氣相色譜—質(zhì)譜法分析市售豆芽中生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑

李殷 徐霞 袁荷芳 高蕙文 馮華剛

摘要 [目的]用合適的方法分析測(cè)定市售豆芽中的生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑殘留。[方法]以常州地區(qū)市售豆芽為研究對(duì)象，利用氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法，研究了其中4氯苯氧乙酸（PCPA）、2，4二氯苯氧乙酸（2，4D） 2種生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑的殘留情況。[結(jié)果]檢測(cè)結(jié)果表明，豆芽菜中含有大量的4氯苯氧乙酸，但不同來(lái)源的豆芽中這2種物質(zhì)的含量波動(dòng)較小，而2，4D未檢出。試驗(yàn)用氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法測(cè)定目標(biāo)物質(zhì)的回收率達(dá)到82.65%～100.53% ，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差均小于15%。[結(jié)論]研究表明，生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑殘留是豆芽菜安全控制的主要對(duì)象。

關(guān)鍵詞 氣質(zhì)聯(lián)用；豆芽；生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑；殘留

中圖分類號(hào) S481+.8 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼 A 文章編號(hào) 0517-6611（2014）27-09527-02

Analysis on Growth Regulator in Bean Sprout by GCMS Method

LI Yin， XU Xia， YUAN Hefang et al

（Changzhou Product Quality Supervision and Inspection Institute， Changzhou， Jiangsu 213001）

Abstract [Objective] To analyze growth regulator residue in bean sprout by appropriate method. [Method] With bean sprout in Changzhou as study object， using GCMS method， the residue of PCPA and 2， 4D was studied. [Result] The detection results showed that， bean sprout contains a large amount of PCPA， the fluctuation of the two materials in bean sprouts from different places is small， 2， 4D was not detected. The recovery rate of the target materials is up to 82.65%-100.53%， the RSD is less than 15%. [Conclusion] The growth regulator residue is the main object for controlling safety of bean sprout.

Key words GCMS； Bean sprout； Growth regulator； Residue

近年來(lái)，媒體屢次曝光市場(chǎng)上出現(xiàn)“毒豆芽”，即一些不良商販在制作過(guò)程中使用無(wú)根素、生長(zhǎng)素、保險(xiǎn)粉等國(guó)家禁用的食品添加劑來(lái)偽裝豆芽外表，使豆芽外表白嫩但口感很差，且對(duì)人體有很大的危害。無(wú)根素和生長(zhǎng)素，是能使豆芽快速生長(zhǎng)的激素類農(nóng)藥，對(duì)人體有致癌、致畸形的危害，為國(guó)家明令禁止在食品生產(chǎn)中使用的化學(xué)制品，但黑作坊將這些激素加入水中加速豆芽的生長(zhǎng)。

植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑是人工合成的具有植物天然激素活性的一類有機(jī)化合物。2，4 二氯苯氧乙酸（2，4D）是一種植物生長(zhǎng)促進(jìn)劑，會(huì)在作物中產(chǎn)生殘留，使兒童發(fā)育早熟、女性生理發(fā)生改變、老年人骨質(zhì)疏松等，有致癌的可能。國(guó)標(biāo)（GB 2763-2012）規(guī)定，2，4D用于蔬菜除草劑最大殘留量≤0.5 mg/kg，嚴(yán)禁使用在豆芽生長(zhǎng)及豆芽?jī)?chǔ)存保鮮中。4氯苯氧乙酸鈉（PCPA），國(guó)內(nèi)商品名為防落素、保果靈，是一種廣效多功能的植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑。2，4D殘留量測(cè)定的國(guó)標(biāo)方法是氣相色譜法，但該方法存在樣品提取繁瑣、分離凈化難以操作、檢測(cè)靈敏度差等缺點(diǎn)。因此，筆者采用氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法測(cè)定市售豆芽中的生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑殘留。

1 材料與方法

1.1 材料

試驗(yàn)樣品來(lái)源于凌家塘批發(fā)市場(chǎng)以及中涼、勤業(yè)、新北、廟橋、戚墅堰等地區(qū)城鎮(zhèn)的各大市場(chǎng)，包括黃豆芽和綠豆芽2種，共27個(gè)樣品。

主要儀器：Agilent 7890GC/2000QQQ氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀。

主要試劑：甲醇，分析純；乙醚，分析純；石油醚，分析純；稀硫酸調(diào)制成pH=2酸性水溶液；無(wú)水硫酸鈉；衍生化試劑 14%三氟化硼甲醇溶液。4氯苯氧乙酸、2，4二氯苯氧乙酸標(biāo)準(zhǔn)溶液：準(zhǔn)確稱取適量的4氯苯氧乙酸、2，4二氯苯氧乙酸標(biāo)準(zhǔn)品（純度99.9%），用甲醇配制成濃度為1.00 μg/L的標(biāo)準(zhǔn)溶液。PCPA和2，4D的結(jié)構(gòu)式等信息見(jiàn)表1。

1.2 色譜質(zhì)譜條件

色譜條件：HP5ms色譜柱（0.25 mm×30 mm×0.25 μm），柱溫采用程序升溫，即初始溫度120 ℃，保持2 min，以6 ℃/min速率升至230 ℃，保持1 min；載氣為氦氣（ 純度99.99% ），進(jìn)樣口溫度300 ℃，分流進(jìn)樣；進(jìn)樣量1 μl；載氣為高純氮?dú)?，流?.0 ml/min。

質(zhì)譜條件：電子轟擊離子源，傳輸線溫度280 ℃；電子轟擊電離源（EI）；源溫度230 ℃；四級(jí)桿溫度150 ℃；電子能量70 eV；接收極電流200 gA；光電倍增器電壓500 V；碰撞氣體為氬氣，碰撞流量1.5 ml/min；溶劑延遲時(shí)間5 min；多反應(yīng)監(jiān)測(cè)（MRM）模式檢測(cè)。進(jìn)行色譜-質(zhì)譜聯(lián)用分析，采集所得到的質(zhì)譜圖利用NIST譜庫(kù)檢索，同時(shí)根據(jù)參考文獻(xiàn)進(jìn)行定性。定量分析結(jié)果是依據(jù)選擇性離子流色譜峰的峰面積標(biāo)準(zhǔn)曲線法來(lái)計(jì)算各組分的相對(duì)含量。

1.3 樣品前處理方法

稱取搗碎混勻的豆芽樣品10.0 g于具塞錐形瓶?jī)?nèi)，加入pH 2的酸性水溶液8 ml和20 ml乙腈，振蕩提取30 min，過(guò)濾，濾渣用5 ml乙腈洗滌2次，合并濾液于100 ml分液漏斗中，并加入10 g氯化鈉，振蕩混勻，靜置40 min，分層，提取乙腈層，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器除去乙腈，用5 ml甲醇分次轉(zhuǎn)移至20 ml頂空分析玻璃瓶中。

1.4 衍生化方法 加5 ml（14%三氟化硼甲醇溶液于上述頂空分析玻璃瓶中，加蓋密封，在65 ℃水浴中保持45 min后，迅速置于冰浴中冷卻，將衍生反應(yīng)液轉(zhuǎn)移至盛有10 ml飽和氯化鈉溶液的50 ml具塞比色管中，用10 ml石油醚分2次提取，合并有機(jī)相，經(jīng)無(wú)水硫酸鈉脫水，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至完全干燥，用石油醚定容進(jìn)氣質(zhì)。

1.5 標(biāo)準(zhǔn)工作溶液的制備

取適量的4氯苯氧乙酸、2，4二氯苯氧乙酸標(biāo)準(zhǔn)溶液于20 ml頂空分析玻璃瓶中，依“1.4”衍生化方法制備不同濃度的4氯苯氧乙酸、2，4二氯苯氧乙酸甲酯標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，用石油醚定容至2 ml，進(jìn)樣1 μl于氣相色譜質(zhì)譜儀中。

2 結(jié)果與分析

2.1 色譜質(zhì)譜條件的選擇

根據(jù)歐盟2002/657/EC指令規(guī)定，對(duì)于低分辨氣相色譜-質(zhì)譜確證方法必須達(dá)到4個(gè)確證點(diǎn)的要求，采用子離子掃描方式進(jìn)行二級(jí)質(zhì)譜分析，對(duì)子離子進(jìn)行了優(yōu)化選擇，確定定量離子和輔助定性離子。通過(guò)優(yōu)化透鏡電壓、碰撞能量、質(zhì)譜分辨率等質(zhì)譜參數(shù)，使氯苯氧乙酸化合物的分子離子與特征碎片離子產(chǎn)生的離子對(duì)強(qiáng)度達(dá)到最大。PCPA和2，4D的質(zhì)譜分析參數(shù)見(jiàn)表2。

2.2 樣品預(yù)處理?xiàng)l件的優(yōu)化

2.2.1 提取溶劑的選擇。

豆芽中PCPA和2，4D一般以鈉鹽的形式存在，該試驗(yàn)用乙腈作為提取溶劑，乙腈能與水互溶，并且它的極性大，提取效果好，能夠滿足對(duì)豆芽中PCPA和2，4D提取的需要。該試驗(yàn)采用乙腈在酸性條件下提取，一方面將PCPA和2，4D的鈉鹽酸化，另一方面可以避免有機(jī)相和水相分層時(shí)形成乳化層，從而使乙腈提取物干凈、雜質(zhì)少，回收率高。

2.2.2 衍生化試劑的選擇。由于PCPA和2，4D分子中帶有極性基團(tuán)，極性較強(qiáng)，因此在進(jìn)行氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用分析前，應(yīng)進(jìn)行衍生化處理以改善其極性，便于氣相分析。該試驗(yàn)以三氟化硼乙醚-甲醇作為衍生化試劑，使PCPA和2，4D轉(zhuǎn)變?yōu)闃O性較小的4氯苯氧乙酸甲酯和2，4二氯苯氧乙酸甲酯。

2.2.3 衍生化后期凈化過(guò)程。2，4D采用國(guó)標(biāo)5009.175衍生化后過(guò)硅鎂吸附小柱凈化，凈化后進(jìn)入氣相測(cè)定。該試驗(yàn)采用串聯(lián)質(zhì)譜，極大地降低了噪音和干擾峰，省去了后期凈化步驟，可減少硅鎂吸附小柱凈化過(guò)程所造成的回收率的降低。

常宇文等采用凝膠滲透色譜進(jìn)行衍生化后期凈化過(guò)程^[4]，該方法需大量使用環(huán)己烷∶乙酸乙酯為1∶1的試劑，造成大量試劑的浪費(fèi)和試劑污染問(wèn)題。

2.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線、精密度和檢出限

以選擇性離子流色譜峰的峰面積為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)，制作標(biāo)準(zhǔn)曲線。

PCPA所獲得的標(biāo)準(zhǔn)工作曲線為Y=1 809.45X+33 364，相關(guān)系數(shù)為0.994 208；2，4D所獲得的標(biāo)準(zhǔn)工作曲線為Y=1 157.85X+12 500，相關(guān)系數(shù)為0.994 207，方法檢出限都為0.1 μg/L，每個(gè)濃度做3個(gè)平行試驗(yàn)，RSD在1.25%～2.81%，說(shuō)明該方法測(cè)定豆芽菜中氯苯氧乙酸含量的檢測(cè)結(jié)果是可靠的。

2.4 豆芽中的生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑殘留分析

試驗(yàn)得出，豆芽菜中PCPA檢出含量范圍為0.5～1.3 mg/kg，而2，4D均未檢出。從豆芽中生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑的含量可以推斷，在豆芽生產(chǎn)中有使用生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑的現(xiàn)象。

2.5 不同生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑在豆芽中的檢出率

由于蔬菜中沒(méi)有規(guī)定生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑的限量標(biāo)準(zhǔn)，因此該研究以檢出率作為依據(jù)評(píng)定豆芽中生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑殘留情況。

從表3看出，PCPA在豆芽中檢出次數(shù)不多，其檢出率達(dá)到了26%；2，4D 1次也未檢出，檢出率為0。

3 討論

豆芽是人們喜歡的蔬菜之一，在生產(chǎn)過(guò)程中部分生產(chǎn)者喜歡用生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑催芽，從而導(dǎo)致其生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑含量偏高。由于目前國(guó)內(nèi)還沒(méi)有生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑殘留的檢測(cè)方法標(biāo)準(zhǔn)和限量標(biāo)準(zhǔn)，加之植物中還有內(nèi)源生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑和外源生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑之分，而國(guó)外也只將2，4D作為除草劑加以限制，因此在實(shí)際檢測(cè)過(guò)程中很難判定生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑是否超標(biāo)。

同時(shí)蔬菜中生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑的檢測(cè)方法也不盡完善，沒(méi)有相應(yīng)的國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)。目前多采用液相色譜、液質(zhì)聯(lián)用、氣質(zhì)聯(lián)用等方法，因此如何統(tǒng)一方法，建立標(biāo)準(zhǔn)，對(duì)完善蔬菜中生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑的使用和監(jiān)督有重要作用。

參考文獻(xiàn)

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