對(duì)兩種濃度腺嘌呤誘導(dǎo)腎陽虛不育大鼠的評(píng)估

摘要：目的 對(duì)兩種濃度（200 mg/Kg/d與300 mg/Kg/d）腺嘌呤誘導(dǎo)腎陽虛不育大鼠的評(píng)估。方法 將18只成年雄性SD大鼠隨機(jī)分成三組，正常對(duì)照組、模型A組（200 mg/Kg/d）和模型B組（300 mg/Kg/d），每組6只。對(duì)照組與模型組分別予以蒸餾水和腺嘌呤灌胃21 d。觀察大鼠體征、血清性激素、血清肌酐、血清尿素氮、睪丸與腎臟重量及精子密度的變化。結(jié)果 與正常對(duì)照組相比，2個(gè)模型組睪酮、雌二醇、體重、睪丸重量與精子密度明顯降低（P<0.05），卵泡刺激素與黃體生成素水平無明顯變化（P>0.05），血清肌酐、血清尿素氮與腎臟重量明顯升高（P<0.05）。模型B組精子密度低于模型A組（P<0.05），其余指標(biāo)在2個(gè)模型組間無明顯差異（P>0.05）。結(jié)論 兩種濃度腺嘌呤均可成功誘導(dǎo)腎陽虛不育模型，較高濃度腺嘌呤對(duì)抑制精子發(fā)生具有明顯作用。

關(guān)鍵詞：腺嘌呤；腎陽虛；不育；大鼠

中圖分類號(hào)：R285.5 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

祖國醫(yī)學(xué)對(duì)治療不育癥有其獨(dú)特優(yōu)勢(shì)，腺嘌呤誘導(dǎo)腎陽虛不育動(dòng)物模型是研究不育最常用的動(dòng)物模型。本研究探討兩種常用腺嘌呤濃度（200 mg/Kg/d與300 mg/Kg/d）對(duì)腎陽虛不育大鼠建模的評(píng)估。

1資料與方法

1.1一般資料

1.1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 SD雄性大鼠，體重280～300 g，18只，清潔級(jí)（由廣西中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供）。

1.1.2藥品及試劑 腺嘌呤（Sigma公司），睪酮（testoterone，T）、黃體生成素（luteotrophic hormone，LH）、卵泡刺激素（follicle-stimulating hormone，F(xiàn)SH）、雌二醇（estradiol，E2）放射免疫分析試劑盒（北京北方生物技術(shù)研究所）。

1.2方法

1.2.1分組及建模 大鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)1 w后，隨機(jī)分成三組：正常對(duì)照組、模型A組（200 mg/Kg/d）和模型B組（300 mg/Kg/d），每組6只。正常對(duì)照組按2 mL/d劑量予以蒸餾水灌胃，模型組每次給藥前稱體重，A、B組分別按200 mg/Kg/d與300 mg/Kg/d計(jì)量并用蒸餾水制成2 mL混懸液灌胃，灌胃21 d。停止灌胃后第2 d處死動(dòng)物，期間或建模后做下列檢測(cè)。

1.2.2指標(biāo)檢測(cè) ①每天測(cè)量體重（確定腺嘌呤用量）、飲食量及尿量，觀察動(dòng)物一般情況。②性激素及腎功能的檢測(cè)：戊巴比妥麻醉后，腹主動(dòng)脈取血7～8 mL，血標(biāo)本凝集后取血清2～3 mL，用放免法檢測(cè)T、LH、FSH與E2，生化檢測(cè)技術(shù)檢測(cè)血尿素氮（blood urea nitrogen，BUN）與血清肌酐（serum creatimine，SCr）含量。③睪丸與腎臟器官稱重。④精液的提取和分析：將附睪取出，在其頭和尾各沿縱向垂直剪2次，用營養(yǎng)液2 mL孵育10 min，進(jìn)行精子密度分析。

1.2.3統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 計(jì)量資料用（x±s）表示，數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)采用SPSS13.0 for Windows軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。

2結(jié)果

2.1一般狀態(tài)觀察 正常對(duì)照組大鼠發(fā)育正常，體重不斷增加，對(duì)外界刺激反應(yīng)靈敏、活動(dòng)正常，毛發(fā)潤澤光滑。2個(gè)模型組灌胃1 w后，大鼠都出現(xiàn)畏寒肢冷，蜷縮拱背；2 w起活動(dòng)減少，反應(yīng)遲鈍，飲食差，體毛枯疏，失去光澤，并開始出現(xiàn)脫毛，陰囊皺縮，睪丸回升，肛周污染。模型B組在灌胃第3 d出現(xiàn)多尿，模型A組在灌胃第9 d出現(xiàn)多尿。兩組模型組體重明顯減少，持續(xù)到死亡或結(jié)束實(shí)驗(yàn)。正常對(duì)照組無死亡，模型A組在第3 w內(nèi)死亡2例，模型B組在第1 w內(nèi)死亡1例、第2 w內(nèi)死亡1例、第3 w內(nèi)死亡2例，見表1，圖1。實(shí)驗(yàn)中死亡的動(dòng)物經(jīng)尸體解剖檢查，肺組織中未發(fā)現(xiàn)藥液及出血點(diǎn)，排除因灌胃操作失誤造成死亡。而每只死亡大鼠均出現(xiàn)大白腎，有的腎表面有出血點(diǎn)。

2.2血清檢測(cè)指標(biāo)變化比較 與正常對(duì)照組比較，兩組模型組E2、T顯著降低（P<0.05），BUN、SCr顯著升高（P<0.05），F(xiàn)SH與LH無明顯差異（P>0.05）。2個(gè)模型組之間E2、T、BUN、SCr、FSH與LH無明顯差異（P>0.05），見表2。

2.3精子密度與睪丸與腎臟器官稱重 2個(gè)模型組的腎臟重量明顯高于正常對(duì)照組，睪丸重量與精子密度明顯低于正常對(duì)照組（P<0.05）。模型A、B組間腎臟睪丸的重量變化無差異（P>0.05），模型B組的精子密度明顯低于模型A組（P<0.05）。

3討論

不育癥是臨床上常見的疾病，世界衛(wèi)生組織已將該疾病與心血管病、腫瘤并列，成為當(dāng)今影響人類生活和健康的3大主要疾病。不育原因涉及男女雙方，據(jù)歐美國家統(tǒng)計(jì)，不育困擾著世界范圍內(nèi)10%～15%的夫婦，其中有50%與男性因素相關(guān)?；谧鎳t(yī)學(xué)\"腎為先天之本\"、\"腎主生殖\"的理論基礎(chǔ)，從腎論治男性不育是該研究領(lǐng)域同行的共識(shí)。Adachi Y等[1]發(fā)現(xiàn)腺嘌呤可直接降低17β-羥類固醇脫氫酶的活性導(dǎo)致睪酮合成減少，或通過腎素-血管緊張素-固酮系統(tǒng)影響睪丸血液循環(huán)而損害性腺。袁源等[2]認(rèn)為腺嘌呤模型，可使睪丸參與代謝的酶及參與精子形成過程的酶活性下降，生精功能低下，睪丸組織病理發(fā)生改變，皮質(zhì)醇及血漿促性腺激素含量下降。腺嘌呤誘導(dǎo)所致的不育大鼠表現(xiàn)為腎陽溫煦生化功能不足，水液代謝異常，生殖機(jī)能衰退證候，即：日益消瘦，畏寒肢冷，倦縮拱背，精神萎頓，體毛脫落，基礎(chǔ)體溫降低，多尿，排泄尿素和肌酐能力降低。血中睪丸酮、雌二醇等激素含量降低。腎組織中與糖、脂肪、蛋白質(zhì)代謝有關(guān)的各種酶活性明顯減弱。睪丸組織退行性變，精子產(chǎn)生減少或缺如等[3]。因此，腺嘌呤誘導(dǎo)模型是目前證候特征吻合較理想的一種\"腎陽虛\"模型。

本研究用兩種濃度（200 mg/Kg/d與300 mg/Kg/d）腺嘌呤灌胃大鼠，2個(gè)模型組大鼠都出現(xiàn)畏寒肢冷，蜷縮拱背，反應(yīng)遲鈍，飲食差，體毛枯疏，失去光澤，脫毛；陰囊皺縮，體重減輕，尿量增多等體征；實(shí)驗(yàn)檢測(cè)發(fā)現(xiàn)睪酮、雌二醇、體重、睪丸重量與精子密度明顯降低，血清肌酐、血清尿素氮與腎臟重量明顯升高，說明2種濃度腺嘌呤均可成功誘導(dǎo)大鼠出現(xiàn)腎陽虛不育癥。在本研究中2個(gè)模型組都有死亡例數(shù)，兩組之間腺嘌呤致死率無差別。實(shí)驗(yàn)中死亡的動(dòng)物經(jīng)尸體解剖檢查，肺組織中未發(fā)現(xiàn)藥液及出血點(diǎn)，排除因灌胃操作失誤造成死亡。而每只死亡大鼠均出現(xiàn)大白腎，有的腎表面有出血點(diǎn)，提示腎損傷可能是動(dòng)物死亡的主要因素之一。盡管兩個(gè)模型組之間E2、T、BUN、SCr、FSH與LH無明顯差異，但模型B組在灌胃第3 d出現(xiàn)多尿，模型A組在灌胃第9 d才出現(xiàn)多尿，說明較高濃度腺嘌呤對(duì)腎功能的影響更明顯，可致動(dòng)物較早出現(xiàn)腎陽虛的癥狀。精子密度可直接反映大鼠的生殖能力，本研究中兩個(gè)模型組的精子密度明顯低于正常對(duì)照組，并且較高濃度的腺嘌呤對(duì)精子發(fā)生的抑制作用更明顯。影響精子發(fā)生的因素很多，包括睪丸特異性生化酶，如：乳酸脫氫酶（lactate dehydrogenase，LDH）和谷氨?；D(zhuǎn)移酶（Gamma-glutamyltransferase，γ-GT）。其中LDH 可參與生精上皮的成熟；γ-GT 可促進(jìn)精子的成熟[4]。因此，腺嘌呤抑制精子發(fā)生的作用機(jī)制還需做進(jìn)一步的研究。

參考文獻(xiàn)：

[1]Adachi Y， Nakada T. Effectof experimentally induced renal failure on testicular testosterone synthesis in rats[J]. Arch Androl，1999，43（1）：37-45.

[2]袁源，曹貴珠，卞慧敏.補(bǔ)腎法治療男性不育癥的實(shí)驗(yàn)研究概況[J].時(shí)珍國醫(yī)國藥，2003，14（5）：306-307.

[3]鄭平東，朱燕俐，丁名城，等.腺嘌呤制作慢性腎功能不全動(dòng)物模型[J].中華腎臟病雜志，1989，5（6）：342-343.

[4]黃天倫，夏明珠，任開明.腺嘌呤致雄性不育和慢性腎衰大鼠模型的相關(guān)性研究[J].中國男科學(xué)雜志，2003，17（3）：171-173.編輯/肖慧