克勞斯法測定纖維蛋白原的影響因素分析

摘要：目的 明確克勞斯法測定纖維蛋白原的影響因素有哪些。方法 分為觀察組和對照組，對90例（其中30例正常人血漿、24例正常參比血漿、36例異質(zhì)血漿）不同類型的血漿進行克勞斯法測定纖維蛋白原的實驗分析。結(jié)果 觀察組測定纖維蛋白原結(jié)果可靠，對照組數(shù)據(jù)無統(tǒng)計學(xué)意義。結(jié)論 影響克勞斯法測定纖維蛋白原的因素有試劑因素、標(biāo)本因素以及實驗操作因素。

關(guān)鍵詞：克勞斯法；纖維蛋白原；影響因素

克勞斯法測定纖維蛋白原法屬于功能型方法，具體是指將足量的凝血酶加到稀釋的血漿中去，根據(jù)其與纖維蛋白原的時間相關(guān)度得出相應(yīng)的纖維蛋白原的含量與功能的結(jié)論，是目前世界各國醫(yī)學(xué)界測定纖維蛋白原的主要方法之一[1]?？藙谒狗y定纖維蛋白原結(jié)果的影響因素有很多，本文具體明確克勞斯法測定纖維蛋白原的影響因素為試劑、標(biāo)本以及操作過程，同時給出關(guān)于與克勞斯法測定纖維蛋白原影響因素相關(guān)注意事項和有效結(jié)論。

1 資料與方法

1.1血漿 分別選取正常人血漿、異常血漿以及正常參比血漿。其中正常血漿取自獻血員和健康體檢人員，異常血漿取自取自臨床心血管疾病、血栓病、糖尿病、惡性腫瘤和術(shù)后抗凝治療的患者，正常參比血漿取自取多個獻血員抗凝血，按上述方法制備乏血小板血漿。見表1。

1.2方法 運用克勞斯法測定纖維蛋白原，文中所涉及的合格試劑貯存工具為Fibri-prest試劑盒，購自Diagnostica Stago公司 。數(shù)據(jù)分的統(tǒng)計學(xué)方法采用Excel 97統(tǒng)計學(xué)軟件。

1.2.1對克勞斯法測定纖維蛋白原的試劑影響因素分析 將正常人血漿分為觀察組15例和對照組15例進行不同試劑影響因素的分析，其中觀察組嚴(yán)格遵守檢測儀器的相關(guān)要求，嚴(yán)格選定試劑產(chǎn)品，杜絕試劑使用中出現(xiàn)的錯誤；對照組相對實驗程序不嚴(yán)謹(jǐn)。

1.2.2克勞斯法測定纖維蛋白原的標(biāo)本因素 將正常參比血漿分為觀察組12例和對照組12例進行標(biāo)本收集的不同實驗，在收集、運送和貯藏方面進行分析。見表2。

1.2.3克勞斯法測定纖維蛋白原的實驗操作因素 將異質(zhì)血漿分為觀察組18例和對照組18例，其中觀察組要求血漿預(yù)熱時間≤10min，試劑預(yù)熱時間≤30min，對照組血漿預(yù)熱時間為15min試劑預(yù)熱時間為35min。

2 結(jié)果

結(jié)果顯示，無論是在進行試劑影響因素實驗、標(biāo)本影響因素實驗還是實驗操作影響因素實驗，對照組的實驗數(shù)據(jù)對于克勞斯法測定纖維蛋白原均沒有統(tǒng)計學(xué)意義，觀察組中共計45例血漿的測量結(jié)果都在（2.95±0.41）（這個范圍是克勞斯法測定纖維蛋白原的標(biāo)準(zhǔn)數(shù)據(jù)值）范圍內(nèi)。

3 討論

3.1克勞斯法測定纖維蛋白原的試劑因素 運用克勞斯法測定纖維蛋白原要求一方面注重試劑盒的質(zhì)量，另一方面在使用過程中嚴(yán)謹(jǐn)細致。試劑質(zhì)量的好壞是檢測結(jié)果是否準(zhǔn)確的最重要影響條件之一，這就要求實驗者具備專業(yè)的鑒別試劑盒以及試劑的能力。具體可從3個方面明確試劑以及試劑盒鑒別中易出現(xiàn)的問題：①盡管檢測儀器有所不同，測定者還是進行相同的相應(yīng)試劑選擇；②纖維蛋白原的標(biāo)準(zhǔn)品定值不準(zhǔn)確；③試劑產(chǎn)品的選擇不慎重。在克勞斯法測定纖維蛋白原的過程中，試劑使用的細節(jié)決定整個測定結(jié)果的準(zhǔn)確程度，這里具體明確一下在纖維蛋白原的測定過程試劑使用中最容易出現(xiàn)的9點錯誤：①進行試劑溶解時沒有嚴(yán)格按照試劑盒上的說明要求；②在進行試劑復(fù)溶時溶液量的劑量把握不得當(dāng)；③正常情況下進行纖維蛋白原檢測時，要求要在使用前10min就對試劑進行溶解，很多實驗人員未遵循此要求；④沒有對溶解好的試劑進行分開裝放，造成試劑的多次使用，污染嚴(yán)重；⑤纖維蛋白原的復(fù)溶試劑儲存條件不合理，導(dǎo)致試劑失效；⑥試劑緩沖液的PH值不合理；⑦使用上次實驗中沒有用完的試劑；⑧混用不同成分的同種命名試劑；⑨使用過期的試劑。

因此測定者在進行試劑盒方面的鑒定和選擇時，一方面要根據(jù)檢測儀器的不同，進行不同的相應(yīng)試劑選擇，同時還要保證纖維蛋白原的標(biāo)準(zhǔn)品定值的準(zhǔn)確性；另一方面在進行試劑盒選擇的過程中要盡量選擇知名度高的試劑盒，要求試劑產(chǎn)品有國家的正式批號，并且經(jīng)過質(zhì)量檢測認證。并注意試劑的生產(chǎn)日期、應(yīng)用范圍等多個因素。

3.2克勞斯法測定纖維蛋白原的標(biāo)本因素 克勞斯法測定纖維蛋白的過程中無論是標(biāo)本的收集、運送還是貯存，都要嚴(yán)格遵循相關(guān)的要求，做到每一步都科學(xué)有序，嚴(yán)謹(jǐn)沒有漏洞[2]。具體說來，克勞斯法測定纖維蛋白原的標(biāo)本收集要做到以下幾點：①采血的器具要符合規(guī)定，不能應(yīng)用玻璃注射器或者是玻璃試管，同時要求采血的器具不能夠含有去污劑、清洗劑等，嚴(yán)禁采血器具受到污染；②采血部位不能夠扎束的過緊或者是時間過長，另外在進行進針和抽血的過程中要保證速度勻速；③在進行抽血時，要求患者的情緒穩(wěn)定、平靜；④在測定過程中要采用規(guī)定的抗凝劑，同時抗凝劑的加量要適當(dāng)有度，建議應(yīng)用枸櫞酸鈉抗凝劑；⑤血液與抗凝劑要遵循一定的比例，最佳比例為血液與抗凝劑的比例為1：9；⑥要求取血量準(zhǔn)確，取血量注入抗凝管的劑量合理。

在克勞斯法測定纖維蛋白原的標(biāo)本運送方面要做到以下幾點：①要求血液與抗凝劑充分混合，只有這樣才能夠避免溶血、黃疸的現(xiàn)象發(fā)生，影響試驗的準(zhǔn)確性；②要求在去血厚要盡快分離標(biāo)本，并及時制成乏血血小板漿，同時還要及時將吸出的血漿放入相應(yīng)器皿中，保證PH值的不發(fā)生變化；③從抽血到檢測的整個時間間斷不能超過2h，并且在標(biāo)本的運送過程中不能夠有劇烈的震動或者是日光的直射。克勞斯法測定纖維蛋白原的貯藏方面也有一定的要求，其中最重要的2點：①要求將血漿標(biāo)本冷凍保存，冷凍的時間要快，同時要注意融化的溫度控制在35°左右，一經(jīng)融化要立刻取出，嚴(yán)禁反復(fù)凍融；②纖維蛋白原具有異質(zhì)性，同時纖維蛋白原中存在FDPs等抗凝物，這些抗凝物在標(biāo)本貯存的過程中會影響貯藏結(jié)果。

因此建議測定者能夠在測定的過程中嚴(yán)格遵循標(biāo)本的收集步驟，在運送與貯存的過程中嚴(yán)謹(jǐn)細致，最終達到保證測定結(jié)果真實有效的目的[3]。

3.3克勞斯法測定纖維蛋白原的實驗操作因素 溫度、時間、試劑量，還是規(guī)范與否，都是實驗操作的重要影響因素，本部分系統(tǒng)介紹實驗操作中的具體注意事項?？藙谒狗y定纖維蛋白原的整個實驗操作流程，要從以下幾點進行完善和改進：①首先要嚴(yán)格遵循實驗中所應(yīng)用的試劑盒和儀器的說明說進行相應(yīng)的操作，嚴(yán)格規(guī)范實驗者的每一個細節(jié)動作和環(huán)節(jié)，保證實驗成功的大前提；②實驗中標(biāo)本與試劑的溫度方面有著嚴(yán)格的要求，具體按照相應(yīng)實驗的要求來確定，但切記不能過高或者是過低；③血漿與試劑的預(yù)熱時間方面，要求血漿預(yù)熱時間≤10min，試劑預(yù)熱時間≤30min；④加熱試劑的同時要進行計時，要保證計時的科學(xué)和準(zhǔn)確；⑤實驗對試劑順序有著嚴(yán)格的要求，要求實驗試劑加入順序有序；⑥實驗對血漿稀釋同樣有著相應(yīng)的要求，要求血漿稀釋適度合理；⑦纖維蛋白原的含量高低，決定了整個實驗過程中血漿的凝固時間，通常在手工法的測定過程中，測定終點的明確由于血漿凝固時間的不確定而難以確定，這就要求測定者把握好實驗的測定終點；⑧要根據(jù)儀器的靈敏度和相關(guān)的操作要求，進行標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制的多點選擇；⑨要定時檢查實驗條件，當(dāng)實驗條件有一定的變動或者是改變時，要進行標(biāo)準(zhǔn)曲線的及時更改，重新繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。實驗操作環(huán)節(jié)是整個測定過程中的最核心部分，因此測定者在整個實驗操作的環(huán)節(jié)必須做到細致并且有序，保證準(zhǔn)確無誤。

在整個測定的過程中，如果說試劑因素是測定過程的前提保障，那么標(biāo)本的收集、運送和貯藏則是整個測定過程中的關(guān)鍵環(huán)節(jié)，而實驗操作過程無疑就是在前兩者基礎(chǔ)上整個測定過程的核心部分。需要我們掌握住克勞斯測定法中的每一個影響因素，注重細節(jié)，合理測定，掌控住整個測定流程。

綜上所述，克勞斯法測定纖維蛋白原是一個較為有效和前景看好的功能法。希望通過本文能夠使更多的相關(guān)方面工作者了解到克勞斯測定纖維蛋白原法，以及其在整個測定過程中的相關(guān)影響因素，并具體掌握在進行纖維蛋白測定過程中應(yīng)注意的一些細小環(huán)節(jié)和注意事項，最終起到良好的指引效果，達到科學(xué)合理測定纖維蛋白原的目的。

參考文獻：

[1]張文.克勞斯法測定纖維蛋白原的常見誤差分析[J].中國誤診學(xué)雜志，2004，3：458-459.

[2]劉蕊.用國產(chǎn)凝血酶測定纖維蛋白原方法與評價[J].2000，18（1）：28-29.

[3]王希平.兩種纖維蛋白原的測定方法比較[J].實用醫(yī)技雜，2003，7（7）：750-751.

編輯/哈濤