復(fù)方醋酸曲安奈德搽劑中醋酸曲安奈德含量測定

賈燕花，劉皈陽，馬建麗，王曉青，李翔

(解放軍總醫(yī)院第一附屬醫(yī)院藥劑藥理科，北京 100048)

復(fù)方醋酸曲安奈德搽劑中醋酸曲安奈德含量測定

賈燕花，劉皈陽，馬建麗，王曉青，李翔

(解放軍總醫(yī)院第一附屬醫(yī)院藥劑藥理科，北京 100048)

目的 建立測定復(fù)方醋酸曲安奈德搽劑中醋酸曲安奈德含量的高效液相色譜法。方法用Welch Materials Ultimate XB-C8(250 mm×4.6 mm,5 μm)色譜柱;流動(dòng)相為甲醇-水(60∶40);流速為1.0 mL·min-1;檢測波長為240 nm。結(jié)果醋酸曲安奈德在12～32 μg·mL-1的濃度范圍內(nèi)呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系,相關(guān)系數(shù)為0.999 9;日內(nèi)精密度為0.33%(n=6);平均回收率為99.8%(n=9)。結(jié)論該方法快捷方便,結(jié)果可靠,可作為復(fù)方醋酸曲安奈德搽劑的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)。

曲安奈德,醋酸；搽劑；色譜法,高效液相；含量測定

復(fù)方醋酸曲安奈德搽劑由解放軍總醫(yī)院第一附屬醫(yī)院制備,為無色澄明的液體,具有消炎、抗免疫反應(yīng)、止癢和鎮(zhèn)痛的作用,主要用于神經(jīng)性皮炎、脂溢性皮炎、濕疹等皮膚病,其主要成分為醋酸曲安奈德和鹽酸普魯卡因。文獻(xiàn)報(bào)道該制劑中醋酸曲安奈德含量測定的方法有分光光度法[1];同時(shí)醋酸曲安奈德為單一制劑時(shí),測定的方法有高效液相色譜法[2-3]。筆者未見關(guān)于高效液相色譜法測定醋酸曲安奈德搽劑中醋酸曲安奈德含量的報(bào)道。參考文獻(xiàn)[4-7],筆者在本實(shí)驗(yàn)中采用反相高效液相色譜(RP-HPLC)法測定復(fù)方醋酸曲安奈德搽劑中醋酸曲安奈德含量,方法簡便、快速,結(jié)果滿意,可用于復(fù)方醋酸曲安奈德搽劑的質(zhì)量控制。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 Agilent 1200高效液相色譜儀(VWD檢測器,美國安捷倫科技有限公司),HITACHI U3000型紫外分光光度儀,AE204型十萬分之一電子分析天平(瑞士梅特勒托利多科技公司)。

1.2 試劑 對(duì)照品醋酸曲安奈德(批號(hào):100125-201105)和曲安奈德(批號(hào):100055-201103)由中國食品藥品檢定研究院提供,醋酸曲安奈德含量97.8%;復(fù)方醋酸曲安奈德搽劑由解放軍總醫(yī)院第一附屬醫(yī)院提供[批準(zhǔn)文號(hào):總制字(2001)F02001,批號(hào):130109, 130130,130218]。實(shí)驗(yàn)用水為雙蒸水,甲醇為色譜純。

2 方法與結(jié)果

2.1 溶液的制備 醋酸曲安奈德對(duì)照品溶液:精密稱取醋酸曲安奈德對(duì)照品50 mg,置50 mL量瓶,加甲醇定容,作為對(duì)照品儲(chǔ)備液A;精密量取1 mL,置50 mL量瓶,加流動(dòng)相定容,即得醋酸曲安奈德對(duì)照品溶液。

曲安奈德對(duì)照品溶液:精密稱取曲安奈德對(duì)照品50 mg,置50 mL量瓶,加甲醇定容,作為對(duì)照品儲(chǔ)備液B;精密量取1 mL,置50 mL量瓶,加流動(dòng)相定容,即得曲安奈德對(duì)照品溶液。

系統(tǒng)適用性溶液:精密量取對(duì)照品儲(chǔ)備液A和對(duì)照品儲(chǔ)備液B各0.5 mL,置50 mL量瓶,加流動(dòng)相定容,即得混合對(duì)照品溶液。

供試品溶液:精密量取復(fù)方醋酸曲安奈德搽劑1 mL,轉(zhuǎn)入50 mL量瓶,加流動(dòng)相稀釋到刻度,搖勻即可。

陰性樣品溶液:按照處方配置不加醋酸曲安奈德的空白對(duì)照。

2.2 色譜條件 色譜柱:Welch Materials Ultimate XBC8(250 mm×4.6 mm,5 μm);流動(dòng)相為甲醇-水(60∶40),流速1.0 mL·min-1,檢測波長240 nm,進(jìn)樣量20 μL。

2.3 系統(tǒng)適用性實(shí)驗(yàn)與專屬性實(shí)驗(yàn) 在上述色譜條件下,取對(duì)照品溶液、供試品溶液和系統(tǒng)適用性溶液各20 μL,分別進(jìn)樣HPLC分析。制劑中醋酸曲安奈德有效分離,出峰順序?yàn)榍材蔚路濉⒋姿崆材蔚路?曲安奈德峰與醋酸曲安奈德峰的分離度＞10.0,實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明色譜峰分離度高,系統(tǒng)適應(yīng)性良好。

取復(fù)方醋酸曲安奈德搽劑陰性樣品溶液和供試品溶液,按“2.2”項(xiàng)條件分別測定,記錄色譜圖,醋酸曲安奈德的保留時(shí)間為18.2 min,而陰性樣品溶液在該處無色譜保留行為,表明陰性樣品對(duì)醋酸曲安奈德色譜峰不構(gòu)成干擾,本方法專屬性良好。

2.4 線性關(guān)系考察 精密量取對(duì)照品儲(chǔ)備液A0.6, 0.8,1.0,1.2,1.6 mL,分別置于50 mL量瓶,用流動(dòng)相稀釋至刻度,搖勻;分別取上述溶液20 μL注入液相色譜儀,記錄色譜圖。以濃度(C,μg·mL-1)為橫坐標(biāo),峰面積(A)為縱坐標(biāo)進(jìn)行一元線性回歸。醋酸曲安奈德的回歸方程為:A=3.648 8×104C+20.823,r= 0.999 9。結(jié)果顯示:在進(jìn)樣量為20 μL時(shí),醋酸曲安奈德進(jìn)樣濃度在12～32 μg·mL-1范圍內(nèi),與峰面積呈良好的線性關(guān)系。

2.5 精密度實(shí)驗(yàn) 精密吸取對(duì)照品溶液,按照上述色譜條件連續(xù)進(jìn)樣6次,每次進(jìn)樣量20 μL,以醋酸曲安奈德峰面積計(jì)算RSD。計(jì)算得醋酸曲安奈德的日內(nèi)精密度RSD為0.33%,表明實(shí)驗(yàn)方法精密度良好。

2.6 重復(fù)性實(shí)驗(yàn) 取同一批樣品(批號(hào):130218,含量0.095%),按照“2.1”項(xiàng)供試品溶液配制方法,制備6份供試品溶液,按照上述色譜條件進(jìn)樣分析,以醋酸曲安奈德峰面積計(jì)算RSD為1.3%。表明該實(shí)驗(yàn)方法重復(fù)性良好。

2.7 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn) 取相同的供試品溶液(批號(hào): 130218),分別在0,2,4,6,8,12 h進(jìn)樣測定醋酸曲安奈德的峰面積,計(jì)算RSD。結(jié)果醋酸曲安奈德峰面積的RSD為0.20%,表明供試品溶液在12 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.8 加樣回收率實(shí)驗(yàn) 精密量取對(duì)照品儲(chǔ)備液A 0.3,0.5和0.7 mL各3份,分別置50 mL量瓶,每份分別精密加入已準(zhǔn)確測定含量的樣品0.5 mL(批號(hào): 130218,含量:0.095%),用流動(dòng)相稀釋至刻度,搖勻。按照上述色譜條件,分別量取20 μL進(jìn)樣測定。結(jié)果表明,醋酸曲安奈德平均回收率為99.8%,RSD為1.24%(n=9)。本標(biāo)準(zhǔn)確定的復(fù)方醋酸曲安奈德搽劑中醋酸曲安奈德的含量測定方法的平均回收率符合含量測定要求。見表1。

表1 醋酸曲安奈德回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果Tab.1 Recovery of triamcinolone acetonide acetate μg

2.9 樣品含量測定 精密量取本品適量,用流動(dòng)相定量稀釋制成每毫升含醋酸曲安奈德約0.02 mg溶液,搖勻,精密量取20 μL,注入液相色譜儀,記錄色譜圖;另精密稱取對(duì)照品適量,加甲醇溶解并用流動(dòng)相定量稀釋制成每毫升約含0.02 mg的溶液,精密量取1 mL,置50 mL量瓶,用流動(dòng)相稀釋至刻度,搖勻,同法測定,按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算,即得。批號(hào)130109,130130, 130218醋酸曲安奈德搽劑中醋酸曲安奈德含量測定結(jié)果分別為0.094%,0.096%,0.095%,RSD分別為0.07%,0.23%,0.41%。

3 討論

3.1 色譜柱的選擇 筆者考察了C8色譜柱和C18色譜柱的影響。醋酸曲安奈德在C18色譜柱上28.4 min出峰,在C8色譜柱上約18.2 min出峰,同時(shí)發(fā)現(xiàn)C8色譜柱的色譜圖優(yōu)于C18色譜柱,因此選擇C8色譜柱。

3.2 檢測波長的選擇 由測得的紫外吸收?qǐng)D譜可知,醋酸曲安奈德最大吸收波長為240 nm;高效液相色譜中醋酸曲安奈德在約18.2 min出峰,而陰性對(duì)照品在該波長處無吸收,表明醋酸曲安奈德在240 nm處不受處方中其他組分的影響。因此選擇240 nm作為檢測波長。

3.3 流動(dòng)相、檢測濃度以及溶劑的選擇 由于醋酸曲安奈德在水中不溶解,根據(jù)《中華人民共和國藥典》(2010年版)中醋酸曲安奈德和《日本藥典》(16版)中曲安奈德的含量測定方法,確定流動(dòng)相為甲醇-水(60∶40),濃度約為0.02 mg·mL-1。同時(shí)經(jīng)過實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)在制備樣品時(shí)先用甲醇溶解,再用流動(dòng)相進(jìn)一步稀釋可以獲得良好的色譜峰。

該方法快捷方便,結(jié)果可靠,可用于復(fù)方醋酸曲安奈德搽劑中醋酸曲安奈德的含量測定。

[1] 陳新善,劉玉波,張波,等.分光光度法測定復(fù)方醋酸曲安奈德搽劑中醋酸曲安奈德的含量[J].解放軍藥學(xué)學(xué)報(bào), 2001,17(4):227-229.

[2] 國家藥典委員會(huì).中華人民共和國藥典(二部)[M].北京:中國醫(yī)藥科技出版社,2010:1122-1123.

[3] http://jpdb.nihs.go.jp/jp15e/(第16改正日本藥局方, English version):1525-1526.

[4] 王玉,王鐵杰.反相高效液相色譜法測定復(fù)方醋酸曲安奈德溶液中醋酸曲安奈德和氯霉素含量[J].中國醫(yī)院藥學(xué)雜志,2000,20(7):415-417.

[5] 郭江紅,趙亞萍,姜紅,等.RP-HPLC法測定曲安奈德氯霉素溶液的含量及有關(guān)物質(zhì)[J].藥物分析雜志,2012,32 (2):323-326.

[6] 呂應(yīng)年,吳怡,吳鐵.HPLC法同時(shí)測定炎菌清搽劑中水楊酸、醋酸曲安奈德和利福平的含量[J].藥物分析雜志, 2008,28(12):2062-2064.

[7] 王吉華,丁華,張迪.高效液相色譜法測定復(fù)方醋酸曲安奈德滴耳液的含量[J].中國醫(yī)藥導(dǎo)報(bào),2009,6(21):48-50.

DOI 10.3870/yydb.2014.03.030

Content Determination of Triamcinolone Acetonide Acetate in Compound Tri-amcinolone Acetonide Acetate Liniment

JIA Yan-hua,LIU Gui-yang,MA Jian-li,WANG Xiao-qing,LI Xiang
(Department of Pharmacy,the First Affiliated Hospital of PLA General Hospital,Beijing 100048,China)

Objective To establish a HPLC method to determine triamcinolone acetonide acetate in compound triamcinolone acetonide acetate liniment.MethodsHPLC was used with Welch Materials Ultimate XB-C8(250 mm×4.6 mm,5 μm) as chromatographic column with a mobile phase of methanol-water(60∶40).The detection wavelength was 240 nm,and the flow rate was 1.0 mL·min-1.ResultsThe concentration of triamcinolone acetonide acetate was linear within the range of 12-32 μg·mL-1(r=0.999 9).The intra-day precision RSD(n=6)was 0.33%.The average recovery(n=9)was 99.8%.ConclusionThe method is simple,rapid,accurate and reproducible.The method is suitable for determination of the content of triamcinolone acetonide acetate in compound triamcinolone acetonide acetate liniment.

Triamcinolone acetonide,acetate;Liniment;HPLC;Content of determination

R977.1;R927.1

A

1004-0781(2014)03-0378-03

2013-05-10

2013-06-12

賈燕花(1982-),女,河南焦作人,主管藥師,博士,主要研究方向:藥物分析。電話:010-66867088,E-mail：yanhuajia@163.com。

劉皈陽(1972-),男,副主任藥師,主要研究方向:醫(yī)院藥學(xué)。電話:010-66867081,E-mail：liuguiy@live.cn。