木薯塊根膨大期韌皮部和木質(zhì)部比較蛋白組學(xué)初步研究

王力敏　王東陽　王丹　王海燕　王紅巖　王雪君　王斌　王旭初

摘 要 以‘華南8號木薯塊根膨大期的韌皮部和木質(zhì)部為材料，采用改進酚抽法提取總蛋白，進行一維和二維電泳，電泳圖譜經(jīng)Image Master分析，得到差異蛋白點進行質(zhì)譜鑒定。結(jié)果表明：改進酚抽法可以從木薯塊根韌皮部和木質(zhì)部中提取高質(zhì)量總蛋白，用于蛋白質(zhì)組學(xué)研究；獲得分離性好、分辨率及重復(fù)性較高的雙向電泳圖譜；比較木薯塊根韌皮部和木質(zhì)部雙向電泳圖譜發(fā)現(xiàn)265個差異表達蛋白點，其中29個在韌皮部特異表達，17個在木質(zhì)部特異表達；成功鑒定出8種差異蛋白，這些蛋白主要參與翻譯后修飾、無機離子和氨基酸轉(zhuǎn)運代謝、分子伴侶和信號轉(zhuǎn)導(dǎo)等代謝通路。本研究初步比較木薯塊根韌皮部和木質(zhì)部的蛋白表達差異性，為進一步從蛋白質(zhì)組水平研究木薯塊根膨大過程中淀粉轉(zhuǎn)運、積累和合成調(diào)控機制奠定了技術(shù)基礎(chǔ)。

關(guān)鍵詞 木薯；塊根；韌皮部；木質(zhì)部；比較蛋白質(zhì)組學(xué)；質(zhì)譜分析

中圖分類號 S533 文獻標(biāo)識碼 A

木薯（Manihot esculenta Crantz）是多年生熱帶亞熱帶淀粉作物，木薯塊根為其主要營養(yǎng)貯藏器官，淀粉含量高達40%，是南美洲、非洲、亞洲發(fā)展中國家重要的糧食來源[1-2]。除食用外，木薯淀粉還可以用作生產(chǎn)變性淀粉、酒精、山梨醇等工業(yè)原料，用途十分廣泛[3]。鑒于其巨大的經(jīng)濟價值，提高木薯產(chǎn)量及淀粉含量便成為各國木薯基礎(chǔ)研究的重要目標(biāo)。

木薯塊根淀粉合成和調(diào)控機制已在生理和基因工程方面取得了一定的研究進展。研究人員對木薯塊根發(fā)育及淀粉積累做了一些生理方面的研究[4-5]，并運用基因工程手段來改變木薯根部淀粉合成相關(guān)基因如AGPase、SBE等的表達水平[6-8]，對塊根中一些淀粉積累相關(guān)基因做了初步研究[9-10]。但在蛋白質(zhì)組水平上的研究報道相對較少。有少數(shù)研究者對木薯根部的蛋白表達做了初步研究，如Sheffield等[11]對木薯的塊根和須根做了比較蛋白組學(xué)分析；Li等[12]利用液相色譜-電噴霧串聯(lián)質(zhì)譜技術(shù)（LC-ESI-MS/MS）從華南8號（SC8）木薯體細(xì)胞胚胎、幼苗和塊根組織中分離鑒定出383種蛋白，并對已鑒定蛋白的功能分類和組織特異性進行分析，為從“組學(xué)”方法上大規(guī)模、系統(tǒng)性研究木薯提供了借鑒；施涯鄰等[13]對木薯根、莖、葉組織的蛋白提取方法進行改進，將SDS提取法和TCA-丙酮法相結(jié)合可以制備出適合雙向電泳的蛋白樣品。目前，有關(guān)木薯的蛋白質(zhì)組學(xué)的研究主要集中在不同組織器官上，而對木薯塊根韌皮部和木質(zhì)部進行細(xì)致的比較蛋白質(zhì)組學(xué)研究則鮮有報道。

在高等植物中，韌皮部含有篩管和伴胞復(fù)合體，擔(dān)任著從“源”（如葉片等）到“庫”（如塊根、種子等）運輸光合產(chǎn)物的重要作用，而木質(zhì)部中含有大量的薄壁細(xì)胞，起著貯藏淀粉等營養(yǎng)物質(zhì)的作用[14-15]。木薯塊根是由纖維狀須根膨大發(fā)育形成，淀粉主要積累在其膨大的塊根木質(zhì)部中。在塊根膨大過程中，木薯地上部分形成的光合產(chǎn)物，由韌皮部運輸?shù)礁?，?jīng)過卸載轉(zhuǎn)運及淀粉再合成貯藏在薄壁細(xì)胞中。塊根的韌皮部和木質(zhì)部在此過程起著不同的作用，前者涉及光合產(chǎn)物的卸載和轉(zhuǎn)運，而后者則涉及淀粉再合成和貯藏積累。劉斌[16]對木薯塊根蔗糖卸載相關(guān)酶進行研究，發(fā)現(xiàn)細(xì)胞壁酸性轉(zhuǎn)化酶（CWI）在質(zhì)外體卸載中起著關(guān)鍵作用。在塊根膨大后期，木質(zhì)部CWI活性和表達量較高，韌皮部則在膨大前期較高，且高淀粉品種CWI蛋白的表達量整體要高于低淀粉品種。光合產(chǎn)物從“源”到“庫”的運輸和貯藏是一個復(fù)雜的、協(xié)調(diào)的系統(tǒng)，對于木薯根部同化物如何卸載轉(zhuǎn)運、淀粉高效積累貯藏以及整個生物學(xué)過程涉及的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)機制，目前還不是很清楚。本研究以華南8號（SC8）木薯膨大期塊根韌皮部及木質(zhì)部為材料，采用改進酚抽法盡量減少塊根中多糖類和其他雜質(zhì)成分的干擾，以便提取到高質(zhì)量蛋白，系統(tǒng)建立木薯塊根韌皮部及木質(zhì)部蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)體系，為進一步通過比較蛋白質(zhì)組學(xué)方法揭示木薯塊根發(fā)育和淀粉積累的調(diào)控機制提供技術(shù)基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 植物材料 SC8木薯種莖由中國熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)院熱帶作物品種資源研究所提供。當(dāng)年3月中旬扦插種植，正常生長5個月左右，選取生長健壯植株，采集粗壯的木薯塊根，清洗干凈后切取塊根中間段，剝離塊根韌皮部和木質(zhì)部（圖1，A～D），液氮速凍，-80 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.1.2 試劑 BPP法蛋白提取緩沖液：100 mmol/L Tris， 100 mmol/L EDTA， 50 mmol/L硼砂， 50 mmol/L 維生素C， 1% PVPP（W/V）， 1% Triton X-100（V/V），2% β-巰基乙醇（V/V）和30%蔗糖（W/V）， pH 8.0；蛋白裂解液： 7 mol/L 尿素， 2 mol/L 硫脲， 2% CHAPS（W/V）， 13 mmol/L DTT， 1% IPG buffer（V/V）；標(biāo)準(zhǔn)Laemmli buffer：62.5 mmol/L Tris-HCl ，2% SDS（W/V）， 10% 甘油， 5 % -巰基乙醇（V/V）， 0.001% 溴酚藍(lán)（W/V）；膠條平衡液： 50 mmol/L Tris-HCl， 6 mol/L尿素， 30% 甘油（V/V）， 2% SDS（W/V），0.002%溴酚藍(lán)（W/V）； GAP凝膠染色液： 0.125%考馬斯亮藍(lán)G-250（W/V）， 10% 硫酸銨（W/V）， 5%磷酸（V/V）， 30%（V/V）乙醇 ， 10% 甲醇（V/V）； 凝膠脫色液： 30%乙醇（V/V）， 5%乙酸（V/V）； 酶緩沖液： 1 mmol/L 氯化鈣， 25 mmol/L 碳酸氫銨， pH 8.5。

1.2 方法

1.2.1 蛋白提取 基于酚抽法[17]改進的BPP法，具體參考Wang等[18]操作步驟。

1.2.2 蛋白定量 采用Bradford方法[19]，每個樣品至少重復(fù)3次。

1.2.3 SDS-PAGE凝膠電泳 使用不連續(xù)膠SDS-PAGE法[20]，濃縮膠濃度為4%，分離膠濃度為12.5%，每孔上樣量約為30 μg，與Laemmli buffer等體積混勻后上樣。電泳條件為16 ℃恒溫電泳3 h左右，參數(shù)設(shè)置為3 W/gel 50 min，6 W/gel 2 h。

二維凝膠電泳（2-DE）：2-DE蛋白上樣量約為1 000 μg，上樣總體積為455 μL。蛋白樣品在水化盤內(nèi)使24 cm的pH 4-7線性IPG干膠條被動吸脹，水化16 h左右。等電聚焦程序設(shè)定為：250 V，3 h；500 V，2 h；1 000 V，1 h； 10 000 V，3 h；10 000 V，130 000 Vhr。聚焦結(jié)束后，用含1% DTT的平衡液和含4%碘乙酰胺的平衡液各平衡膠條15 min，平衡結(jié)束后在Ettan Daltsix電泳儀（GE Healthcare）中進行第二向SDS- PAGE，16 ℃恒溫電泳4.5 h左右，電泳參數(shù)設(shè)置為1.5 W/gel 1 h，8 W/gel 3.5 h。

1.2.4 凝膠染色及圖像采集分析 凝膠染色采用改進的考馬斯亮藍(lán)染色法[21]。染色后的凝膠用ImageScanner Ⅲ掃描儀（GE Healthcare）進行掃描和圖像采集。用ImageMaster 2D Platinum軟件（GE Healthcare）進行蛋白點檢測、凝膠匹配、將各個蛋白點的表達量歸一化后進行比較分析，獲得差異表達蛋白。

1.2.5 蛋白點膠內(nèi)酶解 選取目標(biāo)差異蛋白，進行膠內(nèi)酶解，具體參考簡化膠內(nèi)酶解方法[22]。對挖取的蛋白點，酶解后收集上清液直接用于質(zhì)譜鑒定。

1.2.6 酶解產(chǎn)物質(zhì)譜鑒定及數(shù)據(jù)庫搜索 酶解產(chǎn)物質(zhì)譜鑒定采用Bruker公司的基質(zhì)輔助激光解析電離飛行時間質(zhì)譜儀（MALDI-TOF MS/MS Ⅱ，Bruker），主要操作參考Shen等[23]的方法進行。所得數(shù)據(jù)通過Mascot Distiller軟件分析，分析結(jié)果（即肽指紋圖譜PMF）利用Matrix science網(wǎng)站（http：//www.matrixscience.com）進行數(shù)據(jù)搜索和匹配。檢索條件為：數(shù)據(jù)庫（為NCBInr分類（Taxonomy）選擇綠色植物界，酶類型選擇胰蛋白酶，允許一個位點漏切， 固定修飾為Carbamidomethyl（C），可變修飾為Oxidation（M），肽段偏差為±300 ppm。軟件設(shè)定檢索得分閾值為72分，超過72分即認(rèn)為匹配達到>95%的可信度（p<0.05）。

2 結(jié)果與分析

2.1 木薯塊根韌皮部及木質(zhì)部總蛋白的1-DE及2-DE

采用BPP法從每克木薯塊根韌皮部和木質(zhì)部鮮重材料中可以提取得到（0.522±0.132）mg和（0.408±0.045）mg總蛋白（圖2-A），說明木薯塊根中蛋白含量很低，且韌皮部蛋白含量略高于木質(zhì)部。從1-DE結(jié)果（圖2-B）可以看出，蛋白條帶清晰，且分離性較好，沒有出現(xiàn)拖尾現(xiàn)象，在高分子量區(qū)域（>100 ku）和低分子量區(qū)域（<20 ku）都可以檢測到明顯的蛋白條帶。另外，從塊根韌皮部和木質(zhì)部的1-DE圖譜中分別可以檢測到（49±2）和（46±1）條蛋白帶，而且2種組織的蛋白條帶圖譜很相似，個別條帶在豐度上出現(xiàn)差異（圖2-B 箭頭所指）。

從2-DE圖譜（圖3-A、B）上看，不管是塊根韌皮部還是木質(zhì)部，其凝膠背景都很干凈，蛋白點呈圓形或橢圓形，邊界清晰，基本無拖尾現(xiàn)象。應(yīng)用ImageMaster軟件對這2種組織蛋白的2-DE圖譜進行統(tǒng)計分析，結(jié)果從韌皮部中檢測出（1 068±49）個蛋白點，從木質(zhì)部中檢測出（982±31）個蛋白點（圖3-C），韌皮部分離的蛋白點數(shù)比木質(zhì)部稍多，說明韌皮部中可能含有種類更為豐富的蛋白。對2-DE圖譜中的蛋白點的分布區(qū)域進一步分析發(fā)現(xiàn)，2種組織的蛋白在不同pH值范圍分布相對較為均勻，而在pH 5～6范圍內(nèi)稍多（圖3-D）。2種組織的蛋白分子量主要集中在20～100 ku，低于20 ku和高于100 ku蛋白相對較少，在低于20 ku區(qū)域一些高豐度蛋白較多，尤其是在塊根木質(zhì)部中，高豐度蛋白分子量多集中在20 ku左右，而高于100 ku區(qū)域含有較多的低豐度蛋白（圖3-E）。

2.2 塊根韌皮部及木質(zhì)部蛋白質(zhì)組差異分析

為了研究木薯塊根2個不同組織部位蛋白表達模式的差異，利用ImageMaster軟件對同一發(fā)育時期塊根韌皮部和木質(zhì)部2-DE圖譜進行比較分析，找到了265個差異表達的蛋白點（表達豐度變化1.5倍以上），包括46個組織特異性蛋白點及219個豐度差異蛋白點（圖4-A、B），在韌皮部發(fā)現(xiàn)了29個特異蛋白點（圖4-A），119個相對于木質(zhì)部表達上調(diào)的蛋白點，在木質(zhì)部發(fā)現(xiàn)17個特異蛋白點（圖4-B），100個相對于韌皮部表達上調(diào)的蛋白點。這些差異蛋白點有可能與韌皮部和木質(zhì)部的不同代謝調(diào)控生理活動相關(guān)。因此，鑒定出這些差異蛋白信息將對于理解木薯塊根同化物轉(zhuǎn)運和淀粉積累調(diào)控機制具有十分重要的參考價值。

2.3 差異蛋白點膠內(nèi)酶解及MALDI-TOF-MS分析

在木薯塊根韌皮部和木質(zhì)部2-DE凝膠上各選取7個重復(fù)性好且分離性好的代表性差異蛋白點進行膠內(nèi)酶解，隨后進行質(zhì)譜鑒定，獲得PMF圖譜（圖5-A）。從所得的PMF圖譜上看（圖5-A），主要肽段峰集中在800～2 500（m/z）之間，這樣的酶切片段更加有利于后續(xù)的數(shù)據(jù)庫搜索以及進一步的二級質(zhì)譜分析。肽段主峰的信噪比較高，角蛋白峰（1 475.754）較少且信號較低，說明肽段抽提產(chǎn)物中含雜質(zhì)較少，無角蛋白污染。大多數(shù)蛋白的總肽段數(shù)在30～50左右，最高可達118條（表1），而且典型的胰蛋白酶自切峰（2 163.071）強度也較低，說明該方法中酶切效率也較高，自切程度低。由于熱帶作物木薯沒有專用蛋白數(shù)據(jù)庫，因此將質(zhì)譜結(jié)果通過Mascot Distiller軟件分析后，利用Matrix Science搜索引擎（http：//www.matrixscience.com/search）在NCBInr綠色植物總庫中進行搜索，最終有8個蛋白點的一級質(zhì)譜搜庫得分值超過了72分可信值（p<0.05），鑒定成功率在60%左右。

2.4 鑒定蛋白的生物信息學(xué)分析

在鑒定出的8個蛋白點中，有2個為組織特異性蛋白（Spot C1，Spot C8），其余蛋白點為組織表達差異蛋白。對搜庫得到的可信蛋白理論等電點和分子量與實驗測得等電點和分子量進行比較，發(fā)現(xiàn)實驗值和理論值基本一致，在雷達示意圖中比值都集中在1附近（圖5-B）。只有個別蛋白的等電點和分子量出現(xiàn)偏差，例如Spot C1，鑒定結(jié)果發(fā)現(xiàn)這些蛋白是某些蛋白的亞基，而執(zhí)行生物學(xué)功能的蛋白通常是由多亞基組成，在進行變性膠電泳時可以將其各個亞基分離。因此，等電點和分子量會出現(xiàn)偏移現(xiàn)象。另外一些鑒定蛋白，如Spot C5，是葡萄物種的推測蛋白，將其氨基酸序列在NCBI數(shù)據(jù)庫中進行Blast比對，與其同源性較高的大多數(shù)蛋白基本都是18 ku熱激蛋白（18.2 ku class I heat shock protein）家族成員，從而確定該蛋白也屬于這一家族。可以發(fā)現(xiàn)，木薯塊根中尤其是木質(zhì)部中18 ku熱激蛋白表達量非常高（表1；圖4），這可能與木薯的優(yōu)良耐干旱特性密切相關(guān)。

同時，利用NCBI中的COG數(shù)據(jù)庫對已鑒定蛋白進行功能分類分析，發(fā)現(xiàn)蛋白功能可歸于5類：1）翻譯后修飾、蛋白質(zhì)周轉(zhuǎn)或分子伴侶相關(guān)（O）， 有3個蛋白， 分別是C1，C5，C6； 2）無機離子轉(zhuǎn)運和代謝（P），有2個蛋白，分別是C2，C4；3）轉(zhuǎn)譯，核糖體結(jié)構(gòu)和生物起源，有1個蛋白；4）氨基酸轉(zhuǎn)運和代謝，有1個蛋白；5）信號轉(zhuǎn)導(dǎo)機制，有1個蛋白（表1；圖5-C）。

3 討論與結(jié)論

3.1 木薯塊根韌皮部和木質(zhì)部蛋白提取及雙向電泳方法的確定

植物蛋白提取技術(shù)一直是蛋白質(zhì)組學(xué)研究中的關(guān)鍵技術(shù)，蛋白提取質(zhì)量的好壞會直接影響到后續(xù)實驗的可靠性。不同的植物組織結(jié)構(gòu)及成分不同，適用的蛋白提取方法也不盡相同。木薯塊根尤其是木質(zhì)部中含有大量的淀粉及可溶性糖，而韌皮部中含有大量纖維成分，傳統(tǒng)的蛋白提取方法（如TCA/丙酮沉淀法[24-25]）通常難以高效去除這些物質(zhì)獲得高純度蛋白，而且繁瑣的提取過程會增加蛋白損失率。酚抽法[26-27]可以選擇性將蛋白分離至酚相中，多糖、多酚及鹽分可以保留在水相中，得到純度較高的蛋白產(chǎn)物。采用BPP法優(yōu)化改進了傳統(tǒng)酚抽法，其蛋白提取液中含有強除雜能力的試劑硼砂（Borax）和聚乙稀聚吡咯烷酮（PVPP），較高濃度的β-巰基乙醇和維生素C可以降低蛋白酶活性從而避免蛋白降解。本研究采用BPP蛋白提取方法，制備出適合雙向電泳的質(zhì)量較高的蛋白樣品。除了蛋白提取質(zhì)量的好壞會影響2-DE結(jié)果外，水化上樣、等電聚焦、膠條平衡、二向SDS-PAGE電泳及凝膠染色等技術(shù)環(huán)節(jié)也會對結(jié)果產(chǎn)生較大的影響。等電聚焦是否充分直接影響到蛋白一向分離效果，聚焦不足蛋白不能有效分離會導(dǎo)致橫向拖尾，聚焦過度同樣會出現(xiàn)橫向拖尾現(xiàn)象且易丟失低豐度點。在進行木薯葉片蛋白質(zhì)組學(xué)研究發(fā)現(xiàn)，蛋白上樣量在1～1.5 mg范圍時，10 000 V電壓聚焦至130 000 Vh可以獲得較好的聚焦效果，得到較多的蛋白點[28]。因而將該聚焦條件應(yīng)用到木薯塊根時，同樣獲得不錯的分離效果。同時考慮后續(xù)質(zhì)譜分析，采用具有高靈敏度和質(zhì)譜兼容性的改進考馬斯亮藍(lán)染色法[21]，獲得背景干凈，蛋白點圓形或橢圓形的木薯塊根2-DE圖譜。

3.2 鑒定蛋白的功能分析

所鑒定蛋白涉及到蛋白翻譯后修飾，無機離子和氨基酸轉(zhuǎn)運代謝，分子伴侶以及信號轉(zhuǎn)導(dǎo)等生物學(xué)功能，可能與同化物在韌皮部卸載轉(zhuǎn)運，信號感受和遠(yuǎn)距離傳遞，糖代謝相關(guān)酶活性調(diào)控以及淀粉積累等生物學(xué)過程密切相關(guān)。

本研究發(fā)現(xiàn)已鑒定的8個蛋白中有2個是組織特異表達的，其中Spot C1鑒定為26S蛋白酶調(diào)節(jié)亞基，在韌皮部中特異表達，而Spot C8為蛋白激酶，在木質(zhì)部中特異表達，前者與蛋白質(zhì)周轉(zhuǎn)相關(guān)，而后者與蛋白質(zhì)磷酸化相關(guān)，功能分類上與信號轉(zhuǎn)導(dǎo)相關(guān)。

抗壞血酸氧化酶（Spot C2）、MnSOD（Spot C4）和過氧化還原酶（Spot C6）都是生物體內(nèi)重要的抗氧化酶。植物即使在最佳的生長條件下也能通過新陳代謝途徑產(chǎn)生活性氧比如電子傳遞等途徑，過多的活性氧會使植物產(chǎn)生氧化損傷，而抗壞血酸氧化酶、MnSOD和過氧化還原酶能夠有效消除活性氧的產(chǎn)生，是阻止氧化脅迫的重要組分[29]。本研究中，抗壞血酸氧化酶、MnSOD和過氧化還原酶在木質(zhì)部中大量上調(diào)表達，可能是木質(zhì)部中淀粉形成和貯藏過程會消耗大量的能量，由于能量消耗和無機離子轉(zhuǎn)運過程中產(chǎn)生許多活性氧，而抗壞血酸氧化酶、MnSOD和過氧化還原酶大量表達就是為了消除活性氧的產(chǎn)生，避免對木薯塊根木質(zhì)部在淀粉積累過程中產(chǎn)生氧化脅迫，而使細(xì)胞內(nèi)氧化還原內(nèi)環(huán)境受到破壞，從而影響細(xì)胞的正常代謝和植物正常的生長發(fā)育過程。因此，初步推斷木薯塊根淀粉積累的過程中能夠促進抗氧化蛋白的表達。

翻譯起始因子5A（Spot C3）是調(diào)控生物生長發(fā)育、衰老及環(huán)境適應(yīng)等的重要因子，有研究表明它是調(diào)控細(xì)胞增殖生長和衰老的重要分子開關(guān)[30]。對正在衰老的番茄花、子葉、果實和成熟的鳳梨果實的研究發(fā)現(xiàn)eIF5A的大量表達，證實eIF5A與植物細(xì)胞衰老關(guān)系密切[30，31]。本研究中，翻譯起始因子5A在木薯塊根木質(zhì)部中大量上調(diào)表達，可能與本試驗取材是成熟的木薯塊根相關(guān)，淀粉在木薯塊根木質(zhì)部薄壁細(xì)胞中大量積累，但同時有許多細(xì)胞不斷的衰老死亡，以此促進了翻譯起始因子5A的表達。

谷氨酰胺合成酶（Spot C7）是一種控制氮代謝的酶，能夠吸收無機氮轉(zhuǎn)換為有機氮，能夠催化銨離子和谷氨酸相結(jié)合產(chǎn)生谷氨酸鹽，并伴隨有能量的消耗，而給植物供給營養(yǎng)[32]。研究表明，木薯塊根淀粉含量與谷氨酰胺合成酶是正相關(guān)[33]。本研究所鑒定的谷氨酰胺合成酶在木薯塊根木質(zhì)部的表達量高于韌皮部，結(jié)合已有的研究初步說明木薯塊根木質(zhì)部淀粉積累過程中，需要大量表達谷氨酰胺合成酶來調(diào)節(jié)體內(nèi)的氮代謝，促進光合產(chǎn)物的運輸和淀粉的有效合成及積累。

18 ku熱激蛋白Ⅰ（Spot C5）在木質(zhì)部中相對上調(diào)表達，已有研究發(fā)現(xiàn)其與植物的水分脅迫應(yīng)答及耐旱特性相關(guān)[34]。該蛋白主要作為分子伴侶執(zhí)行功能，除了與植物水分脅迫應(yīng)答相關(guān)外，小分子熱激蛋白還可以提高植物的耐寒性[35]，為提高木薯的抗寒能力提供了一個新思路。

木薯塊根主要是由于少數(shù)（約3～10條）纖維狀須根的次級生長活動造成[36]，形成層活動分化出大量次生薄壁細(xì)胞，使得根部迅速膨大[37]，與此同時光合作用產(chǎn)生的大量糖類運輸至薄壁細(xì)胞中，以淀粉形式積累貯藏。在此過程中，木薯塊根的韌皮部和木質(zhì)部的蛋白表達發(fā)生了相應(yīng)變化，從而調(diào)節(jié)淀粉積累過程的有效進行。雖本研究結(jié)果為研究木薯塊根淀粉積累調(diào)控提供了一定的線索，但仍有許多差異蛋白未鑒定，這些蛋白中可能也存在著許多有價值的關(guān)鍵蛋白，需要在今后的研究中進一步做功能鑒定分析。

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