非小細(xì)胞肺癌組織中Axin、β連環(huán)蛋白和p53的表達(dá)及意義

侯興華 李春楊 金素芬

【摘 要】目的：探討Axin（axis inhibition protein）β-連環(huán)素（β-catenin）和p53在非小細(xì)胞肺癌組織中的表達(dá)情況，及它們相互聯(lián)系和意義。方法：采用免疫組織化學(xué)方法（S-P法）對(duì)50例肺癌組織Axin、β-catenin和p53蛋白的表達(dá)進(jìn)行檢測(cè)，同時(shí)以癌旁正常肺組織作為對(duì)照。結(jié)果：在肺癌組織中，Axin陽(yáng)性表達(dá)率為58%（29/50），其中有兩例細(xì)胞核表達(dá)。肺癌組織Axin表達(dá)顯著低于癌旁正常肺組織（P<0.001）。Axin的表達(dá)，在高分化肺癌的陽(yáng)性率（82.4%，14/17）和中分化肺癌的陽(yáng)性率（ 48.1%， 13/27） 明 顯 高 于 低 分 化肺癌 的 陽(yáng) 性 率（33.3%，2/6）（P =0.028）。Ⅰ-Ⅱ期陽(yáng)性率（69.7%，23/33）高于III-IV期陽(yáng)性率（35.3%，6/17）（P=0.020）。無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的陽(yáng)性率（21/30，70%）明顯高于有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的陽(yáng)性率（40%，8/20）（P=0.035）。β-catenin細(xì)胞膜表達(dá)減少，出現(xiàn)細(xì)胞質(zhì)表達(dá)為54%（27/50），均不表達(dá)為20%（10/50）。p53異常表達(dá)率為80%（40/50）。Axin表達(dá)與β-catenin細(xì)胞質(zhì)表達(dá)及p53異常表達(dá)負(fù)相關(guān)（P<0.001）。50例肺癌組織患者Axin表達(dá)陽(yáng)性組平均生存時(shí)間顯著高于Axin表達(dá)陰性組平均生存時(shí)間（P<0.05）。結(jié)論：在肺癌組織Axin表達(dá)顯著降低，Axin 的表達(dá)與腫瘤細(xì)胞的分化程度、TNM分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況密切相關(guān)， Axin陽(yáng)性表達(dá)者預(yù)后明顯好于陰性者。

【關(guān)鍵詞】肺腫瘤；Axin；β-catenin；p53；免疫組織化學(xué)

【中圖分類號(hào)】R734.2 【文章編號(hào)】1004-7484（2014）04-1937-01

肺癌是我國(guó)發(fā)病率最高的惡性腫瘤，本研究通過檢測(cè)肺癌組織中Axin，β-catenin，p53的蛋白表達(dá)情況，旨在探討Axin表達(dá)與非小細(xì)胞肺癌臨床病理特征的關(guān)系。

1 材料和方法

1.1 研究對(duì)象 收集2006年1月-2013年5月胸外科手術(shù)標(biāo)本肺癌及癌旁正常組織各50例，其中男33例，女17例，年齡41-76歲，平均年齡60歲。根據(jù)第7版AJCC癌癥分期手冊(cè)，I期28例，II期5例，III期16例，IV期1例。腺癌31例，鱗癌19例。高分化17例，中分化27例，低分化6例。有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移20例，無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移30例。術(shù)前均未接受過放、化療。隨訪期間為手術(shù)日期開始到由于復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移而死亡或隨訪截止日期為止。

1.2 試劑及實(shí)驗(yàn)方法 兔抗人Axin多克隆抗體（SC-14029）購(gòu)自Santa Cruz生物技術(shù)公司，鼠抗人β-catenin單克隆抗體（C19220-050）購(gòu)自B.D.公司。即用型鼠抗人p53單克隆抗體（Kit-0010-2）及SP超敏免疫組化試劑盒（KIT-9710）和DAB酶底物顯色試劑盒（DAB-0031）購(gòu)自福州邁新生物技術(shù)公司。肺癌及癌旁正常組織石蠟包埋并連續(xù)切片，厚度3-4μm，脫蠟，水化，按S-P法常規(guī)步驟進(jìn)行。一抗分別為Axin（1：50）和β-catenin（1：200）。以磷酸鹽緩沖液（Phosphate Buffer Saline，PBS）代替一抗作為陰性對(duì)照，已知陽(yáng)性片為陽(yáng)性對(duì)照。

1.3 結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn) 每張切片在光鏡下隨機(jī)選取5個(gè)高倍視野，計(jì)數(shù)100個(gè)細(xì)胞的陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)。Axin正常陽(yáng)性表達(dá)定位于細(xì)胞漿，參考Xu等[1]Axin陽(yáng)性細(xì)胞率<40%為陰性，≥40%為陽(yáng)性。β-catenin正常陽(yáng)性表達(dá)定位于細(xì)胞膜，膜陽(yáng)性瘤細(xì)胞數(shù)≥90%為細(xì)胞膜陽(yáng)性表達(dá)，細(xì)胞質(zhì)陽(yáng)性瘤細(xì)胞數(shù)>10%為細(xì)胞質(zhì)陽(yáng)性表達(dá)。P53正常陽(yáng)性定位于細(xì)胞核，p53陽(yáng)性率<5%為陰性，≥5%為陽(yáng)性。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 應(yīng)用SPSS for windows 19.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。采用Pearson卡方檢驗(yàn)和似然比法比較肺癌組織中Axin、β-catenin、p53表達(dá)的差異和相互關(guān)系以及Axin表達(dá)與臨床病理特征之間關(guān)系。用Kaplan-Meier法（Log-Rank檢驗(yàn)）進(jìn)行生存分析。P<0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 Axin在正常肺組織、非小細(xì)胞肺癌組織的表達(dá) 在正常肺組織中Axin有較高水平的表達(dá)（100%，50/50）。而在肺癌組織中其表達(dá)下降，陽(yáng)性率為58%（29/50）。其中細(xì)胞核表達(dá)率為4%（2/50）。

2.1 Axin 的表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系 腫瘤細(xì)胞的分化程度、TNM分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況密切相關(guān)。高分化的陽(yáng)性率（82.4%，14/17）和中分化的陽(yáng)性率（ 48.1%， 13/27） 明 顯 高 于 低 分 化 的 陽(yáng) 性 率（33.3%，2/6）（P =0.028）。Ⅰ-Ⅱ期陽(yáng)性率（69.7%，23/33）高于III-IV期陽(yáng)性率（35.3%，6/17）（P=0.020）。無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的陽(yáng)性率（21/30，70%）明顯高于有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的陽(yáng)性率（40%，8/20）（P=0.035）。Axin的表達(dá)與患者年齡，性別，肺癌組織學(xué)分型無(wú)關(guān)。

2.3 非小細(xì)胞肺癌組織中β-cateninp和53蛋白的表達(dá) 肺癌組織中β-catenin細(xì)胞膜表達(dá)減少，出現(xiàn)細(xì)胞質(zhì)表達(dá)（54%，27/50），均不表達(dá)（20%，10/50）。p53蛋白過表達(dá)，（80%，40/50）。Axin表達(dá)與β-catenin細(xì)胞質(zhì)表達(dá)和p53表達(dá)負(fù)相關(guān)（P<0.05）。

2.4 Axin 的表達(dá)與非小細(xì)胞肺癌患者生存時(shí)間的分析50例肺癌組織患者生存時(shí)間為2～72個(gè)月，平均生存時(shí)間為34.278±4.303個(gè)月，中位生存時(shí)間為30.000±3.405個(gè)月。Axin表達(dá)陰性組平均生存時(shí)間為16.741±3.818個(gè)月，中位生存時(shí)間為14.000±3.615個(gè)月；Axin表達(dá)陽(yáng)性組平均生存時(shí)間為36.992±4.716個(gè)月，中位生存時(shí)間為30.000±6.064個(gè)月。統(tǒng)計(jì)分析表明，在肺癌組織中， Axin陽(yáng)性表達(dá)者預(yù)后明顯好于陰性者（P=0.031）。

3 討論

Wnt信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路可調(diào)控包括肺組織在內(nèi)的細(xì)胞的生長(zhǎng)、遷移和分化，許多文獻(xiàn)也報(bào)道了非小細(xì)胞肺癌發(fā)生中存在著Wnt信號(hào)通路異常激活[2]。因此，本研究檢測(cè)了Wnt信號(hào)通路重要分子β-catenin，Axin及突變型p53 在非小細(xì)胞肺癌中的表達(dá)情況，通過其表達(dá)與臨床病理特征的比較，探討Axin表達(dá)與肺癌發(fā)生發(fā)展的關(guān)系。細(xì)胞正常生長(zhǎng)時(shí)，細(xì)胞質(zhì)內(nèi)酪蛋白激酶CKIa和糖原合成激酶GSK-3β以三明治的模式將β-catenin夾在中間， 三者結(jié)合在Axin上。細(xì)胞內(nèi)的β-catenin總保持較低的水平。Axin作為構(gòu)架蛋白，能與腫瘤抑制因子腸腺息肉瘤蛋白（adenomatous polyposis coli，APC）和糖原合成激酶GSK-3β形成APC多蛋白復(fù)合體，介導(dǎo)β-catenin磷酸化，促進(jìn)β-catenin 的降解。磷酸化的Axin結(jié)合β-catenin的能力更強(qiáng)，Axin還可作為一種分子伴侶協(xié)同β-catenin從細(xì)胞核轉(zhuǎn)移至細(xì)胞質(zhì)，促進(jìn)β-catenin在細(xì)胞質(zhì)中的降解。而當(dāng)Wnt 信號(hào)被異常激活時(shí)，GSK-3β不能正常磷酸化β-catenin， 導(dǎo)致β-catenin不能被泛素識(shí)別，從而不能被蛋白酶復(fù)合體降解。細(xì)胞質(zhì)中沒有被降解而過量積累的β-catenin會(huì)轉(zhuǎn)移到細(xì)胞核內(nèi)，與核內(nèi)轉(zhuǎn)錄因子LEF/TCF家族成員結(jié)合，刺激一系列癌基因的過量表達(dá)，引起細(xì)胞異常增殖，最終致使細(xì)胞發(fā)生癌變。Axin作為Wnt信號(hào)通路中最重要的負(fù)性調(diào)節(jié)因子，多種腫瘤中可檢測(cè)到其表達(dá)減少[3]。

本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)Axin陽(yáng)性表達(dá)與β-catenin細(xì)胞質(zhì)表達(dá)負(fù)相關(guān)，與β-catenin在細(xì)胞膜表達(dá)正相關(guān)，符合上述調(diào)控機(jī)制。在肺癌組織中，Axin的表達(dá)與非小細(xì)胞肺癌的分化、分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況明顯相關(guān)，而與肺癌組織學(xué)分型無(wú)關(guān)，這與其他學(xué)者研究結(jié)果基本一致。徐洪濤等[6]發(fā)現(xiàn)Axin與β-catenin在少數(shù)非小細(xì)胞肺癌的細(xì)胞核中表達(dá)，在本研究，兩例肺鱗癌中出現(xiàn)Axin細(xì)胞核表達(dá)。可能與觀測(cè)病例數(shù)較少有關(guān)。這有待今后大樣本分析及深入研究來(lái)證實(shí)。

本研究發(fā)現(xiàn)Axin表達(dá)與p53的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)。有研究表明Axin可與p53相互結(jié)合并通過同源結(jié)構(gòu)域相互作用蛋白激酶2（Homeodomain-interacting Protein Kinase-2，HIPK2）激活野生型p53實(shí)現(xiàn)其腫瘤抑制因子作用 。Axin還能與p53一起下調(diào)β-catenin。Wnt信號(hào)通路中過量積累的β-catenin激活p53， 活化的p53能誘導(dǎo)構(gòu)架蛋白Axin轉(zhuǎn)移到胞漿降解β連環(huán)蛋白復(fù)合體， 導(dǎo)致β-catenin降解，說明Axin與野生型p53協(xié)同發(fā)揮腫瘤抑制因子的作用。

Axin表達(dá)與肺癌患者預(yù)后有關(guān)，陽(yáng)性表達(dá)患者預(yù)后好。因而Axin表達(dá)對(duì)預(yù)后判斷有參考意義。

參考文獻(xiàn)

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