沙棘總黃酮對(duì)血管性癡呆模型大鼠血清TNF-α\\IL-1β含量的影響

摘要：目的觀察沙棘總黃酮對(duì)血管性癡呆模型大鼠血清TNF-α、IL-1β含量的影響，并探討其對(duì)血管性癡呆的干預(yù)機(jī)理。方法 采用改進(jìn)的\"血管阻斷模型（2-VO）\"進(jìn)行造模，設(shè)假手術(shù)組、模型組、對(duì)照組(銀杏葉提取物)、實(shí)驗(yàn)組（沙棘總黃酮高、中、低劑量組），分別測(cè)定干預(yù)后各組大鼠血清TNF-α、IL-1β含量。結(jié)果與假手術(shù)組比較，VD模型大鼠學(xué)習(xí)記憶能力明顯障礙，血清TNF-α、IL-1β含量增加（P＜0.05）；經(jīng)實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組干預(yù)治療后，VD模型大鼠學(xué)習(xí)記憶能力得到改善，血清TNF-α、IL-1β含量下降（P＜0.05）。結(jié)論沙棘總黃酮能減少VD模型大鼠血清TNF-α、IL-1β含量，這可能是其干預(yù)血管性癡呆的主要作用機(jī)制之一。

關(guān)鍵詞：沙棘總黃酮；血管性癡呆；TNF-α；IL-1β血管性癡呆( vascular dementia，VD)的確切發(fā)病機(jī)制至今仍未闡明。炎癥機(jī)制作為發(fā)病機(jī)制之一其地位越來(lái)越受到重視[1]。 本實(shí)驗(yàn)采用\"血管阻斷模型（2-VO）法\"復(fù)制VD大鼠模型，觀察大鼠血清TNF-α、IL-1β含量變化，探討炎癥因子與VD 發(fā)病的相關(guān)性，并采用沙棘總黃酮(Total flavonoids of Hippophae TFH)干預(yù)治療，觀察TFH對(duì)VD大鼠TNF-α、IL-1β含量及認(rèn)知功能的影響。

1資料與方法

1.1一般資料

1.1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物Wistar大鼠，72只，普通級(jí)、（350±20）g、雌雄各半，由蘭州大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。

1.1.2藥品和儀器沙棘總黃酮（青?？灯丈锟萍脊煞萦邢薰?，批號(hào)：20090220）；銀杏葉提取物(Extract of Ginkgo Biloba Leaves，EGb德國(guó)威瑪舒培博士藥廠，證號(hào)H20090296)；大鼠IL-1β ELISA Kit(產(chǎn)品編號(hào):EKO393規(guī)格96T，武漢博士得生物工程有限公司)；大鼠TNF-α ELISAKit (ELISA試劑盒，Invitrogen，USA)；Morris水迷宮(中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院藥物研究所)。

1.2方法

1.2.1造模根據(jù)預(yù)實(shí)驗(yàn)中的數(shù)據(jù)和大鼠死亡率，采用改進(jìn)的\"血管阻斷模型（2-VO）\"進(jìn)行造模[2]。假手術(shù)組切開(kāi)分離雙側(cè)頸總動(dòng)脈而不結(jié)扎。造模過(guò)程中死亡的大鼠均剔除。

1.2.2動(dòng)物分組每組動(dòng)物數(shù)為12只，按照隨機(jī)數(shù)字表隨機(jī)分為假手術(shù)組、模型組、對(duì)照組（EGb）、實(shí)驗(yàn)組（TFH高、中、低劑量組），并與于術(shù)后1d開(kāi)始灌胃給藥，1次/d，連續(xù)30d。TFH高、中、低劑量組分別給予200、100、50mg/(kg·d) 灌胃；對(duì)照組給予EGb 48mg/(kg·d)灌胃；模型組和假手術(shù)組給予等量的生理鹽水灌胃。

1.2.3大鼠行為學(xué)測(cè)試Morris水迷宮定位航行實(shí)驗(yàn)(place navigation)和空間探索實(shí)驗(yàn)(space navigation)。

1.2.4檢測(cè)血清TNF-α、IL-1βMorris水迷宮結(jié)束后實(shí)驗(yàn)大鼠腹主動(dòng)脈取血，停置30 min 離心，取上清放置- 20 ℃冰箱內(nèi)凍存待測(cè)。嚴(yán)格按試劑盒說(shuō)明用ELISA法分別測(cè)得TNF-α和IL-1β。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理方法采用SPSS13.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，結(jié)果以x±s表達(dá)，顯著性檢驗(yàn)采用單因素方差分析，檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05。

2結(jié)果

2.1 TFH對(duì)VD模型大鼠Morris水迷宮學(xué)習(xí)記憶的影響模型組逃避潛伏期明顯延長(zhǎng)（P＜0.05），穿越平臺(tái)次數(shù)減少（P＜0.05），經(jīng)EGb和TFH干預(yù)后，大鼠學(xué)習(xí)記憶能力得到改善。

2.2 TFH對(duì)VD模型大鼠血清中炎癥因子TNF-α、IL-1β的影響（見(jiàn)表1）模型組大鼠血清TNF-α、IL-1β含量明顯高于假手術(shù)組（P＜0.05），經(jīng)EGb和TFH干預(yù)后，TNF-α、IL-1β含量降低（P＜0.05）。

3討論

慢性腦缺血缺氧誘發(fā)行為學(xué)障礙是目前研究VD常用且經(jīng)典的動(dòng)物模型。Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)中，模型組大鼠潛伏期明顯延長(zhǎng)，穿越平臺(tái)次數(shù)減少，表明實(shí)驗(yàn)造模成功。經(jīng)EGb和TFH干預(yù)，均能明顯縮短潛伏期。在空間探索實(shí)驗(yàn)中，對(duì)照組和TFH中、高劑量組能改善模型大鼠的空間記憶力，三組間比較無(wú)明顯差別，但三組的穿臺(tái)次數(shù)記憶成績(jī)?nèi)缘陀诩偈中g(shù)組。TFH低劑量對(duì)模型大鼠的空間記憶力改善作用不明顯（P＞0.05）。各組血清TNF-α、IL-1β表達(dá)水平與相應(yīng)大鼠學(xué)習(xí)記憶能力相比， TNF-α、IL-1β水平越高，其對(duì)應(yīng)的大鼠學(xué)習(xí)記憶能力越差。這說(shuō)明TNF-α、IL-1β和VD密切相關(guān)。

TNF-α是一種前炎因子，是炎癥級(jí)聯(lián)的啟動(dòng)者，可引發(fā)繼發(fā)性損傷，且具有神經(jīng)毒樣作用[3]，其來(lái)源是多途徑的[4]。IL-1β作為炎癥調(diào)節(jié)因子可誘發(fā)白細(xì)胞在微血管中黏附、聚集。TNF-α、IL-1β不僅能誘發(fā)炎癥反應(yīng)，還能刺激其他細(xì)胞因子的釋放，造成神經(jīng)元等組織器官的損傷[5]，使機(jī)體的學(xué)習(xí)、記憶功能減退，從而導(dǎo)致VD。這也是模型大鼠出現(xiàn)行為學(xué)改變的重要原因。缺血缺氧還可導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)鈣超載[6]，直接損傷神經(jīng)細(xì)胞并最終啟動(dòng)細(xì)胞凋亡。TFH具有抑制缺氧損傷、抑制鈣超載作用[7]。本實(shí)驗(yàn)表明TFH能夠有效抑制VD模型大鼠血清炎癥因子TNF-α、IL-1β的表達(dá)（P＜0.05），使大鼠學(xué)習(xí)記憶能力好轉(zhuǎn)（P＜0.05）。提示TFH有抵抗體內(nèi)炎癥反應(yīng)的作用，TFH對(duì)VD的防治是以上機(jī)制中多靶點(diǎn)作用的結(jié)果。

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