胃癌淋巴結(jié)浸出液癌胚抗原含量在淋巴結(jié)微轉(zhuǎn)移中的意義

摘要：目的了解胃癌淋巴結(jié)浸出液中癌胚抗原含量在評估胃癌淋巴結(jié)微轉(zhuǎn)移中的臨床意義。方法對2012年4月~2013年4月收入院的71例行D2胃癌根治術(shù)患者，應(yīng)用電光化學(xué)法測量清掃的淋巴結(jié)浸出液癌胚抗原含量，同常規(guī)HE染色法、免疫組化法檢查進行對比分析。結(jié)果同常規(guī)HE染色法進行對比分析顯示，電光化學(xué)法測量癌胚抗原含量檢測淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移在敏感度方面高于常規(guī)HE染色法，P<0.05，有統(tǒng)計學(xué)意義，同免疫組化法對比分析，兩種方法在敏感度方面無統(tǒng)計學(xué)差異。結(jié)論根據(jù)胃癌術(shù)后淋巴結(jié)浸出液癌胚抗原含量判斷淋巴結(jié)微轉(zhuǎn)移的敏感度優(yōu)于HE染色法，有統(tǒng)計學(xué)意義。同免疫組化法無統(tǒng)計學(xué)差異。在指導(dǎo)術(shù)后早期應(yīng)用輔助治療及PN方面有一定的意義。

關(guān)鍵詞：胃癌；淋巴結(jié)浸出液；癌胚抗原；電光化學(xué)法；HE染色法

Clinical Significance of Carcinoembryonic Antigen Level in Lymph Node Leaching Solution with Lymph Node Micrometastasis

ZHAO Chuan-jie，LIU Mao-rong，LI Shu-liang，LI Pei-zhe

(Deparment of Gastrointestial Surgery，The Second People’s Hospital of Liaocheng City，Linqing 252600，Shandong，China)

Abstract：Objective To assess the clinical significance of carcinoembryonic antigen level in lymph node leaching solution with lymph node micrometastasis. Methods Patients who underwent the radical operation of gastric cancer from 2012 April to 2013 April were included in this experiment. We use the electro-optic chemical detection to detect the CEA content in leaching solution of lymph node in order to comparative analyze with routine HE staining and immuneohistochemistry. ResultsThe results in the electro-optic chemical method has a higher sensitivity than that in the conventional HE staining(P<0.05).However，there is also no statistical difference between the results in electro-optic chemical and immunohistochemistry method about sensitivity. ConclusionCompared with the conventional HE staining method， to detect the carcinoembryonic antigen level in lymph node leaching solution with electro-optic chemical method has a higher sensitivity to assess the lymph node micrometastasis. However，there is no statistical difference with immunohistochemistry. As a result， it is valuable to do eary adjuvant treatment and make PN stage in clinic.

Key words：Gastric cancer;Leaching solution of lymph nodes;CEA;Electro-optic chemical method;Hematoxylin-eosin staining胃癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移是影響胃癌術(shù)后預(yù)后最主要的原因之一。研究表明，胃癌轉(zhuǎn)移是在微轉(zhuǎn)移的基礎(chǔ)上發(fā)展而來，而淋巴結(jié)微轉(zhuǎn)移是其中最為常見的轉(zhuǎn)移方式。傳統(tǒng)的HE染色法在判斷淋巴結(jié)微轉(zhuǎn)移方面具有一定的局限性，漏診率高。我們自2012年4月~2013年4月應(yīng)用電光化學(xué)法對行胃癌D2根治術(shù)患者淋巴結(jié)浸出液進行癌胚抗原檢測，同HE染色法及免疫組化法進行對比分析，報告如下：

1資料與方法

1.1 一般資料男性47例，女性24例。按照癌灶位置區(qū)分：位于胃竇41例，位于胃體20例，位于賁門4例，彌漫浸潤型6例。根據(jù)年齡區(qū)分：年齡30~76歲，中位年齡58.84歲，標準差9.71。據(jù)原發(fā)腫瘤浸潤程度，T1共8例，T2共4例，T3共54例，T4共5例；據(jù)分化程度，低分化的有46例，中-低分化的有22例，高分化的有3例。

1.2 方法①術(shù)前檢測血清癌胚抗原含量。②將清掃的淋巴結(jié)分別放入含有1ml溫生理鹽水的試管內(nèi)，置入WBZ-50 水浴恒溫培養(yǎng)振蕩器室溫下震蕩20min，取出淋巴結(jié)。將含有淋巴結(jié)浸出液的試管放入全自動電光化學(xué)分析儀內(nèi)進行計算，得出數(shù)據(jù)。③同枚淋巴結(jié)進行常規(guī)HE染色檢查，HE染色提示陰性淋巴結(jié)進行免疫組化法檢測。④患者術(shù)后第2d常規(guī)檢測血清癌胚抗原含量。⑤根據(jù)劉文等[1]研究結(jié)直腸癌患者淋巴結(jié)浸出液中癌胚抗原含量方法，將淋巴結(jié)浸出液中癌胚抗原含量50ng/mg定位閾值≥50ng/mg為陽性，<50ng/mg為陰性。將電光化學(xué)法提示陽性淋巴結(jié)同HE染色法、免疫組化法提示陽性淋巴結(jié)進行對比分析。⑥分析患者血清術(shù)前、術(shù)后變化值與三種方法提示清掃陽性淋巴結(jié)數(shù)的關(guān)系。

1.3將數(shù)據(jù)輸入計算機，應(yīng)用SPSS19.0統(tǒng)計軟件包對資料進行統(tǒng)計學(xué)分析。統(tǒng)計檢驗水準為0.05，以P<0.05視為差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。計量資料分析：①計量資料的t檢驗。②兩變量資料之間的相關(guān)分析。計數(shù)資料：配對四格表資料的χ2檢驗。

2結(jié)果

2.1在71例行D2胃癌根治術(shù)患者中共清掃淋巴結(jié)1923枚，HE染色法檢測胃癌淋巴結(jié)總數(shù)為1923枚，其中陽性603枚，陰性1320枚，將淋巴結(jié)浸出液中CEA含量50ng/mg定為閾值，≥50ng/mg淋巴結(jié)為798枚，<50ng/mg 淋巴結(jié)有1125枚（見表1~2）。

2.2本組實驗中每例患者清掃淋巴結(jié)數(shù)15~45枚，將每位患者術(shù)前、術(shù)后血清癌胚抗原含量降低值同三種檢測方法提示陽性淋巴結(jié)數(shù)進行分析（見表3）。

3結(jié)論

癌胚抗原在胃癌轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)浸出液中高表達，而在無轉(zhuǎn)移的淋巴結(jié)浸出液中低表達，同常規(guī)HE染色法相比，具有簡捷、快速、準確的優(yōu)點，在檢測淋巴結(jié)微轉(zhuǎn)移方面比常規(guī)HE染色敏感度高，同免疫組化法在敏感度方面無統(tǒng)計學(xué)差異，對于指導(dǎo)術(shù)后早期應(yīng)用輔助治療及PN分期方面有一定的意義。

4討論

胃癌（GC）在消化道腫瘤中胃癌發(fā)病率在消化道腫瘤中排名第一，在惡性消化道腫瘤中胃癌病死率位居第二位，胃癌死亡的重要的原因是復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移，而淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移是最常見的轉(zhuǎn)移方式，即便是胃癌早期，其淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率仍然可以達到8%~15%[2]。研究表明，淋巴結(jié)微轉(zhuǎn)移對于預(yù)后存在影響，無淋巴結(jié)微轉(zhuǎn)移患者的術(shù)后5年生存率可達到76%（P<0.05），而存在淋巴結(jié)微轉(zhuǎn)移患者的5年生存率僅達到49%[3]，因此，快速、準確的病理分期對于早期輔助化療以及評估患者預(yù)后至關(guān)重要。有資料提示微轉(zhuǎn)移在胃癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移過程中早期已經(jīng)發(fā)生，證明胃癌微轉(zhuǎn)移中淋巴結(jié)微轉(zhuǎn)移是一項獨立的影響因素，Siewert[4]等學(xué)者甚至認為胃癌唯一的獨立預(yù)后因素就是淋巴結(jié)微轉(zhuǎn)移，Keguchi和Nakajo等[5]通過免疫組織化學(xué)法研究發(fā)現(xiàn)，出現(xiàn)淋巴結(jié)微轉(zhuǎn)移胃癌患者預(yù)后較差，經(jīng)過多變量分析提示淋巴結(jié)微轉(zhuǎn)移是胃癌患者獨立的預(yù)后因素。

胃癌術(shù)后常用病理檢查方法為HE染色法，對切片的淋巴結(jié)選取一張或數(shù)張具有代表性的組織切片進行HE染色，然后進行常規(guī)組織學(xué)檢查。對于小于2mm的微小癌灶，常常檢測不到，而免疫組化法要求切片厚度不超過2um，需要連續(xù)切片，病理切片工作量極大，報告等待時間長，影響到術(shù)后及時輔助化療。分子生物學(xué)分析法（RT-PCR）敏感性最高，可以達到30%~40%，但假陽性率也較高，該方法檢測出的可能是癌變的基因，而非真正的轉(zhuǎn)移腫瘤細胞。為了尋找一種簡捷、快速、準確的評估淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的方法，2002年Kanoh[6]等報道3l例結(jié)直腸癌患者的300枚淋巴結(jié)，分別用放射免疫法和聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)方法測定淋巴結(jié)浸出液癌胚抗原(CEA)濃度，結(jié)果發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)浸出液CEA濃度明顯高于無轉(zhuǎn)移的淋巴結(jié)，國內(nèi)也有類似應(yīng)用電光化學(xué)法檢測淋巴結(jié)浸出液中CEA含量判斷淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況的相關(guān)報道，對于淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，尤其是淋巴結(jié)微轉(zhuǎn)移方面以及術(shù)后早期及時應(yīng)用化療藥物有一定的指導(dǎo)作用[7]。

我們借鑒國內(nèi)外檢測結(jié)直腸癌淋巴結(jié)浸出液中CEA含量的方法，應(yīng)用電光化學(xué)法檢測胃癌D2根治術(shù)后清掃的1923枚淋巴結(jié)浸出液中CEA的含量，以CEA濃度50ng/mg為閾值，淋巴結(jié)浸出液CEA濃度大于等于50ng/mg提示為轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)，淋巴結(jié)浸出液中CEA濃度小于50ng/mg提示為無轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)，將同一枚淋巴結(jié)進行常規(guī)HE染色檢查，如果HE染色為陰性，則進行CEA免疫組化檢測，將三種方法進行統(tǒng)計學(xué)對比分析，電光化學(xué)法檢測淋巴結(jié)浸出液中CEA含量法陽性預(yù)測值為94.23%，陰性預(yù)測值為94.4%，敏感度可達到92.27%，特異度達到95.84%，假陽性率和假陰性率分別為4.15%和7.73%。同常規(guī)HE染色法及免疫組化法進行統(tǒng)計學(xué)分析顯示，其特異性高于常規(guī)HE染色法，有統(tǒng)計學(xué)意義，同免疫組化法對比無明顯差別，無統(tǒng)計學(xué)意義。

本實驗在不破壞淋巴結(jié)的情況下，通過檢測淋巴結(jié)浸出液中CEA的含量來判斷淋巴結(jié)是否存在轉(zhuǎn)移，方法簡單易行，耗材低，簡捷、快速而且準確。我們通過測定術(shù)前血清CEA含量及術(shù)后血清CEA含量，通過血清中CEA含量的降低值同三種檢測方法提示清掃的陽性淋巴結(jié)數(shù)之間進行相關(guān)分析及t檢驗，發(fā)現(xiàn)血清CEA含量與3種檢測方法提示轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)數(shù)均呈正相關(guān)，同常規(guī)HE染色向?qū)Ρ?，P<0.05，同電光化學(xué)法以及免疫組化法對比，P<0.01，電光化學(xué)法及免疫組化法更具有相關(guān)性，進一步說明電光化學(xué)法在檢測淋巴結(jié)微轉(zhuǎn)移方面比HE染色法更具敏感性，同免疫組化法相比無統(tǒng)計學(xué)差異，但是由于目前相關(guān)類似研究較少，尚不能代替免疫組化法及其它檢測方法。

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