摘要:目的 通過(guò)分析比較兩種檢測(cè)方法(ELISA法定性與電化學(xué)發(fā)光法定量)檢測(cè)乙肝表面抗體(抗-HBs)的結(jié)果差異,探討測(cè)定乙肝表面抗體(抗-HBs)的濃度值與定性檢測(cè)結(jié)果s/co值之間的關(guān)系及對(duì)臨床工作的指導(dǎo)意義。方法 用ELISA法定性與電化學(xué)發(fā)光法定量分別對(duì)96份標(biāo)本進(jìn)行檢測(cè)分析。結(jié)果 電化學(xué)發(fā)光法結(jié)果在<10mIU/ ml和大于100mIU/ml的標(biāo)本ELISA基本能準(zhǔn)確判定為陰性或陽(yáng)性,但在10~100mIU/ml之間的標(biāo)本,36例僅有26例顯示陽(yáng)性,有10例則顯陰性,陽(yáng)性符合率僅達(dá)72.2%,96例標(biāo)本中用電化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)陽(yáng)性率為68.8%,而用ELISA法檢測(cè)僅為59.3%,陽(yáng)性率差異顯著。結(jié)論 電化學(xué)發(fā)光法作為一種高靈敏、高特異、高準(zhǔn)確的檢測(cè)方法在測(cè)定乙肝表面抗體值得大力推廣應(yīng)用,在指導(dǎo)乙肝疫苗接種工作方面具有重要意義。
關(guān)鍵詞:乙肝表面抗體(HBsAb);酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA);電化學(xué)發(fā)光法
乙肝表面抗體(HBsAb)是對(duì)乙肝病毒免疫的保護(hù)性抗體。它的陽(yáng)性表明既往感染過(guò)乙肝病毒,但已經(jīng)排除病毒,或者接種過(guò)乙肝疫苗,產(chǎn)生了保護(hù)性抗體。血清中乙肝表面抗體滴度越高,保護(hù)力越強(qiáng)。我國(guó)人口多乙型肝炎病毒感染數(shù)量多,人群發(fā)病率較高,據(jù)統(tǒng)計(jì)乙型肝炎病毒的攜帶率可達(dá)15%左右[1]。而乙肝疫苗的主動(dòng)免疫是預(yù)防乙肝的最有效途徑。只有HBsAg在血中保持一定的含量,機(jī)體才能有能力抵抗乙肝病毒的入侵。酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)因其簡(jiǎn)便、 快速、費(fèi)用較低成為目前檢測(cè)HBV標(biāo)志物最常用的方法,但其具有無(wú)法定量的缺點(diǎn)[2]。近年來(lái),由于檢驗(yàn)技術(shù)的不斷發(fā)展,電化學(xué)發(fā)光法成為定量檢測(cè)乙肝抗體的方法之一,但其具有檢測(cè)時(shí)間較長(zhǎng)、費(fèi)用較高的缺點(diǎn)。本文分別采用定性和定量?jī)煞N方法對(duì)乙肝表面抗體進(jìn)行檢測(cè),并分析其相關(guān)性。
1資料與方法
1.1一般資料 96名,均為2013年8月~10月在我院進(jìn)行體檢的健康人群,所有人均空腹抽取靜脈血并及時(shí)分離血清,分別用ELISA法定性和電化學(xué)發(fā)光法定量檢測(cè)乙肝表面抗體。
1.2儀器 ELISA法儀器為KC-100酶標(biāo)儀(深圳凱特生物醫(yī)療電子科技有限公司);電化學(xué)發(fā)光儀器為羅氏E601電化學(xué)發(fā)光分析儀。
1.3試劑 ELISA法試劑為上海科華生物工程有限公司生產(chǎn)。電化學(xué)發(fā)光法試劑為羅氏公司生產(chǎn)。
1.4方法及操作 ELISA法:每孔加入待測(cè)樣本50?滋L,設(shè)陰陽(yáng)對(duì)照各2孔,每孔加入陰性對(duì)照(或陽(yáng)性對(duì)照)各50?滋L(或1滴),并設(shè)空白對(duì)照1孔。每孔加入酶結(jié)合物50?滋L,充分混勻,封板,置37℃孵育30min。手工洗板:棄去孔內(nèi)液體,用洗滌液注滿各孔,靜置5s,甩干,重復(fù)5次后拍干。每孔加顯色劑A液、顯色劑B液各50?滋L,充分混勻,封板,置37℃孵育15min。每孔加入終止液50?滋L,混勻。用酶標(biāo)儀讀數(shù),取波長(zhǎng)450nm,讀取各孔OD值。
電化學(xué)發(fā)光法:采用磁性微顆粒兩步法電化學(xué)發(fā)光分析技術(shù)。
1.5結(jié)果判定 ELISA法: cut off value(cov)= 陰性對(duì)照平均OD值×2.1,樣品OD值小于cov值時(shí),說(shuō)明該抗體檢測(cè)結(jié)果為陰性; 樣品OD值大于等于cov值時(shí),說(shuō)明該抗體檢測(cè)結(jié)果為陽(yáng)性。電化學(xué)發(fā)光法定量檢測(cè)HBsAb滴度大于10mIU/ml為陽(yáng)性,檢測(cè)HBsAb滴度大于100mIU/ml為有效免疫。
1.6統(tǒng)計(jì)方法 SPSS17.0對(duì)2種方法檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行χ2檢驗(yàn)。
2結(jié)果
兩法陽(yáng)性率比較ELISA法以s/co≥1.0為陽(yáng)性, 化學(xué)發(fā)光法>10mIU/ml判為陽(yáng)性。 兩種方法對(duì)乙肝表面抗體的對(duì)比檢測(cè)結(jié)果分別見(jiàn)表1,表2。
由表1 、表2可以看出,HBsAb濃度值小于10mIU/ml和大于100mIU/ml時(shí),電化學(xué)發(fā)光法和ELISA法檢測(cè)結(jié)果相近,用ELISA法基本能準(zhǔn)確判定陽(yáng)性和陰性。但在10~100mIU/ml之間的標(biāo)本電化學(xué)發(fā)光法共檢測(cè)的36例陽(yáng)性樣本,ELISA法只有26例是陽(yáng)性。以10~50mIU/ml區(qū)段尤為顯著。整體來(lái)看電化學(xué)發(fā)光法檢出陽(yáng)性率為68.8%,ELISA法檢測(cè)陽(yáng)性率為59.3%。2種方法檢測(cè)差異顯著,有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
3 討論
在我國(guó)乙肝的感染率較高,由于HBsAb是一種保護(hù)性抗體,一旦人體受到隱性感染或經(jīng)急性感染乙肝病毒并清除后,會(huì)產(chǎn)生HBsAb。若人群接種乙肝疫苗后,機(jī)體也可產(chǎn)生HBsAb。人體內(nèi)的較高濃度的HBsAb可有效清除機(jī)體感染的乙肝病毒。同時(shí)乙型肝炎又與肝癌的發(fā)生有密切的關(guān)系,因此,為防止乙肝的蔓延,要想達(dá)到控制乙型肝炎的的目的,就應(yīng)該采用減少易感人群的方式。據(jù)相關(guān)資料報(bào)道,HBsAb含量在10mIU/ml以上的人群并不都具有較強(qiáng)的免疫力。HBsAb含量在10-100mIU/ml之間的人群對(duì)乙型肝炎的免疫力相對(duì)較弱,甚至不能預(yù)防乙肝病毒的感染。相關(guān)資料表明只有HBsAb的含量大于100mIU/ml時(shí),才具有抵抗乙肝病毒入侵的能力。但也有研究者認(rèn)為大于10mIU/ml可以用于個(gè)體免疫力強(qiáng)弱的評(píng)價(jià)[3]。
正是由于乙肝抗體定量檢測(cè)的重要性,現(xiàn)在,很多實(shí)驗(yàn)室都開(kāi)展了該項(xiàng)目的檢測(cè),它不僅能夠判斷是否需要接種乙肝疫苗還能對(duì)疫苗接種后的效果進(jìn)行評(píng)估。
目前,測(cè)定乙肝表面抗體的方法很多,以ELISA法和電化學(xué)發(fā)光或化學(xué)發(fā)光法較為常用[4]。大多數(shù)二級(jí)以下及基層醫(yī)院多使用ELISA法。其檢測(cè)方便、成本較低。ELISA法在檢測(cè)HBsAb過(guò)程中不僅酶標(biāo)板的孔間存在差異,而且在操作中需要進(jìn)行游離抗原或抗體的分離,需要反復(fù)洗板,導(dǎo)致方法的變異系數(shù)增大,增加了檢驗(yàn)的誤差。同時(shí)由于受方法學(xué)影響其檢測(cè)靈敏度相對(duì)較低;極易造成漏檢和假陰假陽(yáng)性。
電化學(xué)發(fā)光法標(biāo)記免疫技術(shù)與傳統(tǒng)的ELISA法相比,檢測(cè)原理存在差異,前者是液相磁珠包被,后者采用固相微板包被,提高了反應(yīng)的接觸面積,同時(shí)其檢測(cè)方法為定量檢測(cè),提高了靈敏度,避免了大量低值樣本的漏檢。同時(shí)其具有重復(fù)性好、靈敏度高、準(zhǔn)確性佳、特異性強(qiáng)、檢測(cè)快速、無(wú)放射性危害等優(yōu)點(diǎn)[5],因此廣泛應(yīng)用于臨床。雖然電化學(xué)發(fā)光法成本較高,但其針對(duì)一些可疑低值的樣本,電化學(xué)發(fā)光法大大提高了檢測(cè)的準(zhǔn)確性,彌補(bǔ)了ELISA方法檢測(cè)的不足。
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編輯/王海靜