不同抗凝劑及標(biāo)本放置時間對T淋巴細(xì)胞亞群檢測結(jié)果的影響

摘要：目的 探討不同抗凝劑及標(biāo)本放置對流式細(xì)胞術(shù)檢測T淋巴細(xì)胞亞群檢測結(jié)果的影響。方法 采集健康體檢者血液，分別用肝素鈉、EDTA-K2抗凝，室溫保存，在不同時間進(jìn)行T淋巴細(xì)胞亞群檢測。結(jié)果 EDTA-K2抗凝血與0h相比，CD3+、CD8+細(xì)胞百分率在24h開增高，CD3+到48h明顯增高（P<0.05），CD8+細(xì)胞到36h明顯增高（P<0.05），CD4+細(xì)胞到72h變化無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）；肝素鈉抗凝血CD3+、CD4+、CD8+細(xì)胞到72h與0h相比無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。結(jié)論 不同抗凝劑在室溫下不同保存時間對T淋巴細(xì)胞檢測有影響，EDTA-K2抗凝的標(biāo)本在室溫下應(yīng)在24h內(nèi)完成檢測；肝素鈉抗凝的標(biāo)本可在72h內(nèi)測定。

關(guān)鍵詞：流式細(xì)胞術(shù)；標(biāo)本放置時間；T淋巴細(xì)胞亞群

T淋巴細(xì)胞亞群是目前臨床用于評估患者細(xì)胞免疫功能常用的檢測指標(biāo)之一，其準(zhǔn)確性直接影響臨床診斷。因此標(biāo)本采集真空采血管所用抗凝劑及標(biāo)本送檢及保存時間等因素都會影響測定結(jié)果。針對這一問題，本研究對靜脈血采集后不同抗凝劑、標(biāo)本放置時間對T淋巴細(xì)胞亞群的影響進(jìn)行實(shí)驗(yàn)分析和評估，報道如下。

1資料與方法

1.1標(biāo)本來源 2013 年9月本院健康體檢者10例，其中男6例，女4例，平均年齡37歲。

1.2主要儀器和試劑 Beckman Coulter公司FC500型流式細(xì)胞儀，熒光標(biāo)準(zhǔn)微球Flow-Check、CD45-FITC /CD3- PE-Cy5/CD4-PE/CD8-ECD及同型對照均購自Immunotech公司。

1.3方法 空腹采集健康體檢者靜脈血于EDTA-K2及肝素鈉抗凝管各2.0mL，充分混勻，室溫（20℃）保存。分別于采血后0h、1h、2h、4h、8h、12h、16h、24h、36h、48h及72h按常規(guī)方法用CD45-FITC /CD3- PE-Cy5/CD4-PE/CD8-ECD標(biāo)記并設(shè)同型對照；用熒光標(biāo)準(zhǔn)微球Flow-Check校準(zhǔn)流式細(xì)胞儀的光路和流路，用同型對照設(shè)定陽性域值后檢測，每份樣本均檢測并分析10000個細(xì)胞，記錄各抗原表達(dá)的百分率。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 使用SPSS12.0統(tǒng)計(jì)軟件包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，各抗原表達(dá)的百分率以x±s表示，組間比較常用t檢驗(yàn)。

2結(jié)果

2.1 EDTA-K2抗凝不同時間CD3+、CD4+、CD8+表達(dá)見表1。CD3+、CD8+細(xì)胞抗原表達(dá)隨著標(biāo)本放置時間的延長而逐漸增高，CD8+細(xì)胞到36h、CD3+細(xì)胞到48h與0h相比明顯增高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；CD4+細(xì)胞放置到72h變化無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。

2.2 肝素鈉抗凝不同時間CD3+、CD4+、CD8+表達(dá)見表2。CD3+、CD4+、CD8+細(xì)胞抗原表達(dá)在標(biāo)本放置到72h與0h相比無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。

3討論

通過流式細(xì)胞術(shù)檢測T淋巴細(xì)胞亞群評估機(jī)體細(xì)胞免疫功能是目前普遍采用的方法。但由于受醫(yī)院設(shè)備條件和地理等因素的限制，采樣送檢與上機(jī)檢測間往往不能緊密銜接，樣品保存時間過長會影響結(jié)果。而細(xì)胞不同抗原的表達(dá)對不同抗凝劑抗凝全血及抗凝血放置時間的要求各不相同[1，2]。

本組測定結(jié)果顯示，EDTA-K2抗凝的血液標(biāo)本，CD3+，CD8+細(xì)胞抗原表達(dá)分別從24h和16h逐漸增高，CD3+在樣品保存至48h與0h相比明顯增高（P<0.05），CD8+細(xì)胞抗原表達(dá)在樣品保存至36h與0h相比有顯著差異（P<0.05）；CD4+細(xì)胞放置到72h抗原表達(dá)變化無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。這是否與隨著標(biāo)本放置時間過長使細(xì)胞膜通透性增加，胞漿內(nèi)抗原的暴露，還是其它原因引起有待于進(jìn)一步研究。肝素鈉抗凝的血液標(biāo)本CD3+、CD4+、CD8+細(xì)胞抗原表達(dá)在標(biāo)本放置到72h與0h相比無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

綜上所述，不同抗凝劑的抗凝血及在室溫下不同保存時間對T淋巴細(xì)胞檢測有影響。在用流式細(xì)胞儀檢測T淋巴細(xì)胞時，建議最好用肝素鈉作抗凝劑，而用EDTA-K2抗凝時，標(biāo)本應(yīng)該在24h內(nèi)完成檢測。

參考文獻(xiàn)：

[1]曹魯寧，張玲珍，仲人前，等.流式細(xì)胞儀檢測人白細(xì)胞抗原-B27的影響因素[J].檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)，2007，22（3）：233-234.

[2]張愛梅，翟志敏，徐修才，等.標(biāo)本放置時間及年齡對CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的影響[J].免疫學(xué)雜志，2007，22（1）：62-65.

編輯/孫杰