔板中,同時(shí)加入終濃度為10μg/mL的重組VP1蛋白,37℃培養(yǎng)44h,加入MTT溶液,繼續(xù)培養(yǎng)4h后棄上清,每孔加100μL DMSO,在微量振蕩器振蕩,用酶標(biāo)儀測570nm吸光度值。

    1.2.3 抗體和抗體亞型檢測 分別于免疫接種后1周~6周尾靜脈采血,分離血清,常規(guī)ELISA檢測小鼠血清中抗VP1特異性IgG水平;首免后6周,ELISA檢測血清中IgG1和IgG2a抗體亞型水平[7]。

    1.2.4 血清中IL-4和IFN-γ的測定 首次免疫接種后6周,定量ELISA檢測小鼠血清中IL-4和IFN-γ的表達(dá)水平,操作按Raybiotech公司試劑盒說明書進(jìn)行。

    1.2.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 采用Graphpad Prism5軟件,數(shù)據(jù)表示為D,方差分析或t檢驗(yàn),P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

    2 結(jié)果

    2.1 小鼠特異性淋巴細(xì)胞增殖水平

    首次免疫接種后6周,rAd5EGS能誘導(dǎo)小鼠淋巴細(xì)胞增殖,但其誘導(dǎo)淋巴細(xì)胞增殖能力略低于滅活疫苗;rAd5poIL-2和rAd5EGS聯(lián)合免疫后,誘導(dǎo)小鼠淋巴細(xì)胞增殖水平顯著高于單獨(dú)免疫rAd5EGS組(P<0.01),而且聯(lián)合免疫組誘導(dǎo)小鼠淋巴細(xì)胞增殖能力也明顯高于滅活疫苗組(P<0.05);采用 Graphpad Prism5中的t檢驗(yàn)分析,結(jié)果見圖1。

    2.2 特異性抗體和抗體亞型的檢測

    ELISA結(jié)果顯示,rAd5EGS能刺激抗FMDV VP1特異性IgG的分泌,但其分泌水平低于滅活疫苗;rAd5poIL-2和rAd5EGS聯(lián)合免疫后能明顯提高小鼠血清中抗VP1特異性IgG的分泌水平,與單獨(dú)免疫rAd5EGS組相比,差異極顯著(P<0.01),而且聯(lián)合免疫組誘導(dǎo)小鼠抗體分泌水平略高于滅活疫苗組,采用Graphpad Prism5中的方差分析,結(jié)果見圖2。IgG抗體亞型檢測結(jié)果表明,免疫接種后6周,rAd5EGS能刺激小鼠抗VP1特異性IgG1和IgG2a的分泌,與滅活疫苗相比,其誘導(dǎo)小鼠IgG2a的分泌水平略高;與單獨(dú)免疫rAd5EGS相比,聯(lián)合免疫rAd5poIL-2與rAd5EGS后,能明顯提高血清中IgG1和IgG2a的分泌(P<0.05),采用Graphpad Prism5中的方差分析,結(jié)果見圖3。

    圖1 小鼠淋巴細(xì)胞增殖試驗(yàn)Fig.1 Mouse lymphocyte proliferation test

    圖2 抗FMDV VP1特異性抗體IgG檢測Fig.2 Detection of anti-FMDV VP1specific IgG

    2.3 小鼠血清中IL-4和IFN-γ的測定

    首免后6周,rAd5EGS能誘導(dǎo)IL-4和IFN-γ的產(chǎn)生,但誘導(dǎo)IL-4的分泌水平低于滅活疫苗,rAd5poIL-2與rAd5EGS聯(lián)合免疫小鼠后能明顯增強(qiáng)rAd5EGS誘導(dǎo)IL-4和IFN-γ分泌的能力,差異極顯著(P<0.01);聯(lián)合免疫組誘導(dǎo)小鼠IL-4和IFN-γ分泌的能力也高于滅活疫苗組;采用Graphpad Prism5中的方差分析,結(jié)果見圖4。

    圖3 抗VP1特異性抗體IgG亞型檢測Fig.3 Detection of specific VP1IgG subtypes

    圖4 小鼠血清中IL-4和IFN-γ的水平Fig.4 Expression level of IL-4and IFN-γin mouse serum

    3 討論

    近年來,F(xiàn)MD新型疫苗的研究發(fā)展很快,但就表位疫苗或重組蛋白疫苗而言,其免疫效果依然不如傳統(tǒng)的滅活疫苗,因此,研究者試圖通過增加抗原表位或引入合適的輔助性T細(xì)胞表位以增強(qiáng)疫苗的免疫原性。我們前期通過Linker將O型FMDV的5個(gè)B細(xì)胞表位和2個(gè)T細(xì)胞表位基因串聯(lián),同時(shí)引入PARDE,構(gòu)建重組腺病毒(rAd5EGS),小鼠免疫試驗(yàn)顯示rAd5EGS能誘導(dǎo)特異性抗體分泌與細(xì)胞免疫應(yīng)答,但其免疫原性略低于滅活疫苗[9-10]。在FMD疫苗設(shè)計(jì)策略中,細(xì)胞因子如干擾素,IL-2、IL-6、IL-15等常常被用于增強(qiáng)疫苗免疫效果[11-12],其中IL-2是促進(jìn)T細(xì)胞生長的主要細(xì)胞因子,能促進(jìn)各種免疫效應(yīng)細(xì)胞的分化,包括T、B淋巴細(xì)胞,因此,在疫苗研究中,IL-2的應(yīng)用最為廣泛[13-14]。

    機(jī)體抵抗FMDV感染過程中主要依賴于中和抗體發(fā)揮的體液免疫應(yīng)答,但細(xì)胞免疫應(yīng)答對清除病毒也是必不可少的。我們前期研究結(jié)果顯示,rAd5EGS免疫小鼠后誘導(dǎo)細(xì)胞免疫應(yīng)答能力高于重組VP1疫苗,可見增加表位數(shù)量能明顯增強(qiáng)細(xì)胞免疫應(yīng)答,但是rAd5EGS誘導(dǎo)小鼠特異性抗體產(chǎn)生的能力仍低于滅活疫苗[11]。本研究結(jié)果顯示,聯(lián)合免疫rAd5poIL-2和rAd5EGS后不但能提高疫苗誘導(dǎo)的抗體分泌水平,而且可以增強(qiáng)疫苗誘導(dǎo)的淋巴細(xì)胞增殖能力,且免疫效果強(qiáng)于滅活疫苗。

    在小鼠體內(nèi),Th1型細(xì)胞會(huì)介導(dǎo)B細(xì)胞產(chǎn)生IgG2a型抗體,Th2型細(xì)胞則會(huì)介導(dǎo)B細(xì)胞產(chǎn)生IgG1型抗體。本研究中,rAd5EGS免疫小鼠后既能誘導(dǎo)IgG1的分泌,又能誘導(dǎo)IgG2a的分泌,與滅活疫苗相比,有促進(jìn)IgG2a分泌的優(yōu)勢,即促進(jìn)Th1免疫應(yīng)答;而聯(lián)合免疫rAd5poIL-2和rAd5EGS后能同時(shí)提高IgG1和IgG2a的分泌水平,與滅活疫苗組相比,聯(lián)合免疫組能明顯增強(qiáng)IgG2a的分泌水平,誘導(dǎo)IgG1的分泌水平略低于滅活疫苗組,但差異不顯著(P>0.05)。

    IFN-γ、IL-4分別是Th1和Th2細(xì)胞的特征性細(xì)胞因子。IL-4在體液免疫應(yīng)答中發(fā)揮重要作用;IFN-γ在抗病毒感染方面起著非常重要的作用,IFN-γ水平是衡量FMD疫苗能否預(yù)防亞臨床感染的重要指標(biāo)。本研究中,rAd5EGS免疫小鼠后既能誘導(dǎo)IFN-γ的分泌又能誘導(dǎo)IL-4的分泌,但其誘導(dǎo)IL-4的能力低于滅活疫苗,而聯(lián)合免疫組能同時(shí)提高IFN-γ和IL-4的分泌水平,且誘導(dǎo)細(xì)胞因子分泌的能力高于滅活疫苗。

    在小鼠體內(nèi),Th1細(xì)胞亞群主要介導(dǎo)細(xì)胞免疫應(yīng)答,Th2細(xì)胞亞群介導(dǎo)體液免疫應(yīng)答,本研究結(jié)果顯示rAd5EGS免疫小鼠后能明顯提高Th1免疫應(yīng)答,即促進(jìn)細(xì)胞免疫應(yīng)答。聯(lián)合免疫rAd5poIL-2和rAd5EGS后能同時(shí)增強(qiáng)Th1和Th2免疫應(yīng)答,有效地調(diào)節(jié)了Th1和Th2的平衡,既促進(jìn)了細(xì)胞免疫應(yīng)答,又促進(jìn)了體液免疫應(yīng)答,為重組IL-2作為FMD重組疫苗佐劑的臨床研究奠定了基礎(chǔ)。

    [1]施程洪,朱明旺,王繼華,等.口蹄疫滅活疫苗免疫增強(qiáng)劑的可行性應(yīng)用分析[J].中國預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報(bào),2014(1):58-62.

    [2]Jamal S M,Belsham G J.Foot-and-mouth disease:past,present and future[J].Vet Res,2013:44:116.

    [3]Park J H.Requirements for improved vaccines against footand-mouth disease epidemics[J].Clin Exp Vac Res,2013,2(1):8-18.

    [4]李婷婷,王君偉.口蹄疫合成肽疫苗研究進(jìn)展[J].動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展,2012,33(4):76-79.

    [5]Su C X,Duan X G,Liang L J,et al.Lycium barbarum polysaccharides as an adjuvant for recombinant vaccine through enhancement of humoral immunity by activating Tfh cells[J].Vet Immunol Immunopathol,2014,158(1-2):98-104.

    [6]Cao Y,Lu Z,Li D,et al.Evaluation of cross-protection against three topotypes of serotype O foot-and-mouth disease virus in pigs vaccinated with multi-epitope protein vaccine incorporated with poly(I:C)[J].Vet Microbiol,2014,168(2-4):294-301.

    [7]Su C,Duan X,Wang X,et al.Heterologous expression of FMDV immunodominant epitopes and HSP70inP.pastorisand the subsequent immune response in mice[J].Vet Microbiol,2007,124:256-263.

    [8]Shao J J,Wang J F,Chang H Y,et al.Immune potential of a novel multiple-epitope vaccine to FMDV type Asia 1in guinea pigs and sheep[J].Virol Sinica,2011,26(3):190-197.

    [9]王 鋒,段相國,趙 瑞,等.串聯(lián)表達(dá)FMDV多表位基因重組腺病毒免疫小鼠的效應(yīng)研究[J].寧夏醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào),2012,34(10):989-992.

    [10]蘇春霞,段相國,張艷麗,等.表達(dá)口蹄疫病毒多表位基因重組腺病毒的構(gòu)建[J].寧夏醫(yī)學(xué)雜志,2009,31(12):1111-1112.

    [11]Kim S M,Kim S K,Park J H,et al.A recombinant adenovirus bicistronically expressing porcine interferon-αand interferon-γenhances antiviral effects against foot-and-mouth disease virus[J].Antiviral Res,2014,104:52-58.

    [12]Su C,Duan X,Zheng J,et al.IFN-αas an adjuvant for adenovirus-vectored FMDV subunit vaccine through improving the generation of T follicular helper cells[J].PLoS One,2013,8(6):e66134.

    [13]蘇春霞,段相國,鄭 潔,等.共表達(dá)FMDV VP1-2A基因與豬IL-2重組腺病毒的構(gòu)建及其免疫原性研究[J].動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展,2014,35(2):1-5.

    [14]蘇春霞,段相國,曹瑞兵,等.重組豬IL-2對口蹄疫重組腺病毒免疫增強(qiáng)效果的研究[J].免疫學(xué)雜志,2014,30(2):110-113.

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