PAI-1在慢性化膿性中耳炎的表達(dá)狀況

摘要：目的觀察PAI-1在慢性化膿性中耳炎肉芽組織的表達(dá)，并探討其與中耳炎發(fā)生發(fā)展的關(guān)系。方法利用免疫組化法測(cè)定24例中耳炎肉芽組織中PAI-1的表達(dá)情況。結(jié)果24例中耳肉芽組織中的PAI-1表達(dá)陽(yáng)性率為69.30%。結(jié)論P(yáng)AI-1在慢性化膿性中耳炎肉芽組織的表達(dá)明顯上調(diào)，可能為非手術(shù)治療慢性化膿性中耳炎開(kāi)辟一條新思路。

關(guān)鍵詞：肉芽組織；中耳炎慢性化膿性中耳炎（CSOM）是耳鼻咽喉科臨床上一種常見(jiàn)病多發(fā)病，其病理過(guò)程是一系列的炎癥病理級(jí)聯(lián)反應(yīng)，主要表現(xiàn)為纖維母細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞的增生，并伴有淋巴細(xì)胞、漿細(xì)胞和巨噬細(xì)胞等慢性炎性細(xì)胞的浸潤(rùn)，致使局部粘膜組織發(fā)生過(guò)度增生進(jìn)而形成肉芽組織。人們已發(fā)現(xiàn)尿激酶性纖溶酶原激活物（uPA）系統(tǒng)在多種慢性炎癥中存在高表達(dá)，尤其是尿激酶性纖溶酶原激活物抑制劑-1（PAI-1）與各種炎癥的關(guān)系研究較多。但uPA系統(tǒng)與CSOM病理特征之間的關(guān)系的研究卻鮮有報(bào)道。本文通過(guò)檢測(cè)24例CSOM肉芽組織中的PAI-1的表達(dá)情況，探討PAI-1在中耳炎肉芽組織發(fā)生發(fā)展過(guò)程中的作用。

1資料與方法

1.1一般資料 收集2011年9月~2012年3月就診于我院須行手術(shù)治療的慢性化膿性中耳炎患者24例，男8例，女16例，年齡分布為17~59歲，術(shù)前均行顳骨CT檢查，聽(tīng)力學(xué)全套檢查；術(shù)中自中耳腔內(nèi)取出肉芽組織作為標(biāo)本，行HE染色及免疫組化。

1.2試劑和儀器 一抗兔抗人PAI-1多克隆抗體以及SP免疫組化試劑盒和DAB顯色劑均為武漢博士德公司產(chǎn)品。主要儀器有蠟塊包埋機(jī)、石蠟切片機(jī)、電熱恒溫培養(yǎng)箱、顯微鏡。

1.3方法 標(biāo)本一經(jīng)取下立即用4%甲醛固定，常規(guī)石蠟包埋。石蠟標(biāo)本切片4 μm。分別行HE染色及免疫組化。免疫組化步驟按產(chǎn)品說(shuō)明書進(jìn)行，顯微鏡觀察、計(jì)數(shù)并攝像。

1.4結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn) 結(jié)合HE染色切片，根據(jù)蘇木素復(fù)染后的細(xì)胞形態(tài)，鑒別肉芽組織中的不同細(xì)胞類型及組織結(jié)構(gòu)；肉芽組織中細(xì)胞膜或細(xì)胞質(zhì)中出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽(yáng)性細(xì)胞，未見(jiàn)棕黃色顆粒為陰性細(xì)胞，根據(jù)陽(yáng)性細(xì)胞占全部細(xì)胞的比例判斷，（-）為陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)占全部細(xì)胞<10%或無(wú)陽(yáng)性細(xì)胞；（+）為陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)占全部細(xì)胞的10%～30%；（++）為陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)占40%～69%；（+++）為陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)>70%，對(duì)同一標(biāo)本取5個(gè)不同視野，取平均值。

2結(jié)果

2.1 HE染色 中耳肉芽組織內(nèi)可見(jiàn)不同程度炎細(xì)胞浸潤(rùn)包括淋巴細(xì)胞、成纖維細(xì)胞，巨噬細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞等，以淋巴細(xì)胞為主，并可見(jiàn)增生的毛細(xì)血管，血管周圍可見(jiàn)淋巴細(xì)胞和纖維增生包繞，見(jiàn)圖1。

2.2 PAI-1在肉芽組織中的表達(dá) 肉芽組織中PAI-1陽(yáng)性表達(dá)主要定位于細(xì)胞質(zhì)，形如戒指狀、環(huán)狀或星狀，呈現(xiàn)黃色或棕黃色顆粒，主要分布于淋巴細(xì)胞，單核巨噬細(xì)胞，血管內(nèi)皮細(xì)胞、成纖維細(xì)胞，見(jiàn)圖2。PAI-1表達(dá)總陽(yáng)性率為69.30%，其中（+）5例，（++）10例，（+++）2例，（-）的7例。

3討論

uPA系統(tǒng)是纖溶系統(tǒng)的一部分，它是廣泛存在于機(jī)體內(nèi)的一種絲氨酸蛋白分解酶，包括uPA、uPA受體（uPAR）及其抑制劑（PAI-1），對(duì)防止血栓形成和保持血流通暢有著重要意義。已有大量研究表明，細(xì)胞外基質(zhì)的降解是腫瘤組織侵潤(rùn)和轉(zhuǎn)移的必要條件，uPA系統(tǒng)介導(dǎo)的纖維蛋白溶解和腫瘤的侵潤(rùn)轉(zhuǎn)移有著密切關(guān)系。uPA系統(tǒng)不僅作用于腫瘤細(xì)胞，對(duì)非腫瘤細(xì)胞也有廣泛活性，尤其是對(duì)炎癥性疾病的發(fā)展和轉(zhuǎn)歸有著重要意義，當(dāng)慢性炎癥發(fā)生時(shí)，uPA促使炎性細(xì)胞遷移和組織修復(fù)，并介導(dǎo)細(xì)胞外基質(zhì)蛋白的降解，uPAR與uPA高度特異結(jié)合，而PAI-1的作用則是抑制uPA活性，有學(xué)者發(fā)現(xiàn)在uPA、uPAR及PAI-1三因子中PAI-1與炎癥發(fā)生發(fā)展的關(guān)系更密切，作用更為突出[1]，PAI-1在多種炎癥中呈現(xiàn)上調(diào)狀態(tài)，可推測(cè)其在炎癥中上調(diào)是一種普遍的現(xiàn)象。

本研究發(fā)現(xiàn)PAI-1在肉芽組織中呈現(xiàn)高表達(dá)狀態(tài)。在COPD臨床試驗(yàn)[5]及大鼠COPD模型[2]試驗(yàn)中結(jié)果顯示PAI-1在肺炎性組織中表達(dá)明顯高于健康對(duì)照組；在小鼠感染炭疽桿菌后6 h，即可見(jiàn)肝內(nèi)PAI-1mRNA和蛋白均顯著增加[3]，這提示我們PAI-1在多種炎癥性疾病中的促進(jìn)炎癥細(xì)胞趨化和影響炎癥因子表達(dá)的非纖溶功能，同樣在CSOM也發(fā)揮著重要作用。

本實(shí)驗(yàn)還發(fā)現(xiàn)PAI-1在肉芽組織中表達(dá)明顯增強(qiáng)部位主要集中在肉芽組織中新生毛細(xì)血管周圍，并主要集中在血管內(nèi)皮細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、淋巴細(xì)胞的胞質(zhì)與胞膜上。PAI-1對(duì)細(xì)胞的遷移具有雙重作用，①抑制細(xì)胞遷移作用主要是通過(guò)阻斷uPA趨化運(yùn)動(dòng)和阻止玻連蛋白與uPAR、整合素的結(jié)合來(lái)減弱細(xì)胞粘附，從而抑制uPA對(duì)ECM降解作用；②通過(guò)增加細(xì)胞活動(dòng)力、誘導(dǎo)細(xì)胞分離、直接或間接調(diào)節(jié)其他趨化因子的水平來(lái)維持趨化梯度(如IL-2、8)[4]。再加上缺氧及酸性環(huán)境的存在使炎癥進(jìn)一步加重，刺激血管新生，形成肉芽。

由于存在倫理道德問(wèn)題，本實(shí)驗(yàn)未能取正常人的耳內(nèi)組織作為對(duì)照組，是本實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)中的一大遺憾。根據(jù)各種文獻(xiàn)記載，不同部位的正常組織內(nèi)PAI-1表達(dá)均為陰性，故推測(cè)正常中耳腔內(nèi)組織的PAI-1的表達(dá)可能是陰性，但這也僅僅是一種猜測(cè)，需要科學(xué)的試驗(yàn)進(jìn)行進(jìn)一步的驗(yàn)證。

總結(jié)以上幾點(diǎn)，我們認(rèn)為在肉芽組織的形成中PAI-1起著不可或缺的作用。使通過(guò)干擾PAI-1表達(dá)，從而下調(diào)炎癥因子的表達(dá)，減少炎癥細(xì)胞的募集，減少肉芽組織的形成與發(fā)展成為可能，為保守治療慢性中耳炎開(kāi)辟一條新途徑。

參考文獻(xiàn)：

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編輯/肖慧