實(shí)驗(yàn)性腦出血后血NSE\\S-100B和MBP濃度動態(tài)變化的研究

摘要：目的 探究急性腦出血后血清神經(jīng)稀醇化酶（NSE）、S-100B蛋白和髓鞘堿性蛋白(MBP)含量的變化和臨床意義。方法 選取16只小體型豬，隨機(jī)分成實(shí)驗(yàn)組（即腦出血模型組）10只以及對照組（即假手術(shù)組）6只。使用ELISA法測定血清術(shù)后6h、1d、2d、3d、5d、7d NSE、S-100B、MBP濃度。結(jié)果 血清S-100B濃度在6h就開始升高，而NSE、MBP濃度在1d時(shí)開始升高，三者均在3d達(dá)高峰、之后開始下降，實(shí)驗(yàn)組1~7d血清NSE、S-100B、MBP濃度和對照組比較具有顯著差異(P<0.01)。結(jié)論 血清NSE、S-100B、MBP濃度聯(lián)合檢測能更全面的反映出腦組織的受損情況，為判斷病情和預(yù)后提供了依據(jù)，為全腦保護(hù)治療和血腫清除術(shù)（包括微創(chuàng)血腫清除術(shù)）提供了理論支持。

關(guān)鍵詞：血清髓鞘堿性蛋白；神經(jīng)元特異性稀醇化酶；S-100B蛋白1資料與方法

1.1實(shí)驗(yàn)動物及其分組本試驗(yàn)選取臨床健康的小體型豬16只，由華中農(nóng)業(yè)大學(xué)實(shí)驗(yàn)動物中心所提供，雌雄不限，體重（7．3±1．5）kg，在相同的飼養(yǎng)條件下開始試驗(yàn)研究。采取隨機(jī)方法分成實(shí)驗(yàn)組(10只)及對照組(6只)。

1.2主要的儀器設(shè)備和試劑離心機(jī)、酶標(biāo)儀（華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院免疫教研室提供），MATRX MODEL 3000型密閉式吸入麻醉機(jī)，美國Hallowell儀器有限公司生產(chǎn)；異氟烷及氯胺酮，麻醉誘導(dǎo)以及維持用藥，分別是英國雅培制藥與福建古田藥業(yè)有限公司生產(chǎn)；手術(shù)器械；NSE試劑盒、MBP試劑盒、S-100B試劑盒均由美國ADL公司所提供。

1.3實(shí)驗(yàn)方法與步驟

1.3.1模型制作本實(shí)驗(yàn)組參照由孟祥武、陳興泳等報(bào)道的豬基底節(jié)腦出血模型的制作方法[1]，使用氯胺酮復(fù)合異氟烷面罩吸入麻醉，等到氣囊擴(kuò)張后，自體血2次注入法建立起豬腦基底節(jié)出血模型。對照組：完成解剖定位、尾動脈抽血以及小兒導(dǎo)尿管插入基底，但不進(jìn)行氣囊擴(kuò)張與注血。

1.3.2采集標(biāo)本實(shí)驗(yàn)組和對照組都在6h、1d、2d、3d、5d、7d各采集尾動脈血1.5ml，使用離心機(jī)進(jìn)行離心處理，10min后取出血清裝在EP管內(nèi)，封口。盡快保存于－70℃冰箱內(nèi)。

1.3.3 P濃度測定1個(gè)月內(nèi)嚴(yán)格按照說明書ELISA法測定出血清MBP、NSE、S－100B濃度。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)數(shù)學(xué)處理，組間及組內(nèi)比較采用重復(fù)測量數(shù)據(jù)方差分析。

2結(jié)果

血清NSE、S-100B、MBP濃度變化。

2.1實(shí)驗(yàn)組腦出血后1~7d血清NSE、S-100B、MBP濃度和對照組同時(shí)間點(diǎn)比較均有顯著性差異(P<0．01)，均在第3d達(dá)到高峰，實(shí)驗(yàn)組內(nèi)第3d與第1d的濃度比較有顯著性差異(P<0．01)，其后濃度下降。

2.2實(shí)驗(yàn)組腦出血后血清S-100B蛋白濃度在發(fā)病6h內(nèi)開始明顯升高，血清NSE、MBP蛋白在發(fā)病24h開始明顯升高，血清S-100B的濃度先與NSE、MBP濃度升高。見表1、表2、表3。動態(tài)變化曲線見圖1、圖2、圖3。

3討論

NSE、S-100B和MBP被認(rèn)為對中樞神經(jīng)系統(tǒng)損傷具有高度的特異性，目前在腦外傷及缺血性腦中風(fēng)的研究中應(yīng)用得比較多，對預(yù)后評估具有十分重大的意義，從而受到高度重視[2]。腦內(nèi)生理S-100B主要是由活化的星形膠質(zhì)細(xì)胞所產(chǎn)生;NSE特異地存在于腦神經(jīng)細(xì)胞和神經(jīng)內(nèi)分泌細(xì)胞;MBP在CNS是由少突膠質(zhì)細(xì)胞（OLs）合成，是腦白質(zhì)的重要組成部分，它是功能上很重要的髓鞘結(jié)構(gòu)蛋白。

在中樞神經(jīng)系統(tǒng)中，星形膠質(zhì)細(xì)胞的數(shù)量遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過了神經(jīng)元，星形膠質(zhì)細(xì)胞不僅為神經(jīng)元提供代謝和營養(yǎng)支持，而且在調(diào)節(jié)突觸功能、保護(hù)神經(jīng)元存活、神經(jīng)修復(fù)以及神經(jīng)再生中起著十分重要的作用。其終足包繞著毛細(xì)血管，所以，腦損傷后后星形膠質(zhì)細(xì)胞最先開始遭受到打擊[3]。在缺血性損傷下，星形膠質(zhì)細(xì)胞通常情況下會出現(xiàn)細(xì)胞腫脹，過度肥大增生以及增殖反應(yīng)，并還會出現(xiàn)反應(yīng)性星形膠質(zhì)細(xì)胞化[4]。在反應(yīng)性星形膠質(zhì)細(xì)胞化之后，出現(xiàn)明顯的星形膠質(zhì)細(xì)胞死亡，且垂死的星形膠質(zhì)細(xì)胞還可能會進(jìn)一步殺死相鄰的細(xì)胞[5]。雖然在大量離體實(shí)驗(yàn)中，星形膠質(zhì)細(xì)胞較神經(jīng)元更能承受缺血打擊，但是在體情況下發(fā)生腦缺血后星形膠質(zhì)細(xì)胞可能會比神經(jīng)元更容易受損，因此S-100B的濃度更早于NSE、MBP的濃度升高。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果與上述結(jié)論一致。少突膠質(zhì)細(xì)胞(OLs)形成的髓鞘是腦白質(zhì)的重要組成部分。腦出血后血清MBP濃度明顯升高，說明腦白質(zhì)明顯受損，因此臨床上我們要重視全腦保護(hù)治療，既要重視神經(jīng)元的保護(hù)治療，又要重視膠質(zhì)細(xì)胞的保護(hù)治療。

本文資料顯示，腦出血早期時(shí)血清S-100B（6h）、MBP與NSE（1d）已開始明顯升高，3d時(shí)就達(dá)到高峰，5d后又開始回落，但仍比對照組高。說明早期腦出血時(shí)本身已對腦組織造成了損傷，神經(jīng)元、神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞以及神經(jīng)髓鞘均遭到破壞。以后血清S-100B、NSE和MBP在幾天內(nèi)仍維持在一個(gè)較高水平，由于腦組織缺氧、缺血、水腫及壞死等繼發(fā)性損傷導(dǎo)致，尤其是第3d的血清S-100B、NSE和MBP濃度比第1d明顯升高，說明這時(shí)腦組織受到原發(fā)性及繼發(fā)性損害。3d后血清S-100B、NSE和MBP濃度漸漸下降，可能由于受損神經(jīng)細(xì)胞與血腦屏障功能逐漸恢復(fù)和腦水腫逐漸消退。所以若腦出血后第1d血清NSE、S-100B水平升高就反映出神經(jīng)組織的原發(fā)性損傷。若發(fā)病第3d血清NSE、S-100B、MBP濃度達(dá)峰值，后期維持在較高水平，這就反映了繼發(fā)性神經(jīng)組織損傷。Marchi也贊同這個(gè)觀點(diǎn)。如對有手術(shù)指征的患者盡早進(jìn)行手術(shù)清除血腫的壓迫，則可將神經(jīng)組織的繼發(fā)性損傷減少。這對于腦出血后有手術(shù)指征應(yīng)盡早地行血腫清除術(shù)（包括微創(chuàng)血腫清除術(shù)）提供了有力的理論支持。

因此，S-100B，NSE及MBP均是腦出血后腦組織損傷后比較合適的一個(gè)生化標(biāo)記物，可全面反映神經(jīng)元、膠質(zhì)細(xì)胞、神經(jīng)髓鞘膜的損害程度。對于判斷預(yù)后有著積極地指導(dǎo)意義，并為早期微創(chuàng)治療提供了理論支持。

參考文獻(xiàn)：

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編輯/哈濤