HPLC—DAD測定大茶樹和小茶樹的西湖龍井茶中EGCG的含量

蒲首丞　潘立新　葉玲仙　陸方明

摘要[目的] 采用HPLCDAD對西湖龍井茶中的表沒食子兒茶素沒食子酸酯（ EGCG） 的含量變化進行分析。[方法] 采用Agilent C18色譜柱（4.6 mm ×150 mm， 5 μm），流動相：甲醇∶水（2%乙酸）15∶85；流速：1.0 ml/min；檢測波長：276 nm；柱溫：35 ℃。[結(jié)果] EGCG線性范圍為0.152～3.040 μg，相關(guān)系數(shù)r為1，平均回收率97.61%，RSD為6.61%。[結(jié)論] 該方法精密度、準確度良好，穩(wěn)定性高，能簡便、快速地測定大小茶樹的西湖龍井茶中的EGCG含量。

關(guān)鍵詞HPLCDAD；西湖龍井茶；表沒食子兒茶素沒食子酸酯；含量

中圖分類號S571文獻標識碼A文章編號0517-6611（2014）12-03714-02

基金項目浙江省教育廳項目（Y200908478）。

作者簡介蒲首丞（1978-），男，浙江杭州人，講師，博士，從事天然產(chǎn)物化學(xué)研究。

龍井茶位列我國十大名茶之一，具有1 200多年歷史。西湖龍井茶產(chǎn)于浙江杭州西湖區(qū)[1]。兒茶素作為西湖龍井主要的生物活性成分之一，主要化合物包括表兒茶素（EC）、表沒食子兒茶素（EGC）、表兒茶素沒食子酸酯（ECG） 和表沒食子兒茶素沒食子酸酯（EGCG）等[2-3]。EGCG是西湖龍井中含量較高的兒茶素，現(xiàn)代研究表明，EGCG具有顯著的抗氧化、抗腫瘤、抗突變和心血管疾病等作用，能夠提高人體免疫功能，抑制腫瘤的生長，抑制肝脂和膽固醇的增長，對金黃色葡萄球菌等細菌有極強的抑制作用[4-5]。西湖龍井的明前開山茶一直都是研究人員和茶葉加工企業(yè)關(guān)注的焦點，而且明前開山茶價格也十分昂貴。該研究采摘的西湖龍井茶為杭州西湖龍井茶原產(chǎn)地龍塢保護區(qū)的明前開山茶。目前對EGCG的分離提取及功效研究的文獻較多，但對明前西湖龍井茶青葉中EGCG含量的研究鮮有文獻報道。筆者通過對龍塢同一保護區(qū)的大茶樹和小茶樹的西湖龍井茶EGCG含量測定，為人們的實際需要提供參考，為以茶葉加工企業(yè)提供試驗依據(jù)。

1材料與方法

1.1材料研究對象：西湖龍井茶青葉，杭州龍塢明前采集。主要試劑：表沒食子兒茶素沒食子酸酯（EGCG），上海源葉公司，含量98%；甲醇為色譜純試劑；其他試劑均為分析純；試驗用水為艾柯超純水。主要儀器：Agilent1260型高效液相色譜儀，Agilent公司，包括DAD 檢測器，Agilent chem工作站；電子分析天平，賽多利斯；恒溫水浴鍋，精宏公司；真空干燥箱，天呈；RA25AA旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，上海亞榮。

1.2 方法

1.2.1色譜條件。色譜柱為Agilent C18色譜柱（4.6 mm ×150 mm，5 μm），流動相：甲醇∶水（2%乙酸）15∶85；流速：1.0 ml/min；檢測波長：276 nm；柱溫：35 ℃。

1.2.2 對照品溶液的制備。精密稱取經(jīng)真空干燥24 h處理后的15.2 mg表沒食子兒茶素沒食子酸酯對照品，置于100 ml容量瓶中，加水溶解并定容至刻度，搖勻，即得對照品溶液，于冰箱中低溫保存?zhèn)溆?。表沒食子兒茶素沒食子酸酯濃度為152 μg/ml。

1.2.3 供試品溶液的制備。分別準確稱取樣品約1.0 g，置于500 ml平底燒瓶中，加入100 ml 80 ℃水，置85 ℃的水浴中加熱回流1 h，共水浴加熱回流2次，經(jīng)過濾收集濾液，最后減壓濃縮濾液，定容至50 ml容量瓶中，搖勻，0.45 μm微孔濾膜過濾，取續(xù)濾液待測。

2結(jié)果與分析

2.1目標組分的確定 按照“1.2”項色譜條件下，對照品溶液和供試品溶液分別進樣10 μl，DAD檢測器檢測分析，在波長為276 nm下是EGCG的最大吸收，DAD檢測器檢測記錄儲存200～400 nm的所有色譜，對照品與樣品茶的EGCG的保留時間都在8.3 min（圖1）。

2.2流動相的選擇 測定EGCG含量，流動相為甲醇∶水系統(tǒng)和甲醇∶水（2%乙酸）系統(tǒng)，進行對比試驗發(fā)現(xiàn)，2個系統(tǒng)都能使EGCG分離開來（分離度R>1.5），甲醇∶水系統(tǒng)中EGCG嚴重拖尾，而甲醇∶水（2%乙酸）系統(tǒng)中EGCG峰形比較好，故選擇甲醇∶水（2%乙酸）15∶85為該測定方法的流動相系統(tǒng)。

2.3線性關(guān)系試驗 精密吸取上述對照品溶液分析，進樣量分別為2、4、6、8、10、12、16、20 μl，測其峰面積，以標準溶液的進樣量X為橫坐標，以峰面積Y為縱坐標作圖，得到線性回歸方程為Y=774.33X-10.585，相關(guān)系數(shù)為r為1，表明EGCG在0.152～3.040 μg范圍內(nèi)與峰面積之間線性關(guān)系良好。

2.4精密度試驗 精密吸取“1.2.2”項配制的對照品溶液10 μl進樣，依上述色譜條件測定，重復(fù)進樣5次，測定EGCG峰面積，RSD為0.38%，結(jié)果表明，儀器具有較好的精密度。

2.5穩(wěn)定性試驗 分別取“1.2.3”項制備的大茶樹青葉、小茶樹青葉2種供試樣品溶液10 μl，于0、2、4、6、8、10 h進樣測定，各重復(fù)進樣6次，測定目標組分的含量，以考察供試品溶液的穩(wěn)定性，10 h大茶樹茶和小茶樹樣品EGCG組分RSD分別為2.8%、3.1%。結(jié)果表明，供試品溶液在10 h內(nèi)基本穩(wěn)定。

2.6加樣回收試驗 精密稱取已知含量的茶樣品6份，分別精密加入一定量EGCG對照品，按供試品溶液制備方法制備樣品溶液，依上述色譜條件測定含量。結(jié)果顯示，該方法具有較高的準確度（表1）。注：A.對照品；B.大茶樹；C.小茶樹；1.EGCG。

2.7樣品中EGCG含量的測定 按照“1.2.3”項制備3個大茶樹和3個小茶樹西湖龍井茶葉供試品溶液，按“1.2.1”項色譜條件進樣測定，每樣重復(fù)進樣3次，求峰面積均值，按外標法計算其含量。大茶樹中EGCG 的含量為：14.151 mg/g（RSD 0.56%），15.534 mg/g（RSD 0.66%），13.526 mg/g（RSD 0.75%），平均含量14.404 mg/g；小茶樹中EGCG 的含量為：8.645 mg/g（RSD 0.56%），9.326 mg/g（RSD 0.59%），8957 mg/g（RSD 0.63%），平均含量8.976 mg/g。

3結(jié)論

采用HPLCDAD 法對大茶樹和小茶樹的西湖龍井茶中的EGCG 進行了含量分析，試驗結(jié)果表明，大茶樹西湖龍井茶青葉中EGCG平均含量為14.404 mg/g，含量較高；小茶樹西湖龍井茶青葉中EGCG平均含量為8.976 mg/g，比大茶樹含量低。該試驗為人們選擇茶葉原料提供參考，為企業(yè)對原料等級劃分提供了試驗依據(jù)。該測定茶中EGCG含量的方法操作簡單、重現(xiàn)性好、分析結(jié)果準確可靠，可用于原料茶的質(zhì)量控制。

參考文獻

[1] 張龍，王飛娟，潘家榮，等.近紅外光譜和模式識別技術(shù)在西湖龍井與浙江龍井茶葉鑒別中的應(yīng)用[J].紅外，2012，33（3）：44-48.

[2] 盧濤，蘭先秋，朱斌，等.不同茶多酚中兒茶素的測定及柱層析法提取EGCG的比較[J].化工進展，2008，27（5）：746-752.

[3] 王霞，高麗娟，林炳昌.表沒食子兒茶素沒食子酸酯（EGCG）的分離與制備[J].食品科學(xué)，2005，26（9）：242-245.

[4] 梁曉嵐，陳春林.茶多酚的研究進展[J].茶葉科學(xué)技術(shù)，1994（1）：6-8.

[5] 張瑜，鄒國林，彭少君.表沒食子兒茶素沒食子酸酯研究進展[J].氨基酸和生物資源，1998，20（4）：51-54.