海南熱帶牧草真菌病害調(diào)查（Ⅱ）

曉妹 劉文波 丁曉帆 蒲金基

摘 要 熱帶牧草病害是影響其產(chǎn)量和品質(zhì)的重要因素之一。本次在海南調(diào)查了10種禾本科和豆科牧草，共鑒定出了12種真菌性病害，其中國內(nèi)新記錄寄主病害9種，海南省新記錄寄主病害3種。為害較重的有灰梨孢[Pyricularia grisea（Cke.）Sacc.]引起的雙花草梨孢灰斑病、新月彎孢[Curvularia lunata（Wakker）Boedijn]引起的雀稗或鼠尾粟彎孢菌葉斑病、球黑孢霉[Nigrospora zimmerman（Sacc.）Mason]引起的熱研11號黑籽雀稗葉枯病以及蝴蝶豆假尾孢（Pseudocercospora centrosematicola）引起的蝴蝶豆褐斑病。

關(guān)鍵詞 海南；熱帶牧草；真菌病害；鑒定

中圖分類號 S432 文獻標(biāo)識碼 A

草業(yè)是農(nóng)業(yè)的重要組成部分，中國是世界上第二草業(yè)大國，但草業(yè)產(chǎn)值在中國僅占農(nóng)業(yè)總產(chǎn)值的10%左右，與發(fā)達國家相比還有很大的發(fā)展空間。海南草地資源豐富，天然草地面積占總土地面積的27.93%，發(fā)展熱帶牧草對調(diào)整海南熱帶農(nóng)業(yè)結(jié)構(gòu)、帶動海南畜牧業(yè)的發(fā)展具有重要的意義[1]。近年來，隨著人們對草業(yè)的認識不斷提高和重視，中國草業(yè)得到了較快的發(fā)展。但隨著熱帶牧草的不斷引種和繁育推廣，加之南方適宜病害流行的氣候條件，潛在的牧草病害問題日趨嚴重，已成為影響熱帶牧草產(chǎn)量和品質(zhì)的重要因素之一[2-8]。國外于20世紀(jì)70年代開始重視牧草病害研究，對熱帶牧草病害的發(fā)生情況有較為詳細的描述[9]。我國對北方牧草病害也有較詳細的記錄[10-11]，但一直以來對熱帶牧草病害關(guān)注不夠。近幾年，國內(nèi)外熱帶牧草新病害不斷出現(xiàn)[6-8，12-14]，為明確海南熱帶牧草病害的發(fā)生情況，本研究對海南部分熱帶牧草的真菌性病害進行了初步調(diào)查鑒定，并進行了對比分析，旨在為今后熱帶牧草的抗病育種和綜合防治提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 標(biāo)本采集

采自中國熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)院品資所熱帶牧草種質(zhì)圃及其海南大學(xué)儋州校區(qū)周邊。

1.2 病害鑒定

將采回的樣本首先描述癥狀，然后一部分根據(jù)寄主編號保存，一部分依據(jù)文獻[2-11，15-17]，采用常規(guī)病害研究技術(shù)[18]進行鑒定。對病征明顯的常見病害，直接制片或以徒手切片鏡檢鑒定；對沒有產(chǎn)生病征、直接鏡檢有一定困難的標(biāo)本，進行病原菌常規(guī)組織分離，獲得病原菌的純培養(yǎng)后，再進一步鑒定并做致病性測定。每種病原菌每個性狀測量100個。對已鑒定的病原菌，用LEICA DM LS2顯微攝像系統(tǒng)在10×40倍下拍照保存。

2 結(jié)果與分析

2.1 國內(nèi)新記錄寄主病害

2.1.1 臺灣甜草紋枯病 癥狀：主要為害近基部葉片葉鞘。病斑不規(guī)則形或云紋形，邊緣暗褐色，中部草黃色或灰白色。嚴重時，葉鞘變黃枯死、脫落。濕度大時，病健交界處產(chǎn)生白色菌絲體。

病原：幼嫩菌絲無色，后變?yōu)辄S褐色，直徑7～10 μm；分枝處呈銳角，明顯縊縮，距分枝不遠處有1個橫隔膜，細胞內(nèi)有顆粒狀內(nèi)含物（圖1）。

寄主：臺灣甜草（Oldenlandia cantonensis How）。

國內(nèi)[8]對禾本科牧草紋枯病有詳細的介紹，但未見為害臺灣甜草的記錄。根據(jù)上述病原菌的形態(tài)特征和文獻[8]，初步確定引起臺灣甜草紋枯病的病原菌為立枯絲核菌（Rhizoctonia solani Kühn）。

2.1.2 珍珠茅刀孢褐斑病 寄主：珍珠茅（Scleria berg）。

癥狀：主要為害葉片。初期在葉片上出現(xiàn)褐色斑點，擴展后大多數(shù)病斑呈梭形，中部淡褐色至黃褐色，邊緣暗褐色，有些病斑外緣有明顯的黃色暈圈。后期病斑上隱約出現(xiàn)同心輪紋（圖2）。

病原：分生孢子梗單生，直立，不分枝，褐色至深褐色，有5～6個隔膜；分生孢子棍棒狀或近圓柱形，頂端喙細長，具3～7個隔膜，直立或稍彎曲，褐色至深褐色，表面光滑，大小28.0～58.0 μm×6.0～7.0 μm。

寄主：珍珠茅（Scleria berg）。

該病害在國內(nèi)外[2-17]未見報道，病原菌形態(tài)特征與文獻[13]報道的刀孢霉屬特征接近，所以初定為刀孢霉屬（Clasterosporium sp.）。

2.1.3 鼠尾粟、雀稗彎孢葉斑病 癥狀：主要為害葉片；病斑初期為褐色小點，擴展后大多數(shù)呈橢圓形或梭形，病斑中部灰白色，邊緣褐色，長約3～6 mm，寬多受葉脈限制；有時數(shù)個病斑可愈合成大斑（圖3）。

病原：在PDA培養(yǎng)基上菌落褐色，絮狀。分生孢子梗深褐色，不分枝，有隔膜；分生孢子不等短弓形，常向一側(cè)彎曲，3個隔膜，中間隔膜常位于中央偏下處，彎向一側(cè)，基部起第三個細胞膨大，褐色或深褐色，兩端細胞淡褐色，壁光滑，大小18.0～32.0 μm×8.0～16.0 μm。

寄主：鼠尾粟[Sporobolus fertilis（Steud.）W. D. Glayt]、雀稗[Paspalum thunbergii Kunth.]。

國內(nèi)文獻[10，17]報道，為害禾本科牧草的彎孢霉有8種：新月彎孢（Curvularia lunata（Wakker）Boedijn）、近緣彎孢（C. affins Boed.）、短孢彎孢（C. brachyspora Boed.）、畫眉草彎孢（C. eragrostidis J.A.Meyer）、膝曲彎孢霉（C. geniculata Boed.）、間型彎孢（C. intermedia Baedijn）、不等彎孢（C. inaequalis）和棒狀彎孢（C.clavata），但寄主范圍未見記錄鼠尾粟和雀稗，除新月彎孢外，其它彎孢的中隔位于中央。所以根據(jù)上述病原菌的形態(tài)特征，初步確定引起鼠尾粟和雀稗彎孢葉斑病病原菌為新月彎孢[Curvularia lunata（Wakker）Boedijn]。

2.1.4 雙花草梨孢灰斑病 癥狀：主要為害中下層葉片；病斑梭形，邊緣紫紅色，中部灰白色，兩端有與葉脈平行的紫紅色縱向壞死線（圖4）。

病原：分生孢子梗2～5根成束從寄主氣孔伸出，灰色，有隔，略彎曲，大小55.0～95.0 μm×4.0～5.0 μm；分生孢子洋梨形或卵形，具2個隔膜，頂細胞錐形或成緣狀，孢子在分隔處最寬，基細胞外有臍點，大小為17.0～24.0 μm×8.0～10.0 μm。

寄主：雙花草[Dichanthium annulatum（Forsk.）Stapf]。

國內(nèi)外[7-9]尚無報道灰梨孢為害雙花草的記載。上述觀測到的病原菌形態(tài)特征和文獻[10]記錄的灰梨孢（Pyricularia grisea（Cke.）Sacc.）特征極為接近，故確定雙花草梨孢灰斑病的病原菌為灰梨孢（Pyricularia grisea（Cke.）Sacc.）。

2.1.5 熱研11號黑籽雀稗葉枯病 癥狀：主要為害葉片；大多自葉尖開始發(fā)病，沿葉緣向下蔓延呈倒“V”字形，受害部位淡褐色或草黃色，病斑邊緣有黃色暈圈（圖5）。

病原：分生孢子梗屈曲狀、淡褐色、有隔膜；分生孢子單生于分生孢子梗頂端，初期淡褐色，成熟后呈亮黑色，廣橢圓形至近球形，單胞，光滑，直徑17.4～21.1 μm。

寄主：熱研11號黑籽雀稗[Paspalua atratum cv. Reyan No.11]。

國內(nèi)外[2-11，15-17]尚無報道，依據(jù)病菌分生孢子梗和分生孢子的形態(tài)、顏色、大小等，其特征與文獻[19]記載的球黑孢霉相近，據(jù)此初步確定熱研11號黑籽雀稗葉枯病的病原菌為球黑孢霉[Nigrospora zimmerman（Sacc.）Mason]。

2.1.6 孔穎草窄條斑病 癥狀：主要為害葉片，葉鞘也可受害，染病初為褐色小點，后沿葉脈向兩端擴展，病斑與葉脈平行，窄長條形，四周呈紅褐色，長約11.0～39.0 mm，大多數(shù)長20.0～25.0 mm（圖6）。

病原：分生孢子梗束生，基部深褐色，往上呈膝狀彎曲且顏色變淡，孢痕明顯加厚，6～7個隔膜，大小75.0～110.0 μm×4.0～5.0 μm；分生孢子細鞭狀，微彎，有5～7個隔膜，近無色透明，大小14.0～25.0 μm×2.0～5.0 μm。

寄主：孔穎草[Bothriochloa pertusa（L.）A.Camus]。

國內(nèi)外[4-17]尚無報道由尾孢為害孔穎草的記錄，根據(jù)上述病原菌的形態(tài)特征，初步確定孔穎草窄條斑病的病原菌為尾孢屬（Cercospora sp.）。

2.1.7 高粱煤煙病 癥狀：主要為害中下層葉片、葉鞘。也可為害穗部。被害部位被薄膜狀黑色霉?fàn)钗锼采w，外觀如被煤煙薰過一般（圖7）。

病原：菌絲黑褐色，有分隔。分生孢子星狀，無色至淡褐色，多為4分叉，每個分叉具多個隔膜，分隔處略縊縮，分叉頂端色淡，大小48.6～68.3 μm×4.2～8.7 μm。

寄主：高粱（Sorghum vulgare）。

從病原菌形態(tài)來判斷，與引起芒果煤煙病的三叉孢菌[19]特征基本一致，因此初步確定引起高粱煤煙病的病原菌為三叉孢菌[Tripospermun acerium（Syd.）Speg.]，在國內(nèi)外未見報道[4-17]。

2.1.8 蝴蝶豆葉斑病 癥狀：主要為害中下層葉片。初期病斑呈褪綠小點，擴展后病斑近圓形、多角形或不規(guī)則形，邊緣褐色至暗褐色，外圍有明顯的黃色暈圈，后期個別病斑中心呈灰白色。濕度大時，病斑兩面生灰黑色霉層（圖8）。

病原：分生孢子梗單生或4～6個束生，基部深褐色，往上呈膝狀彎曲且顏色漸淡，孢痕不明顯，3～6個隔膜，大小45.0～100.0 μm×2.0～4.0 μm；分生孢子細鞭狀，無色，直立，有5～7隔膜，大小15.0～40.0 μm×1.1～2.3 μm，臍點不明顯。

寄主：蝴蝶豆（Centrosema pubescens Benth），別名：距瓣豆。

國外[9]報道引起蝴蝶豆葉斑病的病原有變灰尾孢（Cercospora canescens）、蝴蝶豆假尾孢（Pseudocercospora centrosematicola）、P. bradburyae、C. cetrosematis和C. cylindrospora 5個種。根據(jù)上述病原菌的形態(tài)特征，初步確定引起蝴蝶豆褐斑病病原菌為蝴蝶豆假尾孢（Pseudocercospora centrosematicola）。

2.2 海南省新記錄寄主病害

2.2.1 豬屎豆褐斑病 癥狀：主要為害葉片。多從葉緣開始發(fā)病，病斑呈“V”字形或不規(guī)則形，褐色，病健交界明顯，邊緣有不明顯的黃暈。濕度大時，病斑上生一層灰黑色霉層。

病原：分生孢子梗4～6個束生，具3～7個隔膜，孢痕較明顯，大小40～90 μm×2.0～5.0 μm；分生孢子鼠尾狀，無色透明，有3～7個隔膜，大小20.0～30.0 μm×2.0～4.0 μm。

寄主：豬屎豆（Crotalaria sp.）。

病原特征與文獻[15]報道的豬屎豆尾孢（Cercospora crotalariae Sacc.）相似。

2.2.2 高粱紫斑病 癥狀：主要為害葉片和葉鞘。葉片染病初生橢圓形至長圓形紫紅色斑塊，邊緣不明顯，有時產(chǎn)生淡紫色暈圈。

病原：分生孢子倒棒形或圓柱形，無色，直或稍彎，頂端較尖，基部截形，具3～9個隔膜，大小28～116 μm×3.7～5.8 μm，臍點明顯。

寄主：高粱（Sorghum vulgare）。

病原特征與文獻[15]報道的高粱尾孢（Cercospora sorghi Ellis & Everhart）相似。

2.2.3 雙花草銹病 癥狀：主要為害葉片。在葉背產(chǎn)生紅褐色夏孢子堆，黃色暈圈不明顯，后期孢子堆破裂，散出紅褐色粉末（夏孢子），嚴重時葉片枯黃。

病原：夏孢子橢圓形、圓形、卵圓形、不規(guī)則形，紅褐色，單胞，表面密生細刺，大小13.0～34.0 μm×16.0～32.0 μm。

寄主：雙花草[Dichanthium annulatum（Forsk.）Stapf]。

文獻[11]報道引起雙花草銹病的病原在國內(nèi)有毛蕊草柄銹菌（Puccinia duthiae Ell.et Tracy）和白羊草柄銹菌（P. cesatii Schroet.）兩個種，但在海南未觀察到冬孢子階段，故暫時不能確定到種。

3 討論與結(jié)論

本次對海南10種禾本科和豆科牧草調(diào)查共鑒定出12種真菌性病害，其中半知菌11種，擔(dān)子菌1種；國內(nèi)新記錄寄主病害9種，海南省新記錄寄主病害3種。為害較重的有灰梨孢[Pyricularia grisea（Cke.）Sacc.]引起的雙花草梨孢灰斑病、新月彎孢[Curvularia lunata（Wakker）Boedijn]引起的雀稗或鼠尾粟彎孢菌葉斑病、球黑孢霉[Nigrospora zimmerman（Sacc.）Mason]引起的熱研11號黑籽雀稗葉枯病以及蝴蝶豆假尾孢（Pseudocercospora centrosematicola）引起的蝴蝶豆褐斑病。結(jié)合分析本文結(jié)果和文獻[3-8]，可以看出在熱帶禾本科牧草普遍發(fā)生較為普遍的病害是梨孢灰斑病、銹病和彎孢霉葉斑病，而在豆科牧草上由炭疽菌、尾孢、假尾孢引起的葉斑病較為常見。

本次調(diào)查是在7～9月份開展的，這個季節(jié)的海南天氣炎熱、雨水多，有利于高溫高濕性病害的發(fā)生和流行，但不利于偏低溫高濕或適溫干濕交替條件下易流行病害的發(fā)生，如霜霉病、灰霉病、白粉病等，所以在此次調(diào)查中未發(fā)現(xiàn)這些病害。其次，本次調(diào)查主要檢查了葉、莖、穗部，但文獻表明根腐病[Drechslera sorokininana（Sacc.）Subram.et Jain，Curr.，F(xiàn)usarium sp.][4，9]、根結(jié)線蟲?。∕eloidogyne javanica，M. incognita，M. acronea，M. arenaria）[2，9]對熱帶牧草根部的為害也很嚴重，值得注意。

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責(zé)任編輯：葉慶亮