細(xì)胞塊切片免疫組化染色在胸腔積液病理診斷中的應(yīng)用

余衛(wèi)東　蔡育波　劉瓊?cè)愕?/p>

[摘要] 目的 探討細(xì)胞塊切片免疫組化染色應(yīng)用于胸腔積液病理診斷的臨床效果。 方法 選擇本院收治的60例胸腔積液患者作為研究對象，分別采用細(xì)胞塊切片免疫組化染色檢測和常規(guī)細(xì)胞涂片檢測，檢測患者的CK7、CD15、MOC-31、BerEP4、TTF-1、CEA、Calretinin、WT-1、CK5/6、Desmin等指標(biāo)表達(dá)，對鑒別診斷肺腺癌和間皮病變的相關(guān)免疫標(biāo)記組化進(jìn)行篩選。 結(jié)果 兩組胸腔積液的陽性檢出率相比，P<0.05。細(xì)胞塊切片免疫組化染色檢測分型診斷惡性胸腔積液的符合率高達(dá)96.67%，經(jīng)過組合性抗體檢測發(fā)現(xiàn)，間皮病變呈現(xiàn)Calretinin、WT-1、CK5/6、Desmin指標(biāo)高表達(dá)，而肺腺癌則呈現(xiàn)CK7、CD15、MOC-31、BerEP4、TTF-1、CEA指標(biāo)高表達(dá)，顯示細(xì)胞塊切片免疫組化染色檢測明顯優(yōu)于常規(guī)細(xì)胞涂片檢測（P<0.01）。 結(jié)論 在適當(dāng)?shù)目贵w組合下，胸腔積液細(xì)胞塊切片結(jié)合免疫組化染色檢測對肺腺癌和間皮瘤等惡性胸腔積液具有非常的病理鑒別診斷效果，值得臨床推廣。

[關(guān)鍵詞] 胸腔積液；細(xì)胞塊切片；細(xì)胞涂片；免疫組化；病理診斷

[中圖分類號] R446.8 [文獻(xiàn)標(biāo)識碼] B [文章編號] 1673-9701（2014）12-0127-03

[Abstract] Objective To explore the clinical effect of cell block slice immunohistochemical staining was applied to pathologic diagnosis of pleural effusion. Methods Selected 60 patients with pleural effusion were treated at our hospital as the research object， the cell block slice immunohistochemical staining were used respectively to test and conventional smear test， the testing of patient CK7，CD15，MOC-31，BerEP4， TTF-1，CEA，Calretinin，WT-1， CK5/6， Desmin index expression， such as for differential diagnosis between skin lesions of lung adenocarcinoma and filtered immune markers related to network stations. Results The two positive rate of pleural effusion compared， P<0.05. Cell block sections immunohistochemical staining typing diagnosis of malignant pleural effusion compliance rate of 96.67%， after a combination of antibodies detected， mesothelial lesions showed Calretinin， WT-1， CK5/6， Desmin indicators of high expression the lung cancer was showing CK7， CD15， MOC-31， BerEP4， TTF-1， CEA indicators of high expression， indicating cell block sections immunohistochemical staining was significantly better than conventional smear test（P <0.01）. Conclusion The under the appropriate combination of antibody， pleural effusion cells block biopsy combined with immunohistochemical staining detection for such as lung adenocarcinoma and mesothelioma pathological differential diagnosis of malignant pleural effusion is very effect， worth clinical promotion.

[Key words] Pleural effusion； Cell block sections； Smears； Immunohistochemistry； Pathological diagnosis

一直以來，漿膜腔積液的細(xì)胞病理學(xué)診斷具有非常重要的臨床意義。傳統(tǒng)上，漿膜腔積液的臨床診斷主要使用細(xì)胞涂片法，但是細(xì)胞涂片檢測的敏感度比較低，僅為50.0%～78.0%[1-3]。這是因為在細(xì)胞涂片檢測過程中，由于漿膜腔原發(fā)性間皮性腫瘤與轉(zhuǎn)移性癌癥的細(xì)胞形態(tài)比較相似，因此很難作為細(xì)胞病理鑒別診斷[4，5]。在臨床過程中，對間皮性腫瘤與轉(zhuǎn)移性癌癥的區(qū)分關(guān)系到臨床醫(yī)生的治療方案選擇和確定，因此對間皮性腫瘤與轉(zhuǎn)移性癌癥進(jìn)行鑒別診斷的意義非常重大，尤其是對于肺腺癌和惡性間皮瘤的鑒別診斷。為此，為了解胸腔積液細(xì)胞塊切片免疫組化染色的病理診斷方法，探討細(xì)胞塊切片免疫組化染色應(yīng)用于胸腔積液病理診斷的臨床效果，選擇本院2011年6月～2013年6月60例胸腔積液患者作為觀察對象，對比研究細(xì)胞涂片法與細(xì)胞塊切片結(jié)合免疫組化染色法對胸腔積液的鑒別診斷效能，以尋找對胸腔積液進(jìn)行病理鑒別診斷的最有效方法，現(xiàn)報道如下。endprint

1資料與方法

1.1一般資料

選擇本院2011年6月～2013年6月呼吸內(nèi)科門診所接收的60例胸腔積液患者。其中，男36例，女24例，年齡20～72歲，平均（47.6±15.7）歲。所有患者送檢標(biāo)本均為胸腔積液，每例患者均進(jìn)行細(xì)胞涂片和細(xì)胞塊切片制作。所有患者經(jīng)過臨床特征加影像學(xué)檢查均診斷為惡性胸腔積液，本研究均征得患者及其家屬同意，并簽署試驗意見書。

1.2方法

1.2.1標(biāo)本制備 所有細(xì)胞涂片和細(xì)胞塊標(biāo)本均取10 mL，分為3～5個管，使用離心機(jī)分離沉渣后制成HE涂片，離心率為3 000 r/min，分離時間為10 min。然后將分離后剩下的沉渣使用試鏡紙進(jìn)行包裹，固定在10%福爾馬林中性固定液中，經(jīng)過常規(guī)的處理后制備成細(xì)胞蠟塊，然后進(jìn)行細(xì)胞連續(xù)切片，切片厚度為3～4 μm。所有細(xì)胞涂片和細(xì)胞塊切片分別進(jìn)行HE染色和免疫組化染色。

1.2.2 HE染色標(biāo)本觀察[6] 所有觀察過程由兩位具有高級職稱的病理醫(yī)生進(jìn)行觀察。根據(jù)標(biāo)本中的細(xì)胞形態(tài)、黏附性以及核不典型性，如果出現(xiàn)反應(yīng)性增生間皮細(xì)胞，細(xì)胞的彌散性好，無不典型性，比較溫和則為良性；如果細(xì)胞成團(tuán)，核具有嚴(yán)重不典型性，細(xì)胞形態(tài)嚴(yán)重不溫和則為惡性；如果細(xì)胞彌散，核中-重度不典型性，或者是細(xì)胞成團(tuán)，核中-輕度不典型性則為不能肯定。

1.2.3免疫組化染色標(biāo)本觀察[7] 使用S-P法，Maxvision試劑盒，DAB顯色試劑；抗體選擇為CK7、CD15、MOC-31、BerEP4、TTF-1、CEA、Calretinin、WT-1，CK5/6、Desmin。所有操作按照說明書進(jìn)行。判斷標(biāo)準(zhǔn)為：CK7、BerEP4、CEA、MOC-31、CK5/6、Desmin細(xì)胞質(zhì)染色呈棕黃色為陽性，WT-1、TTF-1細(xì)胞核呈棕黃色為陽性，Calretinin的細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)均顯色為陽性，CD15細(xì)胞膜和細(xì)胞質(zhì)染色為陽性。

1.3統(tǒng)計學(xué)方法

采用SPSS15.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)處理，計數(shù)資料行χ2檢驗，P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1兩組檢測陽性比較

兩組胸腔積液的陽性檢出率相比，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（χ2=32.935，P<0.05），見表1。

2.2兩組病理診斷結(jié)果比較

細(xì)胞塊切片免疫組化染色檢測分型診斷惡性胸腔積液的符合率高達(dá)96.67%，經(jīng)過組合性抗體檢測發(fā)現(xiàn)，間皮病變呈現(xiàn)Calretinin、WT-1、CK5/6、Desmin指標(biāo)高表達(dá)，而肺腺癌則呈現(xiàn)CK7、CD15、MOC-31、BerEP4、TTF-1、CEA指標(biāo)高表達(dá)，顯示細(xì)胞塊切片免疫組化染色檢測明顯優(yōu)于常規(guī)細(xì)胞涂片檢測，兩組相比差異有高度統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01），見表2。

3討論

漿膜腔積液的細(xì)胞病理學(xué)診斷有非常重要的臨床意義。由于胸腔積液細(xì)胞學(xué)檢查的樣本采集比較容易，制備比較簡單快捷，因此細(xì)胞涂片法早已用于病理學(xué)檢查。但是，傳統(tǒng)使用細(xì)胞涂片法在漿膜腔積液的臨床診斷檢測中的敏感度比較低，一般僅為50.0%～78.0%[8，9]。這主要是因為在細(xì)胞涂片檢測過程中，漿膜腔原發(fā)性間皮性腫瘤與轉(zhuǎn)移性癌癥的細(xì)胞形態(tài)比較相似，因此很難作為細(xì)胞病理鑒別診斷。這種因胸腔積液細(xì)胞成分比較復(fù)雜而導(dǎo)致的細(xì)胞形態(tài)的相似性給經(jīng)HE染色的常規(guī)離心涂片用于判斷胸腔積液的性質(zhì)增加了難度[10]。尤其是對于間皮性腫瘤與轉(zhuǎn)移性癌癥，其細(xì)胞形態(tài)非常相似，以致于很難使用單純的細(xì)胞涂片檢測將其進(jìn)行區(qū)分。然而在臨床過程中，對間皮性腫瘤與轉(zhuǎn)移性癌癥的區(qū)分關(guān)系到臨床醫(yī)生的治療方案選擇和確定，因此對間皮性腫瘤與轉(zhuǎn)移性癌癥進(jìn)行鑒別診斷的意義非常重大，尤其是對于肺腺癌和惡性間皮瘤的鑒別診斷。從本文的分析來看，本組存在14例無法判斷胸腔積液是否良性?？梢钥闯?，細(xì)胞涂片HE染色檢測目前還存在諸多不足。

從上文的分析來看，細(xì)胞塊切片免疫組化染色對胸腔積液的陽性檢出率為100%，遠(yuǎn)高于僅單純性使用細(xì)胞涂片HE染色檢測組（P<0.05）。而且，經(jīng)過分析結(jié)果顯示，細(xì)胞塊切片免疫組化染色檢測分型診斷惡性胸腔積液的符合率高達(dá)96.67%，經(jīng)過進(jìn)行組合性抗體檢測發(fā)現(xiàn)，間皮病變呈現(xiàn)Calretinin、WT-1、CK5/6、Desmin指標(biāo)高表達(dá)，而肺腺癌則呈現(xiàn)CK7、CD15、MOC-31、BerEP4、TTF-1、CEA指標(biāo)高表達(dá)，顯示細(xì)胞塊切片免疫組化染色檢測明顯優(yōu)于常規(guī)細(xì)胞涂片檢測（P<0.01），說明細(xì)胞塊切片免疫組化染色無論在病理診斷的敏感性還是特異性上都明顯好于細(xì)胞涂片HE染色。這主要是因為細(xì)胞塊分布比較均勻，能夠充分保持脫落細(xì)胞的實際形態(tài)結(jié)構(gòu)，使得在進(jìn)行鑒別檢查時能夠清晰地辨別細(xì)胞的形態(tài)。而細(xì)胞涂片則因為分布不均勻，因而容易導(dǎo)致細(xì)胞重疊，從而致使細(xì)胞的結(jié)構(gòu)不清楚，細(xì)胞形態(tài)不清晰，非常不利于胸腔積液的病理鑒別檢查。尤其是細(xì)胞涂片易出現(xiàn)厚薄不勻、數(shù)量差異致使容易出現(xiàn)高背景著色，使得臨床假陽性檢出率增高，導(dǎo)致臨床出現(xiàn)誤診。而且細(xì)胞涂片由于其陽性表達(dá)細(xì)胞沒有相應(yīng)的對應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)，因而還增加臨床判讀的難度。然而，細(xì)胞塊切片免疫組化染色卻擁有細(xì)胞涂片所不能具備的優(yōu)點，比如細(xì)胞分布非常均勻、能夠有效避免假陽性、其陽性表達(dá)易于觀察、能夠進(jìn)行對應(yīng)性的準(zhǔn)確判讀、標(biāo)本可以永久性保持、有利于回顧性研究等等。這也是本文細(xì)胞塊切片免疫組化染色檢測分型診斷惡性胸腔積液的符合率高達(dá)96.67%的重要原因。

可見，使用細(xì)胞塊切片免疫組化染色可以有效避免細(xì)胞涂片HE染色帶來的高誤診率和高漏診率。從臨床應(yīng)用經(jīng)驗分析，細(xì)胞塊切片免疫組化染色對判斷漿膜腔積液的細(xì)胞類型和性質(zhì)是非常有利的。因此，從現(xiàn)在的技術(shù)水平來講，細(xì)胞塊切片免疫組化染色是對胸腔積液進(jìn)行病理診斷的最優(yōu)方法。然而，最為重要也最為關(guān)鍵的是，細(xì)胞塊切片的制定過程非常簡單，操作簡單易行，標(biāo)本易于保存，對于我國醫(yī)療水平比較低的廣大基層醫(yī)院來說最為實用。endprint

在進(jìn)行胸腔積液的細(xì)胞塊切片免疫組化染色檢測的過程中，檢測的敏感度和特異度對臨床鑒別診斷抗體組合的選擇的依賴也是比較大的。一般來講，肺腺癌有CK7、CD15、MOC-31、BerEP4、TTF-1、CEA表達(dá)，而間皮病變則主要有Calretinin、WT-1、CK5/6、Desmin表達(dá)。有臨床研究表明，CK7是臨床肺腺癌的最敏感的因子。由于這種組合的選擇對臨床進(jìn)行肺腺癌和間皮瘤的篩查非常重要，因此一般都將上述因子作為一線抗體進(jìn)行臨床應(yīng)用，當(dāng)然還需要結(jié)合臨床病史、隨訪資料等進(jìn)行綜合鑒別。

總而言之，在適當(dāng)?shù)目贵w組合下，胸腔積液細(xì)胞塊切片結(jié)合免疫組化染色檢測對諸如肺腺癌和間皮瘤等惡性胸腔積液具有非常的病理鑒別診斷效果，值得臨床予以推廣。

[參考文獻(xiàn)]

[1] 斯向東，李慶. 細(xì)胞塊切片及免疫組化在惡性漿膜腔積液診斷中的應(yīng)用體會[J]. 中國現(xiàn)代醫(yī)生，2011，49（28）：114-115.

[2] 石園，胡沁，周楊，等. 細(xì)胞塊技術(shù)在淋巴造血組織腫瘤診斷及鑒別診斷中的意義[J]. 中華病理學(xué)雜志，2010，39（8）：553-554.

[3] 尚士宣，趙曉丹，肖月英. 細(xì)胞塊切片免疫組化染色在腫瘤細(xì)胞學(xué)診斷中的應(yīng)用[J]. 腫瘤基礎(chǔ)與臨床，2010，23（6）：514-515.

[4] 侯剛，尹燕，韓丹. 胸腔積液脫落細(xì)胞免疫組化染色對腫瘤來源鑒別診斷價值的探討[J]. 中華腫瘤防治雜志，2012，19（21）：1647-1650.

[5] 毛瑛玉，楊敏，劉冬戈，等. 細(xì)胞塊切片免疫細(xì)胞化學(xué)染色在漿膜腔積液細(xì)胞學(xué)診斷中的應(yīng)用[J]. 中華病理學(xué)雜志，2009，38（8）：547-550.

[6] 梁宜騫，于洪波，郭穎，等. 肺癌特異性小分子肽在胸腔積液脫落細(xì)胞診斷中的應(yīng)用[J]. 中華腫瘤防治雜志，2010，17（9）：687-689.

[7] 宋小運(yùn)，許紹發(fā)，劉志東，等. 惡性胸膜間皮瘤術(shù)后預(yù)后因素分析[J]. 中華腫瘤防治雜志，2010，17（18）：1467-1469.

[8] 曹躍華，楊敏，陳隆文，等. 細(xì)胞病理學(xué)診斷圖譜及實驗技術(shù)[M]. 北京：北京科學(xué)技術(shù)出版社，2009：410-412.

[9] 謝深科，舒千玉，姚軍. 細(xì)胞塊免疫標(biāo)記在胸腹水細(xì)胞病理診斷與鑒別診斷中的價值[J]. 中國醫(yī)療前沿，2011，6（4）：73-74.

[10] 唐應(yīng)成，梁利斌，楊瑞仙，等. 胸腔積液細(xì)胞塊免疫組化染色的病理診斷價值[J]. 第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報，2012， 34（15）：1568-1571.

（收稿日期：2013-10-18）endprint

在進(jìn)行胸腔積液的細(xì)胞塊切片免疫組化染色檢測的過程中，檢測的敏感度和特異度對臨床鑒別診斷抗體組合的選擇的依賴也是比較大的。一般來講，肺腺癌有CK7、CD15、MOC-31、BerEP4、TTF-1、CEA表達(dá)，而間皮病變則主要有Calretinin、WT-1、CK5/6、Desmin表達(dá)。有臨床研究表明，CK7是臨床肺腺癌的最敏感的因子。由于這種組合的選擇對臨床進(jìn)行肺腺癌和間皮瘤的篩查非常重要，因此一般都將上述因子作為一線抗體進(jìn)行臨床應(yīng)用，當(dāng)然還需要結(jié)合臨床病史、隨訪資料等進(jìn)行綜合鑒別。

總而言之，在適當(dāng)?shù)目贵w組合下，胸腔積液細(xì)胞塊切片結(jié)合免疫組化染色檢測對諸如肺腺癌和間皮瘤等惡性胸腔積液具有非常的病理鑒別診斷效果，值得臨床予以推廣。

[參考文獻(xiàn)]

[1] 斯向東，李慶. 細(xì)胞塊切片及免疫組化在惡性漿膜腔積液診斷中的應(yīng)用體會[J]. 中國現(xiàn)代醫(yī)生，2011，49（28）：114-115.

[2] 石園，胡沁，周楊，等. 細(xì)胞塊技術(shù)在淋巴造血組織腫瘤診斷及鑒別診斷中的意義[J]. 中華病理學(xué)雜志，2010，39（8）：553-554.

[3] 尚士宣，趙曉丹，肖月英. 細(xì)胞塊切片免疫組化染色在腫瘤細(xì)胞學(xué)診斷中的應(yīng)用[J]. 腫瘤基礎(chǔ)與臨床，2010，23（6）：514-515.

[4] 侯剛，尹燕，韓丹. 胸腔積液脫落細(xì)胞免疫組化染色對腫瘤來源鑒別診斷價值的探討[J]. 中華腫瘤防治雜志，2012，19（21）：1647-1650.

[5] 毛瑛玉，楊敏，劉冬戈，等. 細(xì)胞塊切片免疫細(xì)胞化學(xué)染色在漿膜腔積液細(xì)胞學(xué)診斷中的應(yīng)用[J]. 中華病理學(xué)雜志，2009，38（8）：547-550.

[6] 梁宜騫，于洪波，郭穎，等. 肺癌特異性小分子肽在胸腔積液脫落細(xì)胞診斷中的應(yīng)用[J]. 中華腫瘤防治雜志，2010，17（9）：687-689.

[7] 宋小運(yùn)，許紹發(fā)，劉志東，等. 惡性胸膜間皮瘤術(shù)后預(yù)后因素分析[J]. 中華腫瘤防治雜志，2010，17（18）：1467-1469.

[8] 曹躍華，楊敏，陳隆文，等. 細(xì)胞病理學(xué)診斷圖譜及實驗技術(shù)[M]. 北京：北京科學(xué)技術(shù)出版社，2009：410-412.

[9] 謝深科，舒千玉，姚軍. 細(xì)胞塊免疫標(biāo)記在胸腹水細(xì)胞病理診斷與鑒別診斷中的價值[J]. 中國醫(yī)療前沿，2011，6（4）：73-74.

[10] 唐應(yīng)成，梁利斌，楊瑞仙，等. 胸腔積液細(xì)胞塊免疫組化染色的病理診斷價值[J]. 第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報，2012， 34（15）：1568-1571.

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在進(jìn)行胸腔積液的細(xì)胞塊切片免疫組化染色檢測的過程中，檢測的敏感度和特異度對臨床鑒別診斷抗體組合的選擇的依賴也是比較大的。一般來講，肺腺癌有CK7、CD15、MOC-31、BerEP4、TTF-1、CEA表達(dá)，而間皮病變則主要有Calretinin、WT-1、CK5/6、Desmin表達(dá)。有臨床研究表明，CK7是臨床肺腺癌的最敏感的因子。由于這種組合的選擇對臨床進(jìn)行肺腺癌和間皮瘤的篩查非常重要，因此一般都將上述因子作為一線抗體進(jìn)行臨床應(yīng)用，當(dāng)然還需要結(jié)合臨床病史、隨訪資料等進(jìn)行綜合鑒別。

總而言之，在適當(dāng)?shù)目贵w組合下，胸腔積液細(xì)胞塊切片結(jié)合免疫組化染色檢測對諸如肺腺癌和間皮瘤等惡性胸腔積液具有非常的病理鑒別診斷效果，值得臨床予以推廣。

[參考文獻(xiàn)]

[1] 斯向東，李慶. 細(xì)胞塊切片及免疫組化在惡性漿膜腔積液診斷中的應(yīng)用體會[J]. 中國現(xiàn)代醫(yī)生，2011，49（28）：114-115.

[2] 石園，胡沁，周楊，等. 細(xì)胞塊技術(shù)在淋巴造血組織腫瘤診斷及鑒別診斷中的意義[J]. 中華病理學(xué)雜志，2010，39（8）：553-554.

[3] 尚士宣，趙曉丹，肖月英. 細(xì)胞塊切片免疫組化染色在腫瘤細(xì)胞學(xué)診斷中的應(yīng)用[J]. 腫瘤基礎(chǔ)與臨床，2010，23（6）：514-515.

[4] 侯剛，尹燕，韓丹. 胸腔積液脫落細(xì)胞免疫組化染色對腫瘤來源鑒別診斷價值的探討[J]. 中華腫瘤防治雜志，2012，19（21）：1647-1650.

[5] 毛瑛玉，楊敏，劉冬戈，等. 細(xì)胞塊切片免疫細(xì)胞化學(xué)染色在漿膜腔積液細(xì)胞學(xué)診斷中的應(yīng)用[J]. 中華病理學(xué)雜志，2009，38（8）：547-550.

[6] 梁宜騫，于洪波，郭穎，等. 肺癌特異性小分子肽在胸腔積液脫落細(xì)胞診斷中的應(yīng)用[J]. 中華腫瘤防治雜志，2010，17（9）：687-689.

[7] 宋小運(yùn)，許紹發(fā)，劉志東，等. 惡性胸膜間皮瘤術(shù)后預(yù)后因素分析[J]. 中華腫瘤防治雜志，2010，17（18）：1467-1469.

[8] 曹躍華，楊敏，陳隆文，等. 細(xì)胞病理學(xué)診斷圖譜及實驗技術(shù)[M]. 北京：北京科學(xué)技術(shù)出版社，2009：410-412.

[9] 謝深科，舒千玉，姚軍. 細(xì)胞塊免疫標(biāo)記在胸腹水細(xì)胞病理診斷與鑒別診斷中的價值[J]. 中國醫(yī)療前沿，2011，6（4）：73-74.

[10] 唐應(yīng)成，梁利斌，楊瑞仙，等. 胸腔積液細(xì)胞塊免疫組化染色的病理診斷價值[J]. 第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報，2012， 34（15）：1568-1571.

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